Блеомициновые производные олигонуклеотидов: синтез и эффективное сайт-специфическое расщепление ДНК Сергеев, Дмитрий Станиславович

Введение к работе

Актуальность проблемы. Одной из актуальных проблем современной молекулярной биологаи, биотехнологаи и медицины является осуществление эффективного антисмыслового и ген-направленного воздействия с помощью реакционноспособных производных олиго-нуклеотидов. Несмотря на то, что к настоящему моменту существует широкий спектр производных олигонуклеотидов, несущих алкилирующие, фотоактивируемые группировки, группировки окислительно-восстановительного механизма действия, поиск более эффективных реакционноспособных группировок для деструкции нуклеиновых кислот, особенно способных каталитически расщеплять ДНК, продолжается. В этой связи представляется перспективным использование в качестве активний группировки гликопептидного антибиотика блеомицина, способного вызывать одно- и двуцепочечные разрывы ДНК с высокой эффективностью. Благодаря уникальному строению своего металлсвязывающего центра антибиотик способен многократно генерировать активные кислородные частицы, каталитически расщепляя ДНК.

Цель работы. Целью настоящей работы является разработка метода синтеза блеомициновых производных олигонуклеотидов и исследование полученных коньюгатов в качестве реагентов для направленной химической модификации ДНК.

Научная новизна. В настоящей работе впервые было осуществлено ковалентное присоединение противоопухолевого антибиотика блеомицина А₅ к олигонуклеотидам. Показано, что полученные коныогаты способны к эффективному сайт-специфическому расщеплению как короткой (14-звенной), так и протяженной (302-звенной) ДНК-мишеней. Обнаружено.что блеомициновые производные олигонуклеотидов способны расщеплять двуцепочечную ДНК в составе тройного комплекса. На примере расщепления 14-звенной ДНК-мишени была продемонстрирована способность остатка блеомицина в составе олигонуклеотидного реагента каталитически расщеплять ДНК-мишень. Таким образом, впервые созданы сайт-направленные расщепляющие ДНК реагенты на основе олигонуклеотидов с каталитическим типом действия.

Практическая ценность. В результате проделанной работы в
арсенал ген-направленных соединений включен новый тип
производных олигонуклеотидов, содержащих остаток

противоопухолевого антибиотика блеомицина А5. ДНК-расщепляющая активность полученных коньюгатов позволяет надеяться на успешное применение данных производных в качестве

сайт-специфических химических эндонуклеаз в молекулярно-биологических исследованиях. Избирательность по отношению к определенным нуклеиновым кислотам в дополнение к высокой противоопухолевой активности антибиотика являются основой для возможного использования блеомициновых производных олигоігуклеотидов как нового класса терапевтических средств.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на Международных симпозиумах "Синтетические олигонуклеотиды: проблемы и перспективы практического использования" (Москва, 1991 г.), "Антисмысловые олигонуклеотиды и рибонуклеаза Н" (Франция, 1992).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи, 2 статьи приняты в печать.

Объем работы. Диссертационная работа изложена на 190 страшщах машинописного текста, состоит из 3 глав, введения, выводов, списка цитируемой литературы из 289 наименований и содержит 2 таблицы и 30 рисунков.

Похожие диссертации на Блеомициновые производные олигонуклеотидов: синтез и эффективное сайт-специфическое расщепление ДНК

Окислительное расщепление ДНК аренами и их олигонуклеотидными конъюгатами в присутствии ионов Cu(II)Коваль Ольга Александровна

Анализ взаимодействия доменов репликативного белка А человека с частичными ДНК-дуплексами методами ограниченного протеолитического расщепления и аффинной модификацииПестряков Павел Ефимович

Оптимизация метода химического легирования при сборке протяженных ДНК. Синтез генаМеренкова, Ирина Николаевна

Синтез и свойства двухспиральных ДНК, содержащих реакционноспособные межнуклеотидные группировкиКаневский, Игорь Эрнестович

Флуоресцентные 5-алкинил-2''-дезоксиуридины: синтез, биологическая активность и спектральные свойства в составе ДНКСкоробогатый Михаил Валерьевич

Синтез и изучение поведения в энзиматических реакциях Р-модифицированных фрагментов ДНКШибанова, Елена Витальевна

Синтез модифицированных по углеводному фрагменту олигодезоксирибонуклеотидов и получение на их основе ДНК-дуплексов с ковалентно связанными цепямиАнцыпович, Сергей Игоревич

Синтез олигонуклеотидов с гидрофобными заместителями и их применение для детекции повреждений в ДНК Андреев Сергей Юрьевич

Синтез, структура полипептидов регулярного строения, содержащих лизин, орнитин, цитруллин, и их взаимодействие с ДНК Камилова Рена Рустамовна

Синтез олигонуклеотидных конъюгатов с помощью реакции [3+2]-диполярного циклоприсоединения и их использование в конструировании ДНК-наноструктурУстинов Алексей Викторович