Введение к работе
Актуальность исследования. Цногие патологические состояния
сопровождаются раэгитием эндогенной интоксикаіп«Т~что~ приводит
к накопление в организме больных эндотоксинов пептидной природи с молекулярное массой (!1) от 300 до 5000 Да, которые являются продуктом усиленного катаболизма я протеолиоа белков. Несмотря ип то, что пептидные эндотоксины впервые были описаны в I960 г. и многие исследователи изучали их биологическую активность, физиологическое действие и строение, тем не пенсе многие попроси происхождения патогенных пептидов, механизма их действия и эффективны:: способов злиминчиии остаются неяснгп.'и. Известно, что хроническая почечная недостаточность (ХП'1) сопровождается тяжелой интоксикацией, при которой происходит накопление в крови больных ряда низкомолекулярных веществ, в том числе и пептидных эндотоксинов, которые названы пептидами среднемолекулярной массы' (пептида СМ).
Наиболее общим для пептидов СМ является мембранотропное действие. Изменяя структурно-функциональные характеристики кле-точні-х мембран, пептиды оказывают ингибирутацее действие на цели? ряд метаболических процессов, нарушают фильтрационную способность эритроцитов, процессы транспорта ионов и аминокислот в почках и эпителии, процессы перекисного окисления липидов, фракционирование системы гемостаза, ферментной и иммунной систем, функ-ііии нервны' клеток и др. В связи с этим актуальной является проблема удаления пептидны-: эндотоксинов из крови больных. В настоящее время в клинической практике наиболее часто для очистки крови применяются методы гемосорбции и гемодиализа, недостатком которых является неспецифичность действия. Поэтому использование имчунооорГ)плон!шх методов, известных своей высокой чувствительностьо и избирательностью, рв.ігет^Р перспективном. Это направление ещо не нашло широкого применения в клинической практике, известны іишь примеры использования иммуносорбентов при аллергических заболеваниях. Кроме того, неспецифичными являются и используемые в настоящее яремл способы детекпш пептидных эндотоксинов.
Подтелу рпг.ргботка чувствительны* методов определения Путилов СММ и высокоеиецифичных. способов алиуиншши я<, из крогч* боль-ньх с использованием гиоепецифнческих сорбентов наряду с исследованием их действия На мембраны, фгнк'.ши нервных я иммунных систем является актуальным и будет иметь определенное значение для практического здравоохранения.
Цель и задачи исследования. Основной целью работы являлось гселедование свойств пептидов СММ из сыворотки крови больных ХПН и разработка метода их количественного определения, а также синтез иммуносорбентов с иммобилизованными антителами к пептидам СММ для очистки крови больных ХИН. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
выделение пептидов СШ из сыворотки крови больных ХПН в терминальной стадии (тХПН);
исследование нейротоксических, мембранотропных и иммуномоду-лируотцих свойств пептидов СШ;
синтез иммуногенных форм пептидов СММ и получение специфических антисывороток;
разработка иммунсферментного способа определения пептидов СШ в сыворотках крови больных на микроуровне;
синтез иммуносорбента на основе целлюлозное матрицы с иммобилизованными антителами к пептидам СММ.
Научная новизна и практическая значимость исследования. Показано, что пептиды СШ, выделенные из сыворотки крови больных тХПН,нейротоксичны и проявляют неспецифическуго мембранотропнуго активность, изменяют термодинамические параметры и проницаемость мембран. Разработаны подходы для количественной опенки мембрано-тропного действия пептидов СіШ. Установлено, что пептиды СММ не оказывают прямого действия на мембранотоксическую активность эф-фекторных лимфоцитов - естественных киллеров и угнетают синтез лимфокина интерлейкина-2.
Получены иммуногенные формы пептидов СММ - конденсат с ММ около 60000 Да и конъгагат пептидов СММ с иммуностимулирующим полимером - суспензией окисленной целлюлозы. Разработаны оптимальные условия для получения специфичных антисывороток путем исследования динамики антителообразования.
Впервые синтезирован иммуносорбент на основе целлюлозной матрицы и иммобилизованными антителами к пептидам СММ для элиминации пептидных эндотоксинов из крови больных тХПН, использование которого в медицинской практике позволит сделать пронесе де-токсикации более специфичным и эффективным.
Впервые разработана и внедрена в Республиканском центре гемодиализа иммуноферментная тест-система для определения пептидов СММ в крови больных на микроуровне.
Публикации и апообаї'ир. исолеготош;";. Основные почо"єнир дйссертаглоноЗ работы ґуііі доло.тшны и обсувдены на І--І Зсетрчом конгрессе по биохимии г ЧССР, г.Прага (Т9-ЗГО, н-ч X 0::--.единенном
симпозиуме биохимических обществ" СССР-ГДР""Механизмы регуляции
клеточкой активности" в г.Ташкенте (1989), на Международном симпозиуме по биотехнологии в ЧССР, г.Прага (1988), ІУ Всесоюзном симпозиуме химии белков и пептидов в г.Таллине (1987), на I Конференции биохимиков Узбекистана в г.Ташкенте (1986), на Юбилейной научной конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 60-лети;о комсомола Узбекистана в г.Ташкенте (1985), на конференции молодых ученых "Актуальные проблемы укрепления связи науки и производства" в г.Зергана (1988), I съезде иммунологов Узбекистана б г.Самарканде (1991). По полученным результатам имеется 8 публикаций.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 19STстраницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, включающего ISJ наименований, из нихД? зарубежных авторов. Работа содержит 17 рисунков.
