Введение к работе
Актуальность темы.
Необходимость исследований вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) обусловлена его постоянной циркуляцией в природных очагах, приводящей к сезонным заболеваниям населения с тяжелым поражением центральной нервной системы и смертельными исходами. Периодический рост заболеваемости населения вызывает необходимость совершенствования средств вакцинопрофилактики и иммунодиагностики. Исследование антигенных и иммуногенных свойств белка Е оболочки вирионов позволило использовать его для диагностики клещевого энцефалита и для эпидемиологических оценок природных очагов. В настоящее время для профилактики клещевого энцефалита применяют очищенные инактивирован-ные вирионы. Однако индуцируемый такой вакциной иммунитет не приводит к полной нейтрализации ВКЭ. При лечении весенне-летнего клещевого энцефалита используются иммуноглобулины, направленные к структурным белкам. Функции неструктурных вирусных белков в развитии патологических и иммунных процессов в организме хозяина остаются неясными. К моменту начала данной работы было известно, что иммунизация гликопрогеином NS1 флавивирусов и антителами к нему обеспечивает защиту от заражения летальными дозами гомологичного вируса. Кроме этого, предполагалось участие белка NS1 в репликации вируса. Таким образом, исследование иммуногенных и антигенных свойств неструктурных белков ВКЭ является актуальным. Одним из перспективных подходов к исследованию свойств вирусных белков является использование моноклон&чьных антител (МКА). Структурно-функциональный анализ неструктурного гликопротеина NS1 ВКЭ с использованием набора МКА представляет несомненный интерес для молекулярной вирусологии и практического здравоохранения.
Цель и задачи работы.
Цель работы состояла в изучении иммуногенных и антигенных свойств гликопротеина NS1 и других неструктурных белков ВКЭ. В связи с этим было необходимо решить следующие задачи:
J) изучить антигенные и иммуногенные свойства вирусных белков посредством выявления специфичных антител в сыворотках крови и спинномозговых жидкостях больных клещевым энцефалитом;
получить гибридные лимфоидные клеточные линии и охарактеризовать секретируемые ими МКА к неструктурным белкам ВКЭ штамма Софьип;
выделить неструктурный гликопротеип NS1 ВКЭ методом аффинной хроматографии с использованием полученных МКА;
исследовать антигенную структуру белка NS1 с помощью МКА и поли-клональных антисывороток.
Научная новизна. Показано, что неструктурные белки ВКЭ являются им-муногенами как для людей, так и для мышей. Впервые получены гибридные клеточные линии, стабильно секретирующие МКА к неструктурным белкам ВКЭ (штамм Софьип)- Иммобилизация МКА, направленных к неструктурному белку NS1 ВКЭ на сефарозу, и последующая аффинная хроматография на полученных иммуносорбентах позволили выделить гликопротеип NS1. Пропедено сравнение
антигенных структур нативного и рекомбинантного белков NS1 ВКЭ (штамм Со-фьин). Доказано, что неструктурный белок NS1 ВКЭ на поздней стадии инфекции способен образовывать комплекс с белком Е оболочки вирионов.
Практическая значимость работы. Полученные результаты показали отсутствие корреляции между формой заболевания клещевым энцефалитом и развитием гуморального иммунного ответа. Обнаружение в сыворотках и спинномозговых жидкостях больных специфичных антител к неструктурным белкам ВКЭ предполагает возможность использования этих антител в качестве новых маркеров для диагностики клещевого энцефалита. Полученные МКА используются в лабораторных исследованиях для изучения свойств неструктурных белков ВКЭ.
Публикации и апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи. Результаты работы представлены на международной научной конференции "Вирусные, риккетсиозные и бактериальные инфекции, переносимые клещами" (Иркутск, 1996 г.), научной конференции "Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера" (Новосибирск, 1998 г.).
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 131 странице, состоит из введения, трех глав, выводов, списка литературы и содержит 28 рисунков и 13 таблиц.
