Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Эпидемиологические аспекты НЦД у детей 14
1.2. Особенности патогенеза НЦД у детей 16
1.3. Изменения метаболических параметров крови у детей при НЦД 18
1.4. Роль биохимического исследования слюны в диагностике заболеваний 24
1.5. Характеристика ферментов АОЗ и клинико-диагностических маркеров соматической патологии 32
Глава 2. Материалы и методы исследования 44
2.1. Клинический материал 44
2.2. Биохимические методы исследования сыворотки крови и слюны 44
Глава 3. Метаболические изменения в сыворотке крови у детей с НЦД 47
3.1. Кровь как биологический материал для исследования ферментативного звена АОС 47
3.2. Содержание лактата и ПВК в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД 48
3.3. Активность каталазы и СОД в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД 48
3.4. Содержание общего глутатиона и ферментов обмена глутатиона в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД 51
3.5. Активность МЛО в сыворотке контрольной и клинической групп детей с НЦД 51
3.6. Содержание ACT и АЛТ, ЩФ в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД 51
3.7. Сравнительный анализ активности ферментов АОЗ и ферментов-маркеров соматической патологии 55
3.7.1. Активность СОД и уровень лактата в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД 55
3.7.2. Активность СОД и ACT в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД 55
3.7.3. Активность каталазы и ГПО в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД 58
Глава 4. Метаболические изменения в слюне у детей с НЦД 62
4.1. Слюна как биологический материал для исследования ферментативного звена АОС 62
4.2. Уровень лактата и ПВК в слюне у здоровых детей и детей с НЦД 64
4.3. Активность каталазы и СОД в слюне у здоровых детей и детей с НЦД 64
4.4. Уровень общего глутатиона и активность ферментов обмена глутатиона в слюне у здоровых детей и детей с НЦД 67
4.5. Активность МПО в слюне у здоровых детей и детей с НЦД 67
4.6. Активность каталазы и ГПО в слюне у здоровых детей и
детей с НЦД 67
4.7. Сравнительный анализ изменений активности СОД и уровня лактата в слюне у здоровых детей и детей с НЦД 67
Глава 5. Корреляционный анализ биохимических показателей сыворотки крови и слюны
Глава 6. Особенности метаболических процессов в сыворотке крови и слюне у детей с НЦД в зависимости от возраста 76
Обсуждение полученных результатов 82
Выводы 92
Практические рекомендации 93
Литература
- Изменения метаболических параметров крови у детей при НЦД
- Биохимические методы исследования сыворотки крови и слюны
- Содержание общего глутатиона и ферментов обмена глутатиона в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД
- Активность каталазы и СОД в слюне у здоровых детей и детей с НЦД
Введение к работе
"^
Актуальность темы
В настоящее время среди всей группы заболеваний сердечнососудистой системы вегетативные расстройства, в частности нейроциркуляторная дистония (НЦД), являются одной из актуальных проблем (Маколкин В.И., Аббакумов С.А., 1985; Белоконь Н.А., Кубергер М.Б., 1987; Вейн A.M., Молдавану И.В., 1988; Вейн A.M. с соавт., 1991; Отева Э.А. с соавт., 2000).
Вегетативные нарушения берут свое начало преимущественно в детском возрасте (Малая Л.Т., 1978; Клиорин А.Н., 1981; Мазо Р.Э., Надеждина С.А., 1985; Калоева З.Д., 1989). Материалы VIII Конгресса педиатров (2003) со всей очевидностью демонстрируют закономерную тенденцию к ухудшению физического и психического здоровья подрастающего поколения. НЦД можно рассматривать как состояние, отражающее особенности этапов развития ребенка в условиях современной окружающей среды, т.е. НЦД - «болезнь развития».
