Введение к работе
Актуальность проблемы.
Эффективность лечения туберкулёза зависит ог ряда факторов, среди которых можно выделить основные: рациональный подбор АБП, создание оптимальных и безвредных их концентраций в очагах поражения и оптимальное время контакта лекарства с возбудителем СИ. М. Бондарев, 1973; А.Е. Рабухин , 1976; А. Г. Хоменко, 1980; J. Н. Grosset, 1989; L. P. Ormerod. , 1991, К. Bartmann, 1991]. Существенное влияние'на эффективность лечения оказывает также природная чувствительность макроорганизма к инфекции СИ. И. Авербах и соавт., 1976, В. Л. Морозов и соавт., 1982]. До настоящего времени отсутствует четкое представление о взаимодействии всех этих факторов, особенно на уровне микроорганизма и его клеточного микроокружения. Естественен интерес к созданию микромодели туберкулёзного поражения в культуре ткани и изучению на ней действия, основных противотуберкулёзных препаратов (ГГГЩ.
Метод культуры ткани является одним из наиболее информативных методов изучения изменений, происходящих на клеточном уровне. Еще в 20-х годах А. А. Шксимов, А. Д. Тимофеевский , пытались воспроизвести туберкулезные изменения в культуре ткани легких экспериментальных животных. Однако толкование наблюдавшееся ими феноменов было затруднительно в связи с низким техническим уровнем микроскопической техники того времени. Изучение действия отдельных ПГП на клеточные элементы культуры ткани из очага туберкулёзного воспаления проводилось в Московском НИИ туберкулёза СА.Е Буров, 1981; А. Д. Куничан, 19743. Было, в частности, показано действие различных концентраций изониа-зида на клетки очага туберкулёзного воспаления собак, кроликов, человека. В работах Л. Б. Хейфица и соавт. С1974] в условиях моделирования Езаимоотношений между микобактериями туберкулеза (ЫБТ) и пери-тонеальными макрофагами, изучалось действие различных противотуберкулезных препаратов. Crowl и соавт. С1989] на модели туберкулеза, вклгочаЗшую зараженные микобактериями туберкулеза моноциты крови человека в культуре, изучал действие пираэняамида и других противоту-?ерк:,'.-^зных препаратов. Однако эти модели нельзя считать достаточно адекватнім;' для изучения лекарственной интерференции на клеточном урегне, нескольку легочные макрофаги по езенм Функциональным харак-теркогика;.! СГЛИЧЗ.ОГСЯ ог других СМ.П Грачева, 1333;]. Креме того, :гкзг?.:-:-:.? ззтеры не научали на своих моделях газкс;!к;сгъ наЯлт-лаемых
.- 4 -ими аффектов от степени резистентности к туберкулёзной инфекции.
Поэтому представляется актуальным^ с научной и с практической точек зрения изучение влияния основных антибактериальных препаратов на клеточном уровне на такой модели, которая, отражала бы с одной стороны взаимодействие микобактерий туберкулёза и легочной ткани при их первичном контакте, а с другой стороны - заключала бы в себе клеточные элементы легочной ткани как устойчивых, так и чувствительных к туберкулезу животных, а. также человека.
В результате многочисленных исследований было показано, что сочетание изониазида, рифампицина и таразинамида является наиболее эффективным при лечении больных туберкулёзом С А. Г. Хоменко, 1980; V. Fox, 1983; D. A. Michison, 19923. Однако у части пациентов не удается достигнуть желаемого аффекта . Выявление причин этого и создание оптимальных режимов химиотерапии при обшэм и при местном применении препаратов является актуальной проблемой.
Цель работа Научное обоснование эффективности и безопасности использования основных ПГП на модели интактной и инфицированной ми-кобактериями туберкулёза культуры легочной ткани.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
-
Разработать модель культуры интактной легочной ткани разных видов животных и изучить на ней действия различных концентраций основных ИГЕ
-
Разработать и изучить модель первичной туберкулёзной инфекции в культуре легочной ткани разных видов животных, а также культуры инфицированной легочной ткани человека.
