Введение к работе
к * *
Актуальность исследования.Более половины так называемого естественного роста рака молочной железы /РМЖ/ происходит скрытно,вне досягаемости диагностических возможностей маммологического скрининга [Lundgren В.1977]. Основные надежды,в связи с этим, возлагаются на разработку новых методов ранней диагностики рака,в том числе с использованием опухолевых маркеров [Аничков Н.М..Зиновьев А.С,,1993;Волченко Н.Н.и со-
авт.,1996].Среди последних особое место принадлежит альфа -о
макроглобулинам /AM/ [Zorin N. А.е.а.1992].
Несмотря на информативность использования AM в диагностике РМЖ, морфологическое изучение протеинов лишь намечается. Отсутствуют сведения о роли AM в морфогенезе РМЖ, о распределении AM в паренхиме и строме рака,в том числе об особенностях иммунодетекции /ИД/ AM в тканях РМЖ в связи с постлучевым патоморфозом,Отсутствуют сведения об участии AM в морфогенезе РМИ,особенно его ранних стадий.Не прослежена иммуногистохимическая эволюция белков в тканях интактной молочной железы /МЖ/,доброкачественных и злокачественных опухолей МЖ.Недостаточно освещена морфогенетическая роль кровеносного сосудистого русла /КСР/ и его клеточного микроокру-кения в раке,а также их роль в динамике AM в тканях Ш,фиброаденомы /ФА/ и РМЖ.
Таким образом,иммуногистохимия /ИГХ/ AM в тканях PMS до и после лучевой терапии /ЛТ/ не изучена,что определяет актуальность нашего исследования.
Объект исследования - депарафинированные гистологичес-
- 4 -кие срезы операцкошо-Оиолсийного материала 131 .наблюдения РМЖ до и после ЛТ.21 наблюдения ФА и тканей 21 интактной от опухолей .МЖ.
Предмет исследования - ИГХ AM.
Цель исследования - изучить ИГХ AM в паренхиме и строме
РМЖ до и после ЛТ,выявить их роль в морфогенезе и прогнозе
8аболевания.
Задачи исследования: 1.Разработать методики забора,фик-о
сации и ИГХ исследования AM в операционно-биопсийном и архивном' (парафиновые блоки) материале ФА и РМЖ,а также тканях интактной MS. 2.Изучить характер распределения AM в сравнении с плазминогеном /ПГ/. и фибриногеном /ФГ/ в тканях нормальной Ш,ФА,РМЖ до и после ЛТ,в том числе в наблюдениях с большей и меньшей чем пять лет выживаемостью больных после предоперационной ЛТ. З.Морфомотрически изучить площадь паренхимы и стромы,а также площадь и удельную плотность гис-тоструктур стромы РМЖ до и после ЛТ в сравнении с ФА и интактной MS. 4.Провести гистометрическое изучение клеточного периваскулярного микроокружения вокруг артериол,венул и капилляров в ткани РМЖ до и после ЛТ в сравнении с ФА и интактной МЖ. 5. Оценить роль КСР и его клеточного микроокруже-ния в морфогенезе РМЖ И'динамике AM. 6.На основании анализа выявленных особенностей исследуемых структур в тканях РМЖ до и после ЛТ в сравнении с ФА и интактной МЖ оценить результаты и разработать критерии,способствующие более полному пони-манию вопросов морфогенева и повышающие точность морфологической диагностики рака,дифференциальной диагностики ФА и РШ, оценки адекватности ЛТ и прогнозирования рака.
Научная гипотеза - AM являются неспецифическими марке-
- 5 -рами опухолей МЖ при ИГХ исследовании гистологических срезов операционно-Сиопсийного материала онкообразований железы.
Методологические основы диссертационного исследования базируются на последовательном определении уровней ИГХ детекции AM в паренхиматозных и стромальных компонентах тканей1, начиная с интактной от опухолей МЖ,далее ФА, а затем FW3K до и после ЛТ с целью изучения динамики и особенностей распределения AM в этих тканях,определения их роли в морфогенезе рака,выявления критериев,повышающих точность морфологической диагностики РМЖ,дифференциальной диагностики ФА и РМЖ,оценки эффективности ЛТ^ составления прогноза заболевания.
Методы исследования - гистология,гистохимия,ИГХ и гис-тометрия исследумого материала.
Организация исследования.Исследование проведено в морфологическом отделе центральной научно-исследовательской лаборатории Новокузнецкого ордена Трудового Красного Знамени института усовершенствования врачей и Смоленском оОластном институте патологии.Диссертационная работа выполнена по научному плану ЦНИЛ Новокузнецкого ГИДУВа и связана с проблемой "Ингибиторы протеиназ/роль в норме и при патологических процессах".Номер государственной регистрации 01.9.40 004214,УДК 577,15.Номер комплексной темы в плане института -100/к.
Научная новизна.Представленные в диссертации данные и
их теоретическое обобщение можно рассматривать как новое научное направление: ИГХ AM в раке в сравнении с доброкачественной опухолью (ФА) и интактной тканью органа (МЖ) - одна из основных частей материального субстрата критериев морфологической диагностики рака и дифференциальной диагностики
ФА и РМЖ,оценки эффективности предоперационной ЛТ рака и прогнозирования заболевания.