Одновременно с этим, как считают Р.А. Калюжная (1980), Р.Н. Аляветдинов, М.Ф. Исмаилов (1987) и многие другие исследователи, при отсутствии своевременных лечебно-профилактических мероприятий у значительного числа людей НЦД может приобретать стойкий характер и трансформироваться в дальнейшем в гипо- или гипертоническую болезнь, атеросклероз, ишемическую болезнь сердца (ИБС).
Данные свидетельствуют о том, что при нейроциркуляторных расстройствах у детей в патологический процесс вовлекается весь организм, а не только лишь сердечно-сосудистая и вегетативная нервная система. В работах последних лет приведены неоспоримые доказательства «полиорганности» поражений при НЦД у детей (Середа Ю.В., Шабалов Н.П., 1999).
Число здоровых детей в различных регионах России сократилось до 8-10%. Как подчеркнул в своем докладе на IX Конгрессе педиатров (2004) Председатель Союза педиатров России академик РАМН А.А. Баранов, приоритетными научными исследованиями фундаментального и прикладного характера являются в т.ч. следующие: дальнейшее изучение механизмов функционирования физиологических систем здорового и больного ребенка, особенно в критические периоды роста и развития, ответных реакций организма ребенка на острый и хронический стресс.
На X Конгрессе педиатров «Пути повышения эффективности медицинской помощи детям» (2005) наряду с вопросами обсуждения клинических рекомендаций по бронхиальной астме, атопическому дерматиту, ставились вопросы методологии оценки состояния здоровья детей.
РОС НАЦИОНАЛЬНА».
БИБЛИОТЕКА |
3]
С Петербурга ~. — \
ч »
Морфо-функциональные изменения жизненно важных органов и систем, несомненно, приводят к гормонально-метаболическим сдвигам. Это, в свою очередь, провоцирует изменения общей и специфической реактивности организма, что сопровождается нарушением компенсаторно-адаптивных механизмов и ведет к формированию стойкой органной патологии в процессе взросления организма.
Несмотря на то, что с момента описания «синдрома раздраженного сердца» у молодых солдат в США прошло уже свыше 100 лет, в настоящее время многие аспекты патогенеза данного заболевания остаются недостаточно изученными. Так, в частности, в доступной литературе отсутствуют сведения о состоянии ферментативного звена антиоксидантной системы у детей с НЦД.
Антиоксидантная система (АОС) является показателем состояния адаптивно-компенсаторного потенциала организма, поэтому представляется целесообразным выяснить особенности антиоксидантных ферментных процессов у детей с НЦД, определить их взаимосвязь с биохимическими показателями, характеризующими функциональное состояние внутренних органов. С другой стороны, необходим поиск доступных, неинвазивных технологий, позволяющих повысить диагностическую и прогностическую информативность лечебно-профилактического процесса.
В настоящее время экспертами ВОЗ разработан перечень факторов риска развития сердечно-сосудистых заболеваний, а в отношении оценки степени дисфункциональных расстройств внутренних органов, формирующихся уже в детском возрасте, четкой концепции нет.
В связи с этим нам представляется актуальным поиск специфичных и чувствительных биохимических критериев, позволяющих своевременно выявлять потенциально устранимые функциональные нарушения со стороны висцерально-соматических органов и систем, к тому же являющихся диагностической частью протоколов ведения больных с данной нозологией.
Целью настоящей работы в связи с вышеизложенным явилось создание системы комплексной биохимической оценки возникновения и прогрессирования НЦД у ребенка на основе анализа функционирования ферментативных звеньев антиоксидантной защиты (АОЗ). Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи исследования:
-
Определить диапазоны нормативных значений показаний функционирования основных звеньев АОЗ в крови и ротовой жидкости у детей разных возрастных групп.
-
Выделить группы детей с доминирующей соматической дисфункцией по данным клинико-лабораторного обследования с учетом возраста.
-
Определить выраженность гипоксических сдвигов у детей с НЦД в разных возрастных группах по данным изучения уровня лактата и пирувата в сыворотке крови и слюне.
-
Установить характер изменений показателей системы глутатиона у детей разных возрастных групп с НЦД в сравнении со здоровыми.
