Введение к работе
Актуальность проблемы. К настоящему времени стало очевидным, что традиционные вакцинные препараты пастеровского типа будут, несмотря на их заслуги, вытеснены вакцинными препаратами третьего поколения - химичесхими и биотехнологическими вакцинами. Основным препятствием на пути такой замены являются трудности технологического характера, а также необходимость накопления дополнительных знаний о взаимосвязи эффективности действия и химического строения таких препаратов. Любая дополнительная информация по данным вопросам представляет большую ценность для оптимизации процесса разработки химических вакцинных препаратов . и приближения начала их практического применения.
Цель работы. Одной из наиболее острых проблем клинической эпидемиологии является борьба с септическими осложнениями, вызываемыми грам-отрицательным микроорганизмом Pseudononas aeruginosa. Высокая жизнестойкость микроорганизма и его устойчивость к средствам хемотерапии делает обоснованным выбор иммунологических методов борьбы с этим возбудителем. Поэтому в данной работе была поставлена задача отработки методов синтеза искусственных антигенов, которые могут быть использованы в качестве химических вакцин для борьбы с синегнойными инфекциями.
В качестве источника антигенной информации были выбраны О-специфические полисахариды липополисахаридов (ЛПС) P.aerugJno-. sa, на основе которых п было решено синтезировать ряд углевод-белковых и углевод-липидных искусственных антигенов. : Научная новизна и практическая'значимость работы.
Оптимизирована методика выделения ЛИС гран-отрицательных бактерий нетодоц водно-фенолыгоп экстракции.
Синтезированы протективныз полисахарид- и олигосахарид-белковыэ коньюгаты па основе бычьего сывороточного альбумина, а такхе экзотоксина А сипегнойкоп. палочхи п 0-специфических полисахаридов микроорганизма. Экспериментально подтверядена пёобхо-дкость присутствия в вакцинном препарате антигенных детерминант, нескольких наиболее вэеных факторов патогенності! возбудителя.
Обнаружено синэргнческое стимулирувсее действие гомологич
ного по углеводной цепі!' ЛПС при иммунизации полисахарид-белко
выми коньюгатаки. * . .
Оптимизирована общая схема изучения химического строения . липнда А. Установлена полная химическая.структура липида А сине-гнойной палочкн. Впервые показано существование липида А с двумя неацнлированнымй гидрохсплытш'Тр'упШш^п остатке врсстанавли-
2.-
ваощего ClcN. Охарактеризованы иммунобиологичекие свойства липи-да А синегнойиой палочки. Предложено объяснение низкой токсичности липида А синегнойиой палочки исходя из его структурных особенностей.
Осуществлен синтез искусственного угдевод-липидного конью-гата из яипида А и олигосахарнда с.антигенной специфичностью ЛПС иммунотипа Фишер 2 синегнойиой палочки, моделирующий нативный липополисахарид. Показана его серологическая активность и имму-ногенность.
Предложен метод рассчета констант связывания антигенов с антителами на основании данных ингибиторного иммуноферментного анализа. Метод использован для анализа энергетики связывания олигосахаридных гаптенов с антителами, специфическими к нативно-му ЛПС.
Апробация работы и публикации, материалы диссертации доложены на Международном симпозиуме "Структура, биосинтез и функции молекулярных элементов иммунной системы" (г. Пущино, 1987 г.), 111 Советско-Шведском симпозиуме по химии углеводов (г.Киев, 1988 г.), иехдународном симпозиуме по химии и биохимии углеводов (г.Иокагама, 1990 г.). По теме диссертации опубликовано S работ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 153 стра-ницах, содержит. 33 рисунка, 10 таблиц и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка литературы, включающего 145 ссылок.