Выявлено,что альфаг-гликопротеин /АБГ/ в интактной МЖ присутствует в минимальных количествах и ингибирование про-теиназ выполняет альфаг-макроглобулин /МГ/,локализуясь в основном в стромальном компоненте железы. Впервые показано, что в ФА наблюдается резкое повышение ИД МГ в гиперплазиро-
ванном эпителии. В РМЖ наблюдается падение ИД МГ в раковом
о эпителии в сочетании с резким усилением присутствия в паренхиме 'АБГ,который в раке начинает выполнять основные функции по ограничению активности протеиназ. В РМЖ после ЛТ Наблюдается снижение ИД АБГ и повышение МГ опухолевой тканью.Заинтересованность AM в опухолевом росте позволяет квалифицировать их как неспецифические маркеры онкообразований МЖ,
Качественно новым является проведение ряда морфометри-ческих исследований гистоструктур РМН до и после ЛТ,а также оценка уровней ИД искомых белков в паренхиме и различных структурах стромы МЖ.ФА.РМЖ до и после ЛТ. При этом показаны статистически достоверные различия площади паренхимы и стремы в Ш, ФА, РМН до и после ЛТ.площади и удельной плотности КСР,лимфоцитов /ЛФ/,фибробластов /ФБ/,макрофагов /Ш/,плазматических клеток /ПК/ и полиморфнойдерных лейкоцитов /ПЯЛ/ в исследуемых тканях Ш и се онкообразований.Обнаружена отличительные особенности ИД ФГ и ПГ в тканях MB,ФА,РМЖ до и после ЛТ.Выявлено,что ИД AM в кровеносных сосудах,в отличие от особенностей динамики AM в паренхиме и некоторых гистост-руктурах стремы рака;ФА и интактной MS, имеют большее посто--янство в разных нозологиях. Это подтверждает важную роль КСР в морфогеневе РМН,в. частности в динамике. AM.
Впервые гистометрически изучено клеточное периваскуляр-ное микроокружение,представленное ФБ,ФЦ,ЛФ,ПК,МФ и ПЯЛ.Обнаружены статистически достоверные различия количества ФЦ и ФБ,расположенных вокруг артериол в тканях ФА и РМК.Показаны отличия КСР интактной МЖ.ФА и РМЖ до и после ЛТ.а также характерные особенности ангиогенеза и неоваскулогенеза в раке. Основными отличительными особенностями КСР РМЖ от доброкачественных опухолей и интактной МЖ являются наличие неоваскулогенеза и гетерогенности сосудов МЦР,включая сосуды незрелого типа.
Морфологически подтверждено участие меток лимфо-плаз-моклеточного инфильтрата /ЛПКИ/ строми опухоли в динамике АМ.ИГХ выявлены различия ОД AM в ЛФ, ПК и МФ стромы ФА и РМЖ до и после ЛТ.Полученные результаты позволяют полагать,что клетки ЛПКИ стромы опухолей участвуют в биосинтезе, а сосуды в транспорте AM от КСР к регионам опухоли и обратно.
Положения выносимые на защиту. 1.ИГХ исследование AM возможно в депарафинированных гистологических срезах как свежефиксированной ткани, так и архивных парафиновых блоков операционно-биопсийного материала многолетней давности,фиксированного 15%-ным нейтральным водным раствором формалина. 2.В тканях МЖ.ФА.РШ до и после ЛГ имеются существенные различия уровней содержания AM.В ФА,по сравнению с МЖ,отмечается повышение ИД МГ в паренхиме.В развитом раке наблюда-
ется падение детекции МГ и увеличение ИД АБГ в паренхиматозном компоненте.Эффективная ЛТ тормозит биосинтез раковым эпителием АБГ. З.КСР выполняет транспортную роль в динамике AM начиная с интактной МЖ,что проявляется большей стабильностью уровней ИД белков в стенках и содержимом кровеносных
-8--. сосудов,чем в других структурах тканей МЖ,ФА,РМН до и после ЛТ. 4.Периваскулярное клеточное микроокружение является динамичным отражением паренхиматозно - стромальных отношений, участвует в трансформациях AM,имеет отличия в МЖ и ее опухолях. 5.Различия паренхиматозно - стромальных отношений в РЫЖ до и после ЛТ.ФА и интактной МЖ (статистически достоверные различия величин площадей паренхимы,стромы,некроза;количества паренхиматозных клеток,фиброцитов и фибробластов,расположенных вокруг артериол в ФА и РШ; уровней ИД AM в ФА,РМЖ до и после ЛТ) могут выступать в качестве критериев, повышающих точность морфологической диагностики,оценки эффективности ЛТ и индивидуального прогнозирования опухолей МЖ.а AM являются неспецифическими маркерами опухолей МЖ в гистологических-срезах.
Теоретическая значимость заключается в том,что результаты работы обосновывают необходимость изучения морфогенеза рака,адекватности ЛТ и оценки прогноза РМЖ с позиций особенностей ИД AM в паренхиме и строме опухоли.