-
Определить активность супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы в исследуемых группах детей.
-
Выявить характер изменения миелопероксидазы (МПО), характеризующей состояние антибактериальной резистентности детского организма.
-
Разработать критерии, позволяющие проводить донозологическую диагностику у детей, угрожаемых по развитию НЦД.
Научная новизна работы
В работе впервые проведена комплексная сравнительная характеристика активности антиоксидантных систем в слюне и сыворотке крови детей в норме и при НЦД.
В работе впервые доказательно продемонстрирован вклад ферментативного звена в антиоксидантный потенциал крови и слюны детей при НЦД.
Впервые установлены корреляционные взаимосвязи между показателями АОЗ сыворотки крови и слюны и их динамика у этих детей с учетом выраженности соматической дисфункции в различных возрастных группах.
Обнаруженные нами выраженные корреляционные связи между антиоксидантными системами крови и ротовой жидкости указывают на вероятную общность некоторых механизмов организации защитных реакций в слюне и крови при вегетативной дисфункции.
Впервые показано, что слюна по ряду показателей АОЗ является более предпочтительным для диагностических целей биологическим материалом по сравнению с сывороткой крови у детей с НЦД с доминирующей соматической дисфункцией.
Научно-практическая значимость работы
Впервые доказана у детей с НЦД перспектива использования слюны как биологического материала для оценки эффективности лечебно-диагностического процесса.
Впервые в работе проведен отбор информативных биохимических критериев, позволивших упростить и уточнить прогностические и диагностические схемы лечебно-профилактического процесса у детей с НЦД.
Впервые показано, что существует зависимость между ферментами антирадикальной защиты и ферментами, определяющими
функциональное состояние печени у детей с НЦД, что позволило расширить наши представления о биохимической составляющей патогенеза НЦД в детской популяции.
Впервые уточнены возможности исследования слюны у детей с НЦД для оценки активности АОС защиты у детей с соматической доминантой.
Впервые установлены взаимоотношения между активностью АОС в сыворотке крови и слюне детей с НЦД, что может способствовать более широкому использованию слюны для их оценки и упрощения и уточнения прогностических и диагностических схем лечебно-профилактического процесса у детей с НЦД с выраженной соматической доминантой.
Полученные в работе данные позволяют оценить роль антиоксидантного статуса в комплексе метаболических изменений, возникающих при формировании дистресс-синдрома у детей с НЦД, и решить следующие задачи в клинической практике:
Применение чувствительных прогностических биохимических маркеров возникновения и прогрессирования НЦД в детской популяции.
Формирование дифференцированного подхода к биохимической диагностике НЦД у детей разных возрастных групп.
Использование фармакотерапии, дифференцированной на основе данных биохимической диагностики.
Апробация работы
Основные положения диссертационной работы доложены на IX Российской гастроэнтерологической неделе (20-23 октября 2003 г., г. Москва) и на конференции кафедры общей и клинической биохимии № 1 РостГМУ (29 июня 2005 г., г. Ростов-на-Дону).
Публикации
По материалам данного исследования опубликовано 2 печатных
работы. Подана заявка на выдачу патента на изобретение под названием
«Способ диагностики нейроциркуляторной дистонии»,
зарегистрированная под № 2005111311/15.
Основные положения, выносимые на защиту
-
Выявлена взаимосвязь между изменениями активности ферментов антирадикальной защиты, ферментами, отражающими соматическую дисфункцию и степенью изменения кислородного режима организма ребенка.
-
Возрастные особенности характеризуются усилением анаэробной ориентации обмена веществ в группе детей 12-14 лет, дисбалансом различных линий ферментативной АОС.
-
В ротовой жидкости у детей, страдающих НЦД, выявлено изменение активности ферментов АОЗ в сравнении со здоровыми детьми.
