Содержание к диссертации
Стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
ХАРАКТЕРИСТИКА СВОЙСТВ ХОІЩРОИТИНСУЛЬФАТА 8
Химический состав, структура и физико-химические свой
ства хондроитинсульфата 8
Взаимодействие хондроитинсульфата с биологически акти
вными веществами 18
Биологическая доступность и фармакологическое исполь
зование хондроитинсульфата 25
СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМАХ ПАТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ПРОТЕОЖТКЧЕСШХ ШЕРМЕНТОВ И ГИСТАМИНА ПРИ ФОРМИРОВАНИИ ЯЗВЕННОГО ПРОЦЕССА В ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ СТЕНКЕ. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СУЛШТИРОВАННЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ В
КАЧЕСТВЕ АНТИУЛЬЦЕРОГЕННЫХ ВЕЩЕСТВ . 29
Протеолитические ферменты гастродуоденальной системы
как агрессивные факторы при ульцерогенезе 29
Механизмы патогенетического действия гистамина при
ульцерогенезе 36
Противоязвенное действие сульфатированных полисахаридов растительного происхождения и искусственных суль-
фатированных полисахаридов 46
Глава II. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И МЕТОДЫ ИХ ИЗУЧЕНИЯ ... 52
Материалы 52
Идентификация препаратов хондроитинсульфата 52
Определение концентрации хондроитинсульфата 56
Применение метода микрокалориметрии для изучения мол :.
лекулярных реакций: 57
принцип работы проточного микрокалориметра .... 58
Стр. определение термодинамических параметров комплек-
сообразования малых молекул с биополимерами мето
дом микрокалориметрии 59
использование метода проточной микрокалориметрии
для изучения ферментативных реакций ........ 62
Оценка взаимодействия низко- и высокомолекулярных биологически ^активных соединений с хондроитинсульфатом методом измерения интенсивности метахроматической
реакции „ 63
Статистическая обработка результатов 66
Глава III. ИЗУЧЕНИЕ ПР0ТИВ0ІЇЗВЕНН0Г0 ДЕЙСТВИЯ ХОНДРОИТИН-
СУЛШАТА НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЯХ УЛЬЦЕРОГЕНЕЗА ... 68
Методики моделей ульцерогенеза в гастродуодетальной
области: 69
гистаминовая язва желудка у морских свинок .... 69
цистеаминовая язва двенадцатиперстной кишки у крыс 70
Результаты и обсуждение 72
Глава ІУ. ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЛ ХОНДРОЙТИНСУЛШАТА НА ПР0ТЕ0-
ЖТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПЕПСИНА 77
Методики проведенных измерений: 77
определение протеолитической активности пепсина . 77
спектрофотометрические измерения в видимой области 78
Результаты 79
Обсуждение 84
Глава У. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ХОНДРОИТИНСУЛЬШАТА НА ФЕШЕНТА-
ТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ ТРИПСИНА 90
Методики проведенных измерений: 90
определение эстеразной активности трипсина .... 90
определение протеолитической активности трипсина L __'
микрокалориметрическим методом 91
Стр. спектрофотометрическое определение взаимодействия
трипсина с хондроитинсульфатом в УФ- и видимой
области 92
Результаты 93
Обсуждение 100
Глава УІ. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ГИСТАМИНА С ХОНДРОИТИН-
СУЛШАТОМ 107
Методики проведенных измерений 107
микрокалориметрические измерения 107
спектрофотометрические измерения в видимой области 108
определение стимулированной введением гистамина
секреции соляной кислоты изолированным желудком
мыши рН-метрическим методом 108
Результаты III
Обсуждение 120
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 126
ВЫВОДЫ 132
ЛИТЕРАТУРА 134
Введение к работе
Сульфатированные полисахариды играют важную роль в процессах жизнедеятельности организма. В силу уникальных физико-химических характеристик /сульфатированные полисахариды являются полимерами с высокой плотностью отрицательного заряда в физиологических условиях ввиду высокого содержания сульфатных и карбоксильных групп/ соединения этого класса макромолекул обладают способностью взаимодействовать с биологически активными низко- и высокомолекулярными веществами.
Многочисленные исследования показали, что сульфатированные полисахариды животного происхождения входят в большом количестве в состав гранул клеток, содержащих низкомолекулярные биологически активные вещества ^базофильные гранулы тучных клеток, разнообразные катехоламинсодержащие гранулы, пролак-тинсекретирующие гранулы гипофиза^, где, как предполагается, играют роль своеобразных хранилищ эндогенных биологически активных веществ.
Связывание сульфатированных полисахаридов с другими макромолекулами обеспечивает широкий спектр биологических функций сульфатированных полисахаридов: структурную организацию внеклеточного матрикса в соединительных тканях, контроль го-меостаза, специфическое связывание белков плазмы крови с сосудистой стенкой, регуляцию клеточного метаболизма, дифферен-цировки и аггрегации клеток. При исследовании влияния гли-козаминогликанов, в частности, гепарина как наиболее изученного сульфатированного полисахарида на активность ферментов было установлено, что комплексообразование между гликозами-ногликанами и ферментами может приводить к стабилизации ферментов или к усилению их инактивации, регулируя таким образом интенсивность протекания ферментативных реакций в организме.
К числу важных биологических свойств сульфатированных полисахаридов растительного происхождения и искусственных сульфатированных полисахаридов /каррагинаны, декстрансульфат, ами-лопектинсульфат/ относится их способность оказывать антиульце-рогенное действие в гастродуоденальной области. В ряде работ установлено, что противоязвенное действие сульфатированных полисахаридов связано с ингибированием активности протеолитичес-кого фермента желудочного сока - пепсина. Однако, указанные сульфатированные полисахариды не нашли широкого применения в качестве противоязвенных препаратов ввиду их разнообразных побочных эффектов и, в первую очередь, выраженной антикоагулянт-ной активности.
Настоящая работа посвящена выявлению антиульцерогенных свойств сульфатированного полисахарида животного происхождения - хондроитинсульфата и изучению физико-химическими методами биофизических механизмов его противоязвенного действия.
Согласно современным представлениям процесс язвообразова-ния в гастродуоденальной стенке имеет место при нарушении баланса между агрессивными факторами желудочного сока, дуоденального содержимого и защитным барьером слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. К числу агрессивных факторов воздействия на слизистую относятся протеолитические ферменты желудочного сока и дуоденального содержимого /пепсин, трипсин/, a IJ также биогенный амин - гистамин, усиливающий секрецию соляной кислоты париетальными клетками и вызывающий нарушения трофики желудка и двенадцатиперстной кишки вследствие его влияния на процессы микроциркуляции в гастродуоденальной зоне и участия гистамина в формировании воспалительной реакции в слизистой оболочке.
В связи с изложенным для выявления биофизических механизмов антиульцерогенного действия хондроитинсульфата была поставлена задача изучить влияние данного сульфатированного полисахарида на активность протеолитических ферментов гастродуо-денальнон зоны и гистамина.
Комплексное использование микрокалориметрического, спек-трофотометрическріх методов и рН-метрического метода регистрации секреции соляной кислоты позволяет выяснить природу взаимодействий хондроитинсульфата с вышеуказанными факторами ульцероге-неза, выявить особенности комплексообразования биологически активных веществ с сульфатированными^полисахаридами.
