Введение к работе
Актуальность работы. В настоящее время разработано большое количество различных иммунохимических тестов (Herzog D.P., 2006, Stewart B.J. et al., 2006). Из всего многообразия современных иммунодиагностических методов в практическом здравоохранении наибольшей популярностью пользуется иммунопероксидазный тест (Aurameas S., 1971, Jeanson A. et al., 1988) в постановке на планшетах для иммунологических реакций (Engvall Е. 1971). Этот метод хорошо зарекомендовал себя в клинических и лабораторных исследованиях, однако для количественного спектрофотометрического учёта результатов требуется специальная дорогостоящая аппаратура и высокая квалификация персонала. В условиях слабого финансирования здравоохранения, приобрести специальный спектрофотометр могут позволить себе только крупные диагностические центры.
В то же время потребность в серологическом контроле на местах велика. Это и контроль крови на наличие инфекционных заболеваний при оперативных вмешательствах и экстренных трансфузиях, и контроль инфекций, возбудители которых вызывают тератогенный эффект, а также выявление и дифференциация паразитарных и хронических инфекционных заболеваний. Большая часть лечебных учреждений не имеет возможности самостоятельно осуществлять иммунодиагностику и вынуждена пересылать образцы или направлять больных на обследование в диагностические центры. При значительном отдалении таких центров, особенно в восточной части России, получение результатов анализа затягивается на недели, что негативно отражается как на качестве иммунодиагностики, так и на здоровье пациентов.
Таким образом, создание чувствительных, но простых и недорогих тест-систем, позволяющих выполнять иммунологический анализ в условиях слабооснащенных медицинских учреждений или во внелабораторных условиях, весьма актуально и позволит сделать иммунологическое обследование населения более доступным, своевременным и эффективным.
Цель исследования: разработка планшетного метода иммуноанализа с надежным визуальным учетом результатов для повышения доступности и эффективности лабораторной диагностики инфекционных заболеваний.
Задачи исследования:
-
подбор условий получения иммунозолей на основе соединений двухвалентного кобальта и изучение их свойств;
-
отработка способов проявления кобальтсодержащих иммунозолей;
-
оптимизация условий применения кобальтсодержащих маркеров в планшетном варианте иммуноанализа;
-
оценка стабильности иммунозолей при хранении;
-
оценка эффективности применения кобальтсодержащих маркеров в иммуноанализе.
Научная новизна. В работе показано, что золи на основе соединений двухвалентного кобальта:
могут быть использованы в качестве маркеров иммуноанализа на микротитровальных планшетах;
по чувствительности и специфичности не уступают иммуннопероксидазным конъюгатам и, при этом, имеют перед ними преимущества по относительной простоте получения иммунозоля, а также по использованию стабильного и безвредного проявляющего раствора;
позволяют создавать системы для иммунохимического тестирования с надежным бесприборным учетом результатов.
Практическая значимость работы:
разработаны методы получения и применения в иммуноанализе иммунозолей на основе соединений двухвалентного кобальта;
показано, что применение кобальтсодержащих иммунозолей позволяет создавать диагностические тест-системы с надежным визуальным учетом результатов по принципу «да/нет» для обеспечения иммунодиагностики в слабо оснащенных лабораториях городских и районных сельских больниц;
описанная в настоящей работе система визуализации результатов иммунохимического анализа пригодна для производства диагностических наборов любой специфичности и может найти применение не только в диагностике инфекционных заболеваний, но и в других отраслях медицины, а также в ветеринарии, экологических исследованиях и научных экспериментах
- подана заявка на получение Патента РФ «Хромогенная система для визуализации результатов иммунохимического анализа в микротитровальных планшетах» (Per. №2010136265 от 27.08.2010). Основные положения, выносимые на защиту:
-
Теоретически и экспериментально обоснована возможность применения иммунозолей на основе двухвалентного кобальта в планшетном иммуноанализе.
-
Разработана методология проведения иммунокаталитического анализа с применением кобальтсодержащих маркеров.
-
Получено экспериментальное подтверждение эффективности иммунокаталитического анализа в сравнении с иммуноферментным анализом по чувствительности и специфичности.
Конкретное участие автора в получении результатов
Вклад автора в представленные результаты заключается в личном участии во всех теоретических и экспериментальных исследованиях, обработке результатов и формулировании выводов. Все работы выполнены под руководством и в соавторстве с А.Г. Полтавченко. Часть исследований выполнена в соавторстве с Б.Н. Зайцевым, Н.А. Кривенчуком, А.Н. Рыбаковым и A.M. Яковченко. Всем, принимавшим участие в данной работе, автор выражает искреннюю признательность.
Апробация работы
Материалы диссертации представлены на следующих конференциях: междисциплинарном семинаре: «Микробициды для здоровья и репродукции человека, медико-социальные проблемы сексуально передаваемых инфекций» и международной научной конференции «Актуальные вирусные инфекции -теоретические и практические аспекты» (Санкт-Петербург, 2004 г.); международной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006 г.).
Структура и объем диссертации