4. Установлено, что характер метаболических нарушений в слюне сопряжен с тяжестью течения НЦД, разработан способ диагностики ранних проявлений НЦД.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, содержащего 87 отечественных и 59 иностранных источников. Объем диссертации - 108 печатных страниц ф. А4, включая 17 таблиц и 15 рисунков.
Изменения метаболических параметров крови у детей при НЦД
НЦД — патогенетически гетерогенная группа патологии. По мнению Ю.В. Середы и Н.П. Шабалова (1999), ключевым моментом патогенеза НЦД у детей является нейродистрофический процесс, обусловленный поражением тех или иных структур на любом (надсегментарном, сегментарном или подсегментарном) уровне.
Этот процесс приводит к нейроэндокринным расстройствам, которые, в свою очередь, способствуют вторичному нарушению циркуляции продуктов обмена веществ и поражению наименее устойчивых органов и систем. Поражение той или иной системы (включая и нервную систему) во многом обусловлено генетической предрасположенностью и анатомо-функциональными особенностями этой системы у конкретного ребенка.
Очевидно, что роль расстройств ВНС в патогенезе НЦД велика, но влиянием этих нарушений не исчерпывается весь комплекс изменений в организме больного ребенка. Являясь «органом неотложной адаптации», ВНС чутко реагирует на любой дизадаптирующий фактор, пытаясь вернуть организм в состояние равновесия. Таким образом, выявляемые нарушения автономной регуляции, вероятно, иногда можно рассматривать как положительное (компенсаторное) явление и как маркер нейроциркуляторных расстройств. В некоторых случаях, по-видимому, возможно и первичное поражение ВНС (например, при так называемых медленных вирусных инфекциях) с развитием симптомокомплекса НЦД (Середа Ю.В., Шабалов Н.П., 1999).
В настоящее время можно выделить две формы НЦД: «первичную», диагноз которой является основным, и «вторичную», обусловленную другими патологическими процессами.
По-видимому, все формы НЦД вторичны и провоцируются какими-либо первичными нарушениями. В качестве примера можно привести такие состояния, как генетическая полигенная предрасположенность, пубертатный период развития, особенности личности ребенка, травма в анамнезе и т.д.
При наличии «вторичной» НЦД при обследовании выявляется конкретное первичное заболевание - хронические соматические и инфекционные заболевания, паразитозы, неврозы, психопатии и т.д. В этих случаях симптомокомплекс НЦД можно рассматривать как синдром, осложняющий течение основного заболевания. Сосудистые дистонии нейровегета-тивного генеза чаще начинают проявляться у детей в периоде пред- и пубертатного дисгормоноза. Это указывает на непосредственное участие в их реализации надсегментарных структур ВНС, в частности, гипоталамиче-ской области центральной нервной системы (ЦНС). Регуляция сосудистого тонуса осуществляется гуморальным путем и за счет симпатического звена ВНС.
Пациент может иметь фенотипические особенности исходного вегетативного тонуса (ИВТ) с общим преобладанием либо симпатических, либо парасимпатических влияний. При этом равновесие функционального взаимодействия между основными звеньями ВНС и анимальной нервной системы сохраняется, ибо обычные внешние раздражители не способны привести к его нарушению. Но при накоплении большого количества фак 18
торов разрешения, при длительном их влиянии они провоцируют инициацию вегетативной дисфункции (Беляева Л.М., 1996). Так, у детей с наследственностью по сердечно-сосудистой патологии хронические стрессы, перенапряжения в период пубертатной перестройки проявятся вегетативной дисфункцией со стороны сердца и сосудов. Вегетативная дисфункция нарушает иннервацию внутренних органов, что обусловливает развитие функциональной кардиопатии, сосудистые дистонии по гипер- и гипотоническому типам.