Научно-практическое значение определяется тем,что проведенные исследования подтвердили иммунологические данные о том,что AM являются неспецифическими маркерами опухолевого роста и показали возможность использования их с э---:": целью в .патоморфологической практике.
Выявленные особенности шмуноиероксидазного окрашивания . AM в паренхиме и строме ФА и РМЖ. до и после ЛГ способствуют повышению точности морфологической диагностики рака.диффе- ' ренциальной диагностики ФА и РМЖ,составления прогнозам его. индивидуализации на основе ИГХ оценки эффективности. ЛТ. '.'
Разработка методик забора, фиксации.". и ИГХ исследования
- 9 -операционно-биопсииного материала и архивных блоков ФА и РМЖ до и после ЛТ для ИД AM адресована непосредственно патологоанатомам. Показано,что фиксацию операционо-биопсийного материала можно проводить в обычном для практики клинических патологов 15%-ном нейтральном водном растворе формалина; гис-тойрепараты после, иммуннопероксидазного окрашивания могут быть докрашены гематоксилином и эозином,заключены в бальзам и храниться в таком виде длительное время без снижения качества окраски.
Наши исследования [Козлов Д.В.и соавт.,1995] ИД AM в опухолях различцрйлокализации позволяют утверждать,что основные сведения об особенностях распределения AM в паренхиме и строме РМЖ можно экстраполировать на опухоли разной локализации.
Апробация работы.Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:1.Заседании проблемной комиссии "Морфология опухолей" Научного Совета по комплексной программе "Злокачественные новообразования" при Президиуме Российской Академии Медицинских наук (Москва,1995),заседаниях Ученого Совета Новокузнецкого института усовершенствования врачей (1993-1995 гг.).2.28-й научно-практической конференции врачей Ульяновской области "Новое,прогрессивное в практику здравоохранеия",(1993).3.Заседании Ученого Совета Смоленского областного института патологии (1995).4.Заседании Кеие-
ровской областной ассоциации патологоанатомов (1995). 5.Результаты работы доложены на заседании кафедры патологической анатомии Челябинской медицинской академии (1996).6.3-й Межрегиональной научно-практической конференции патологоанатомов Урала и.Западной Сибири,Челябинск,1996. 7.Всероссийской
-ю--
конференции "Организация паллиативной помощи и методы лече
ния больных с распространенными формами злокачественных но
вообразований" ,Москва,1995.8.Всероссийской конференции "Им
мунологический мониторинг патологических состояний и иммуно-
реабилитация",Москва,1995.9.Всероссийской конференции "Опу
холи висцеральных локализаций.Ранняя диагностика,лече
ние" .Томск, 1995. 10. Всероссийской конференции "Совершенство
вание методов профилактики и диагностики злокачественных но
вообразований", Москва, 1995. 11.Конференции с международным
участием "Экология и общественное здоровье населения".Ново
кузнецк, 1994.12. 1-ом Международном конгрессе "Иммунодиагнос
тика и ' иммунотерапия",Витебск,1995.13.1-st International
Congress Immunorenabilitation",Sochi. Russia, 1994.
14.XXU-nd Meeting "Basic Research and Clinical Application
in Human Tumor Immunology and Molecular Biology", September
18-22,1994,Groningen,The Netherlands.15.International sympo
sium "Immunology of reproduction",Kiev,Ukraina,19-23 Octo
ber ,1993.16.IX-th International Congress of Immunology, San
Francisco,1995. 17.Работа апробирована на заседании Ученого
Совета института усовершенствования врачей (Новокуз
нецк, 26 марта,1996). ' ,
Публикации.По основным материалам диссертации поданы, шесть заявок на изобретения,опубликованы 30 научных работ и издано учебно-методическое пособие.
Внедрение результатов исследования. Частично материалы диссертации отражены в учебно-методическом пособии "Иммуно-гистохимическая диагностика и дифференциальная диагностика, опухолей . молочной железы",Новокузнецк,1994.-12 С.
Гистологические,гистометрические и ИГХ критерии диаг-.
- и -
ностики и дифференциальной диагностики ФА и РМЖ до и после ЛТ, оценки эффекта ЛТ и прогноза РМЖ внедрены в практику Кемеровского и Новокузнецкого патологоанатомических бюро,материалы диссертации излагаются при чтении лекций на кафедрах патологической анатомии МАЛО (г.Санкт-Петербург),медицинских академий Смоленска и Кемерова,что документируется соответствующими актами о внедрении.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, глав "Альфа - макроглобулины при раке молочной делевы и некоторые аспекты морфогенеза заболевания (об8ор литературы)", "Онконозоло^ическая характеристика больных с поражением молочной железы и методы исследования", пяти глав результатов собственных исследований,заключения.выводов,практических рекомендаций,указателя литературы и приложения. Работа изложена на 320 (в том. числе приложение 72) страницах машинописи. Из них 175 страниц представлены рисунками,таблицами и указателем литературы. Текст диссертации иллюстрирован 41 рисунком и 43 таблицами,5 из которых находятся в тексте и 38 в приложении. Указатель литературы содержит 294 отечественных и 221.иностранных источника.