Введение к работе
Актуальность работа. Высокая чувствительность и экспросс-іость аналитических методов, использунщих биологические католи-:аторц-фермента, обусловливает широкое примонппио поелодіпге. іднако нестабильность пптивішх формантов и сложность отдолоїшл к от растворов субстратов и продуктов реакции являются Факто-іями, ограничивающими пракпетзскоо использование» растворимых юрм биоісатализаторов. Преодолеют отих препятствий сиособству-т иммобилизация ферментов.
Сроди различных методов иммобилизации особенно перспективой является ковалентная иммобилизация, позволящая получать аиболэе стабильные препарати. В то ко время химические способи пркшивкл" ферментов к носителям часто ведут к изменению кон-ормащгл белков и снижению каталитической активности. Поэтому родолжаются поиски соединений, использовании которых в качест-е спейсеров позволило бы уменьшить отрицательные последствия пмяческого взаимодействия. Например, для фермонтов-ликопротошюв имеется возможность осуществить иммобилизацию за чет кярбогидратшй часта, нэ затрагивая активный центр биока-ализаторя.
Цель и задачи работ» Разработка химического метода иммо-плизации гликопротешюв с использованием в качестве спойсероп рематических производных борной кислоты-ОороНОВЫХ ІСИСЛОТ, пособных к комплексообразованию с а-диольными группами олиго-ахаридной части формантов,'и оптимизация условий иммобилизации утвм подбора подходящих спейсеров.
В соответствии с поставленной целью п работе решались ледущие задачи:
синтез п- и м-производннх фенилбороновой кислоты с учетом лияния заместителей па кислотность шпн^-группн;
определение кислотных свойств синтезированных соединений; исследование комшюксообразования боронових кислот с -даолами в статических и динамических условиях;
шдифицировятго карбокедлировашшх и амипировашшх кремнеземах носителей - енлохромов бифункциональными бороновнма кисло-вми;
иммобилизация глюкозооксидази и ацеталхолгошеторазы на эдифлцированных силохромэх;
исследование стабильности иммобилизованных препаратов при
хранеяии и в рабочих условиях.
Научная новизна работы. Синтезировано 14 бороновых кислот, среди которых одно новое соединение 3-г)-(4-алинофшіл)карбаьюил-5-нитрофвнилбороновая кислота. Для подтверждения индивидуальности впервые в практике изучения этого класса веществ использован датод ВЭЖХ. Исследование структуры синтозировашшх соединений наиболее детально выполнено ПМР-спектральным методом, который позволил охарактеризовать влияние в<он>g-rpynmi на химические сдвиги ароматических протонов. Спектрофотометрическкм методом исследованы кислотные свойства 16 бороновых кислот в водных растворах. Изучено комп-лексообразовапие бороновых кислот с а-диолами в динамических и статических условные. Проведена иммобилизация глюкозооксидази и ацетаяхолйнэстьразы на силохролшх, шдифицировашшх бифункциональными бороновыш кислотами, причем для ацатилхолинэстеразы данный метод иммобилизации применен впервые. Исследована стабильность иммобилизованных препаратов в рабочих условиях к при хранении.
Научно-практическое значение работы. Разработанный метод иммобилизации может быть рекомендован при создании чувствительного элемента биосенсорных систем, особенно при необходимости близкого расположения фермента, например, к электродной поверхности. Кроме того, хроматографические носители, модифицированные бифункциональными бороновими кислотами, могут успешно применяться в аффинной хроматографии, в частности, для разделения Сахаров.
Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 6 нечетных работ. Материалы исследований доложены на xvin Межвузовской конференции молодых ученых "Современные проблемы физической химии растворов" (г.Ленинград, 1991г.), vn Всесоюзном симпозиуме "Инженерная знзишлогия (получение и применение биокатализаторов в народном хозяйстве и медицине)" (г.Москва,. 1991г.).
Объем и структура работы. Материалы диссертации изложены на 158 страницах, содержат 19 рисунков и 19 таблиц. Диссертация состоит из введения, четырех глав и выводов. В- первой главе представлен обзор литературы, в котором обсуждены работы советских и зарубежных исследователей, касающиеся свойств нспользо-вьшшх нами формантов и разнообразных методов их иммобилизации.