Повреждение и раздражение структур ВНС в различных органах или системах приводят к возникновению морфологических перестроек (спазм сосудов, дистрофия), связанных с выделением медиаторов (норадреналин, серотонин, ацетилхолин), гормонов коры надпочечников, биологически активных веществ (полипептиды, простагландины). Эти гуморальные изменения, в свою очередь, усугубляют вегетативный дисбаланс и провоцируют развитие в организме биохимических и иммунологических сдвигов, при длительном сохранении которых у ребенка создаются все условия для формирования психосоматического заболевания (Белоконь Н.А., Кубергер М.Б., 1987).
Биохимические методы исследования сыворотки крови и слюны
Для реализации поставленной цели было проведено биохимическое исследование сыворотки крови и слюны у 40 детей в возрасте от 6 до 17 лет, страдающих НЦД, и у 40 детей из первой группы здоровья, составивших контрольную группу. Все дети были разделены на 4 возрастные группы по 10 человек в каждой: 6-9 лет; 10-11 лет; 12-14 лет; 15-17 лет. Наряду со стандартными биохимическими показателями, отражающими функциональное состояние внутренних органов, в частности, печени, такими, как ЩФ, АЛТ и ACT, было проведено определение показателей, характеризующих состояние СРО и АОЗ.
Для определения выраженности гипоксических сдвигов было проведено определение уровня лактата и пирувата; ферментов АОЗ - СОД, ка-талазы; системы глутатиона - общего глутатиона, ГР, ГПО в двух биологических жидкостях - крови и слюне у детей разных возрастных групп с НЦД в сравнении со здоровыми.
Для оценки состояния антибактериальной резистентности детского организма было проведено исследование активности МПО.
Определение содержания лактата проводили по методу В.В. Меньшикова, Л.Н. Делекторской, Р.П. Золотницкой (1987).
Клиническое значение: любая форма гипоксии приводит к увеличению содержания лактата в крови. Принцип метода: из лактата в присутствии H2SO4, Н3РО4 и Си2+ образуется уксусный ангидрид (СН3СНОН), который реагирует с п-оксидифенилом, дает фиолетовое окрашивание продукта. Фотометрируют при у = 590 нм.
Определение содержания ПВК проводили по методу М.П. Баба-скина (1981).
Принцип метода: ПВК при взаимодействии с 2,4-ДНФГ образует гидрозон, который в щелочной среде дает окраску, интенсивность которой прямо пропорциональна концентрации ПВК. Колориметрируют при у = 440 нм.
Определение активности каталазы основано на том, что неразло-жившаяся перекись водорода образует с молибдатом аммония (ЫН4)бМо7024 комплексное соединение, окрашенное в желтый цвет, интенсивность которого определяли колориметрически (Королюк М.А. с соавт., 1988). Активность каталазы рассчитывали, исходя из є = 22,2 10 мМ см, и выражали в [мкКатал/мл].
Определяли оптическую плотность на ФЭК КФК 2-МП при длине волны X = 400 нм против контроля, в который субстрат вносили после добавления молибдата аммония.
Определение концентрации восстановленного глутатиона проводили методом G.L. Ellman (1959). В основе метода лежит реакция 5,5-дитиобис(2-нитробензойной) кислоты (5,5-ДТНБК) с восстановленным глутатионом, в ходе которой образуется окрашенное соединение с максимумом поглощения при длине волны А, = 412 нм. Концентрацию восстановленного глутатиона выражали в мкмоль/мг белка.
Активность ГПО определяли по скорости окисления восстановленного глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила по методу В.М. Моина (1986). Концентрацию восстановленного глутатиона до и после инкубации определяли спектрофотометрически при длине волны X = 412 нм. Активность данного фермента выражали в МЕ/мг белка.
Активность ГР определяли по скорости окисления НАДФН методом Л.Б. Юсуповой (1989). Инкубационная среда включала в себя 0,04 М натрий-калий-фосфатный буфер; 0,05 М КС1; 4 мМ ЭДТА; 0,3 мМ окисленного глутатиона (GSSG); 0,08 мМ НАДФН. Реакцию проводили при температуре 37С в течение 10 минут, а затем регистрировали уменьшение поглощения НАДФ при длине волны X = 340 нм на спектрофотометре СФ-46 (ЛОМО, Ленинград). Активность фермента выражали в мкмоль/мг белка.