а Определить на данной модели влияния различных концентраций изониазида, рифампицина и пиразинамида при изолированном и комбинированном применении на жизнеспособность микобактерий туберкулеза.
Новизна исследования. Разработан и изучен модель культуры интактной легочной ткани разных видов лабораторных животных для изучения токсического действия лекарственных препаратов на клеточном уровне. Разработан и изучен модель первичной.туберкулёзной инфекции устойчивых и чувствительных к туберкулезу животных. Научное обосновано применения максимально эффективных и безвредных концентраций основных ПГП при изолированном и комбинированном их использовании. Діна количественная характеристика зависимости бактерицидного эффекта от {актеров продолжительности воздействия препаратов и их концентрации на микссактеркальнут! популяцию в культуре легочной ткани устейчйиих к чувгт ригельних к туберкулезу ливэтнкх.а тахлэ порал?н-
- Б -
ной туберкулёзом легочной ткани человека. Установлен влияние ПГП на_ отдельные аспекты клеточных иммунных взаимодействий, в частности, на межклеточные контакты между лимфоцитами и макрофагами.
Практическая значимость работы. Разработана модель культуры легочной ткани разных видов лабораторных животных для изучения токсического действия препаратов. Определены пороговые концентрации изо-ниазида, рифампицина и пиразинамида, не вызыващие необратимые повреждения в клеточных элементах интактной легочной ткани разных видов животных и пораженной туберкулёзом легочной ткани человека. Разработана модель первичной туберкулёзной инфекции в культуре легочной ткани устойчивых и чувствительных к туберкулёзу животных, позволяющая с учетом действия лекарственных препаратов на клеточном ігровне проводить рациональный поиск эффективных режимов химиотерапии.
Полученные данные о действии ПГП на микробную популяцию в культуре инфицированной легочной ткани свидетельствуют о принципиальной возможности выбора оптимальных соотношений концентрации препаратов и зремени их' воздействия в условиях разработанной модели первичной ту-5еркулезной инфекции легкого.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Разработана и изучена модель культуры интактной легочной гкани разных видов лабораторных животных, с помощью которой установ-гены пороговые концентрации иэониаэида, рифампицина и пиразинамида, iq .оказывающие токсического действия на клеточные элементы легкого.
-
Разработана и изучена модель первичной туберкулёзной инфек-щи легочной ткани устойчивых и чувствительных к туберкулёзу ЖИВОТНЫХ.
-
На модели первичной туберкулёзной инфекции культуры легочной кани устойчивых и чувствительных к туберкулёзу животных и поражен-юй туберкулезом легочной ткани человека установлены оптимальные со-!тношения концентрации препаратов и времени их воздействия как при [золироЕанном, так и при комбинированном их применени, дающие ыакси-іальньїїї бактерицидный эффект.
Апробация работы. Материалы диссертации представлены и обсухде-:ы на: конференции посвященной 70 летию МШИТ, 19S8r., на всесоюзной ручной конференции:" Актуальные проблемы лекарственной токсикологи ікупавнз, 19ЭЭ), на конфененции " Экспериментальная и клиническая згмзкг'.-ггил ГПП", 1992г. , на 2-ой научно-практической и каучнс-ието-ичг:ч;;> кгніереншш "человек - сСгкстео - природа" с участием д*я-
' - 6 -
телей науки стран СНГ и зарубежья, 1993г.
Внедрение в практику. Получена приоритетная справка на заявку на изобретение N5002388/14(066551). Модель первичной туберкулёзной инфекции в культуре интактной легочной ткани и способ ускоренной оценки роста микроколоний МВТ внедрены в практику работы Московского научно-исследовательского института U3 РФ.
Положения диссертации используются при обучении студентов методам современной химиотерапии туберкулёза.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 статьей.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, характеризующей материалы и методы исследования, 5 глав собственных исследований, заключения и библиографического указателя. Текст изложен на 179 страницах машинописи, иллюстрирован 40 таблицами и 40- рисунками. Указатель литературы включает 180 источника, из них отечественных - 87.