Введение к работе
Актуальность проблемы. Мурамилпептиды - класс соединений, открытый в результате поиска иммуноакти'вного компонента клеточ-тх стенок микобактерии, входящих в состав полного адъюванта Е>рейнда, широко используемого при иммунизации зксперименталь-шх животных. Минимальным фрагментом клеточной стенки, который <ожет заменить целые бактерии в полном адъюванте Фрейнда, яв-іяется М-ацетилмурамоил-Ь-аланил-Б-изоглутамин (МДП). МДП об-тадает широким спектром биологических эффектов, среди которых іаиболее важны адъювантная активность, стимуляция неспецифи-іеской резистентности к бактериальным и вирусным инфекциям, шрогенное и сомногенное действие. Во многих лабораториях ми-)а, в том числе и в России, были синтезированы аналоги МДП с ірко выраженной иммуномодулирующей активностью..
Большая группа N-ацетилглюкозаминсодержащих мурамилпепти-юв была синтезирована в лаборатории химии пептидов ИБХ им. І.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, и среди них N-ацетилглю-юзаминил-(Р1-4)-М-ацетилмурамоил-аланил-Б-изоглутамин (ГМДП), ібладающий помимо выраженной адъювантной активности и противо-щухолевым действием. Иммуномодулирующая и противоинфекционная іктивность ГМДП открыли возможность его клинического использо-іания. В 1995 г таблетированная лекарственная форма ГМДП-"Ли~ :опид"- была зарегистрирована в Государственном Реестре ле-:арственных средств Российской Федерации. Однако, для создания :овых эффективных лекарственных препаратов на основе ГМДП тре-'уется знание механизма его"действия, который, несмотря на зна-ительное число исследований, до настоящего времени остается евыясненным.
Наличие связи между биологической активностью мурамилпеп-идов и их пространственной конфигурацией, а также насыщаемый арактер зависимости доза-ответ говорят в пользу рецепторного еханизма действия. Однако полученные к началу данной работы ведения о рецепторах мурамилпептидов и их локализации являйсь противоречивыми. Хотя МДП-связывающие молекулы и были об-аружены на поверхности макрофагов, были опубликованы данные о ом, что биологическое действие МДП является результатом его роникновения внутрь клетки-мишени (макрофага) и взаимодейс-вия со специфическими внутриклеточными рецепторами. Ничего не
- г -
было известно о наличии МП-связывающих молекул на других типе клеток. Поэтому для понимания механизма действия мурамюшепт* дов и, в частности, ГМДП, идентификация и характеристика внут риклеточных ГМДП-связывающих молекул представляли собой акті альную задачу.
Цель работы. Данная работа является составной частью исследс ваний молекулярного и клеточного механизма действия ГМДП, прс водимых в лаборатории иммунохимии Института биоорганическс химии им. М. М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН.
Целями настоящей работы являлись идентификация, выделени и характеристика ГМДП-связывающих белков иммунокомпетентнь клеток, прежде всего, макрофагов.
Научная новизна и практическая значимость работы. С использс ванием флюоресцентно-меченого производного ГМДП было впервь определено число внутриклеточных сайтов связывания ГМДП в им мунокомпетентных клетках различной этиологии. С использование иод(125)-меченного производного ГМДП охарактеризованы молеку лярные массы макрофагальных ГМДП-связывающих белков. Впервь показано, что ГМДП-связывающие белки могут быть элюированы субклеточных фрагментов макрофагов высокой концентрацией КС1 а в случае клеток WEHI-3 также и хелатирующими агентами. Раз работаны схемы очистки ГМДП-связывающих белков с молекулярным массами 32 и 34 кДа из клеток WEHI-3 и перитонеальных макрофа гов мыши. Эти белки выделены в гомогенном состоянии, и показа на их идентичность гистонам НІ.
Апробация работы. Основные положения диссертации были доложен на следующих симпозиумах: 11-ом Съезде Европейской Федераци Иммунологических Обществ (Эспоо, Финляндия, 1991), симпозиума "Структура и функции регуляторных полипептидов" (Москва, 1992 и "Современные тенденции в исследовании лейкозов" (Ст.-Петер бург. 1994), 3-м международном симпозиуме по биоорганическо химии (Дагомыс', Россия. 1995).
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опуб ликовано 10 работ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложен на 162 страницах машинописного текста и состоит из введения обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментально части, выводов и списка цитируемой литературы, состоящего и 300 наименований. Работа содержит 32 рисунка и 6 таблиц.