Определение активности СОД в плазме крови проводили по методу Н.Р. Misra и I. Fridovich (1972) в модификации, проведенной на кафедре общей и клинической биохимии № 1 РостГМУ (Саркисян О.Г., 2000).
Определение активности МПО в плазме крови проводили по методу SJ. Klebanoff (1971), описанному М.Г. Шафран и С.Н. Лызловой (1975), результаты выражали в усл. ед. / мг белка. Определение активности ACT, АЛТ, ЩФ проводили по унифицированным методикам: ACT, АЛТ - по методу Райтмана-Френкеля (1957) (активность выражали в мм-ч/л), ЩФ - по гидролизу п-нитрофенилфосфата (Меньшиков В.В., 1987), активность которой выражали в ед/л. Статистическая обработка результатов исследования Статистическую обработку материала клинико-биохимического исследования проводили на персональном IBM-совместимом компьютере с применением пакета статистических программ для биомедицинских исследований "Statistica 6.0". Данные представлены как М + SEM, р - вероятность допустимой ошибки. Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента. Статистически достоверными считали отличия, соответствующие оценке ошибки вероятности р 0,05.
Содержание общего глутатиона и ферментов обмена глутатиона в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД
В клинической группе детей, больных НЦД, выявлено статистически достоверное увеличение активности СОД на 67,3% по сравнению с контрольной группой (табл. 2). При обследовании больных детей выявлено, что уровень активности каталазы в клинической группе превышает показатели в контрольной группе лишь на 8,6% (рис. 2).
Каталаза, являясь синергистом СОД в клетке, препятствует накоплению перекиси водорода — ингибитора СОД (Hodgson Е.К., Fridovich I., 1975). Изменения каталазы статистически не достоверны. Таблица 1
Клиническая группа 3.4. Содержание общего глутатиона и ферментов обмена глутатиона в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦЦ Содержание общего глутатиона в сыворотке крови детей с НЦД статистически достоверно снижено на 30,4%.
Активность ГПО в сыворотке крови клинической группы оказалась достоверно повышенной на 35,6% по сравнению с контрольной группой (табл. 3; рис. 3). Напротив, активность ГР в сыворотке крови клинической группы детей с НЦД оказалась ниже, чем в контрольной группе на 27,8%.
Активность МПО в клинической группе детей превышала на 15,9% содержание МПО в контрольной группе детей (табл. 4; рис. 4). При этом изменения МПО носят статистически достоверный характер.
Активности ACT и АЛТ в исследуемой группе детей с НЦД превышали показатели в контрольной группе соответственно на 37,5% и 6,3% (табл. 5). Отмечен рост ЩФ на 9,1% (рис. 5). В динамике изменений АЛТ и ЩФ различий нет. Таблица З Содержание общего глутатиона, активность ГР и ГПО в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД
Показатель Контрольная группа п = 40 Клиническая группа п = 40
Общий глутатион, мкмоль/мг белка 2,93 ± 0,28 2,04 ± 0,33 ГР, мкмоль/мг белка 3,88 ±0,31 2,80 ± 0,29 ГПО, МЕ/мг белка 30,67 ± 2,34 41,58 ±2,46 Примечания. р 0,05
Исходя из задач работы, представляет интерес проследить характер изменений ферментов-маркеров и АОЗ, выяснить особенности их взаимоотношений, определить наличие или отсутствие синергизма и оценить степень выраженности взаимосвязей маркеров цитолиза с активностью разных линий ферментативных звеньев АОЗ и тканевой гипоксией.
Активность СОД статистически достоверно повышена на 67,3% в клинической группе детей. Активность ACT в клинической группе на 37,5% достоверно превышала показатели в контрольной группе детей (табл. 7, рис. 7).
Мы провели сравнительный анализ характера изменений активности СОД и ACT (как показателя соматической дисфункции). Как видно из рис. 7, оба фермента имеют однонаправленную тенденцию к повышению, но активность СОД увеличена в значительно большей степени (на 67,3%), чем ACT (на 37,5%). Это свидетельствует о большей чувствительности СОД как фермента антиокислительной защиты и о необходимости изучения этого показателя для своевременного выявления ранних признаков НЦД. Таблица 6 Активность СОД и уровень лактата в сыворотке крови у здоровых детей и детей с НЦД
Активность ГПО в клинической группе детей оказалась повышена на 35,5% по сравнению с контрольной (табл. 8, рис. 8). Активность каталазы повышена всего лишь на 8,5%, что свидетельствует об отсутствии достоверного повышения активности каталазы. Антиоксидантный механизм действия этих ферментов несколько отличается. Так, в отличие от каталазы, активной только в отношении перекиси водорода, ГПО менее специфична и разрушает не только гидроперекиси ВЖК, которые могут образовываться в небольшом количестве под действием 02" и НО , но и принимает участие в обезвреживании пероксинитрита.
Таким образом, накопление лактата в сыворотке крови у детей с НЦД свидетельствует о развитии гипоксии в тканях при НЦД и переходе на анаэробный путь энергетического обмена, что является важнейшим компенсаторно-приспособительным механизмом при кислородной недостаточности.
Следствием гиперлактацедемии является метаболический ацидоз, являющийся дополнительным повреждающим фактором. Также при гипоксии имеет место усиление процессов ПОЛ и повышение активности СОД, что связано с усилением дисмутации 0 . Однако при этом нарушается согласованное действие паттерна ферментов первой линии защиты: СОД — каталаза, так, активность СОД значительно увеличивается, а в связи с недостаточной активацией каталазы по сравнению с СОД могут накапливаться неустраненные кислородные радикалы, оказывая токсическое действие на мембрану клетки. Параллельно нарушается координированная деятельность глутатионзависимых ферментов. Так, выявленное снижение активности фермента ГР, вероятно, является причиной дефицита восстановленного глутатиона и накопления его основной формы, что приводит к дисбалансу в работе всей глутатион-зависимой ферментативной системы.
Активность каталазы и СОД в слюне у здоровых детей и детей с НЦД
Учитывая, что вегетативные нарушения берут свое начало преимущественно в детском возрасте (Малая Л.Т., Волков В.И., 1978; Клиорин А.И., 1981), нами было проведено исследование сыворотки крови и слюны у 40 детей в возрасте от 7 до 17 лет, страдающих НЦД, а также 40 детей из первой группы здоровья, составивших группу сравнения.
Наряду с биохимическими показателями, отражающими функциональное состояние внутренних органов, в частности печени, такими как ЩФ, ACT и АЛТ, было проведено определение показателей, характеризующих состояние АОЗ у детей: первой линии защиты - СОД-каталаза, второй линии защиты - МПО, и третьей линии защиты — глутатион-зависимых ферментов: общего глутатиона, ГР и ГПО.
В результате выполненных исследований установлено, что у детей обшей возрастной группы, страдающих НЦД, в сыворотке крови достоверно увеличено содержание лактата (на 102,5%) по сравнению с контрольной группой.
Уровень ПВК, напротив, оказался сниженным на 40,7%, что, по-видимому, связано с усилением процесса восстановления пирувата в лактат. Накопление лактата в сыворотке крови у детей с НЦД свидетельствует о развитии гипоксии в тканях при НЦД и переходе на анаэробный путь энергетического обмена, что является важнейшим компенсаторно-приспособительным механизмом при кислородной недостаточности.
Проанализировав данные повозрастной динамики накопления лактата в сыворотке крови и слюне, можно сделать вывод, что наиболее выражены гипоксические процессы в возрастной группе детей 12-14 лет. Так, в сыворотке крови детей с НЦД среднее значение уровня лактата составило 4,01 ± 0,57 мкмоль/мл. Для сравнения в контрольной группе этот показатель составил 1,98 + 0,12 мкмоль/мл. Эти данные подтверждают формирование у детей подросткового возраста дисинхроза в работе нейроиммуноэндокринных сетевых взаимодействий.
В слюне наибольшее повышение уровня лактата оказалось в группе детей 6-9 лет (1,53 ± 0,13 мкмоль/мл), что, вероятно, может быть связано со сменой молочных зубов на постоянные, отсюда и изменение состава ротовой жидкости. В слюне детей контрольной группы уровень лактата оказался наибольшим у детей в возрасте опять-таки 12-14 лет и составил 1,62 + 0,82 мкмоль/мл. При исследовании сыворотки крови детей как контрольной, так и клинической группы прослеживается интересная закономерность: развитие гипоксии (судя по уровню лактата) происходит в зависимости от возраста детей - минимальное повышение наблюдается в группе детей 6-9 лет, затем происходит постепенное повышение этого показателя в возрастной группе 10-11 лет, достигая максимума в 12-14 лет, с последующим снижением в группе 15-17 лет. Причем такая динамика наблюдается в сыворотке крови детей и клинической, и контрольной групп.
В слюне детей с НЦД максимальное значение уровня лактата наблюдается в возрасте 6-9 лет, в возрасте 10-11 лет несколько снижается, у детей в возрасте 12-14 лет продолжается снижение уровня лактата до минимума (0,55 ±0,19 мкмоль/мл), и в группе детей 15-17 лет уровень содержания лактата приближается к таковому у детей 10-11 лет — 1,1 ± 0,06 мкмоль/мл, и, соответственно, 1,43 ± 0,42 мкмоль/мл.
Проведенный сопоставительный анализ клинической картины НЦД у детей (по данным историй болезни) показал, что существует зависимость между уровнем лактата в сыворотке крови и слюне и степенью выраженности дисфункции (повышение уровня АД, увеличение ЧСС, частота и тяжесть течения симпатоадреналовых кризов, цефалгии, кардиалгии, ДЖВП). Как следует из полученного материала, на основании определения уровня лактата в сыворотке крови и слюне у детей разных возрастных групп возможно выделение групп риска по НЦД для предупреждения перехода функциональных нарушений в органические. Таким образом, важно обратить внимание на информативность изменений уровня лактата в слюне, что позволяет рекомендовать этот показатель для включения в схему мониторинга.
В качестве клинического примера можно рассмотреть наблюдение ребенка с диагнозом НЦД по гипертоническому типу Дукова Михаила, 14 лет. Предъявлял жалобы на колющие боли в области сердца, независимо от нагрузки, времени суток. Отмечал головные боли в височных и затылочной областях. АД повышалось до 140/80 - 150/90 мм рт. ст. При исследовании сыворотки крови и слюны этого ребенка было выявлено повышение уровня лактата в сыворотке крови до 4,35 мкмоль/мл, в то время как средние значения составили в клинической группе 4,01 ± 0,57 мкмоль/мл, а в контрольной группе - 1,98 ± 0,12 мкмоль/мл. В слюне ребенка с НЦД уровень лактата был равным 1,65 мкмоль/мл при средних значениях 1,49 ± 0,15 мкмоль/мл в клинической группе и 0,97 ± 0,14 мкмоль/мл в контрольной группе.
Рассматривая вопрос о биохимическом механизме гипоксического состояния, которое, как мы убедились, лежит в основе патофизиологических процессов при НЦД, необходимо обратиться к самому понятию гипоксии. Как известно, гипоксия объединяет весь комплекс процессов в организме, обусловленных кислородной недостаточностью. Несмотря на снижение содержания 02, при гипоксии имеет место усиление процессов ПОЛ. Накопление продуктов ПОЛ выявлено в мозге, сердце, крови и других органах при гипоксической гипоксии (Горошинская И.А., 1988; Горошинская И.А. с соавт., 1992, 1994;
