Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1 Апелин и APJ рецептор 14
1.2 Физиологическая роль системы апелин/APJ . 18
1.3 Действие апелина при патологических состояниях 22
1.4 Механизмы защитного действия апелина .25
1.5 Структурные аналоги апелина
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования .37
2.1 Пептиды апелина.. 37
2.2 Реактивы 38
2.3 Животные 39
2.4 Перфузия изолированного сердца крысы .39
2.5 Региональная ишемия сердца крысы in vivo .42
2.6 Оценка размеров ИМ .45
2.7 Приготовление безбелковых экстрактов ткани сердца 46
2.8 Определение метаболитов энергетического обмена 46
2.9 Определение активности МВ-КК и ЛДГ в плазме крови крыс 49
2.10 Определение активности ЛДГ в перфузате изолированного сердца .51
2.11 Определение активности антиоксидантных ферментов, содержания МДА и белка в сердце крысы 52
2.12 Оценка влияния пептидов на активность коммерческих ферментов СОД и КАТ .55
2.13 Регистрация активных форм кислорода в перфузате .55
2.14 Статистическая обработка результатов исследования 56
ГЛАВА 3. Результаты 57
3.1 Защитное действие апелина на ишемизированное изолированное сердце крысы .57 3.1.1 Влияние пептида А12 на восстановление функции изолированного сердца крысы .57
3.1.2 Влияние А12 на выведение ЛДГ в миокардиальный эффлюент .60
3.1.3 Влияние структурных аналогов пептида А12 на восстановление функции изолированного сердца крысы 61
3.1.4 Влияние структурных аналогов пептида А12 на активность ЛДГ в перфузате .62
3.1.5 Энергетическое состояние реперфузированного сердца крысы 63
3.2 Защитное действие апелина при региональной ишемии и реперфузии
сердца крысы in vivo .65
3.2.1 Влияние внутривенного введения пептида А12 на размеры ИМ .65
3.2.2 Влияние внутривенного введения пептида А12 на гемодинамические показатели .66
3.2.3 Влияние внутривенного введения пептида А12 на активность маркеров некроза 68
3.2.4 Влияние структурных аналогов пептида А12 на размеры ИМ .69
3.2.5 Влияние структурных аналогов пептида А12 на активность маркеров некроза .69
3.2.6 Влияние структурных аналогов пептида А12 на изменения гемодинамических показателей .70
3.2.7 Эффективность защиты сердца пептидом А12 и его структурными аналогами .71
3.2.8 Действие пептида А12 и его структурных аналогов на метаболизм ишемизированного миокарда 72
3.3 Влияние L-NAME на кардиозащитное действие А12 и его
структурного аналога АII .74 3.3.1 Восстановление коронарного потока и функции изолированного сердца крысы .75
3.3.2 Влияние L-NAME на выход ЛДГ в перфузат 76
3.3.3 Энергетическое состояние реперфузированного сердца при введении L-NAME 77
3.3.4 Гемодинамические показатели у наркотизированных крыс in vivo при введении L-NAME .78
3.3.5 Размеры ИМ и активность маркеров некроза при введении L-NAME у крыс in vivo 80
3.3.6 Энергетическое состояние ЗР при введении L-NAME у крыс in vivo 82
3.4 Антиоксидантные свойства пептида А12 и его структурного аналога АII .83
3.4.1 Влияние пептидов на активность ферментов антиоксидантной защиты и перекисное окисление липидов в изолированном перфузируемом сердце 84
3.4.2 Влияние пептидов на активность ферментов антиоксидантной защиты и перекисное окисление липидов в сердце крыс in vivo 85
3.4.3 Влияние пептидов на активность коммерческих ферментов СОД и КАТ .86
3.4.4 Влияние пептидов на образование АФК при реперфузии изолированного сердца крысы .88
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 91
4.1 Биологическая активность природного пептида А12 .91
4.2 Кардиопротекторные свойства структурных аналогов А12 96
4.3 Механизмы действия структурных аналогов А12 98
Заключение .105
- Физиологическая роль системы апелин/APJ .
- Определение метаболитов энергетического обмена
- Влияние структурных аналогов пептида А12 на восстановление функции изолированного сердца крысы
- Кардиопротекторные свойства структурных аналогов А12
Физиологическая роль системы апелин/APJ .
Открытие APJ рецептора и апелина. В 1993 году O Dowd и соавт. сообщили о клонировании гена, кодирующего новый G-белоксопряженный рецептор класса А, расположенного в 11 хромосоме (локус 11q12). Было показано, что новый рецептор, получивший название APJ, имеет высокую гомологичность с рецептором ангиотензина II АТ1 (до 50% по гидрофобным трансмембранным областям), но не связывается с ангиотензином II [1]. APJ рецептор был идентифицирован у большого числа различных видов животных и человека. Рецептор человека состоит из 380 аминокислотных остатков и содержит 7 трансмембранных доменов. APJ мышей и крыс содержит 377 аминокислотных остатков и обладает гомологичностью с рецептором человека (91% и 89% соответственно). По причине отсутствия известного лиганда к нему, долгое время считался орфановым. В 1998 году из экстрактов бычьего желудка был выделен новый эндогенный 36-аминокислотный пептид, названный апелин [2,3,4]. Было установлено, что это С-концевой фрагмент препробелка [2]. Апелин демонстрировал высокую степень связывания с APJ [5]. К настоящему времени нет никаких доказательств, что система апелин – APJ включает более одного рецептора.
Молекулярные изоформы апелина. Ген апелина локализован в Х хромосоме (локус Xq25-q26.1) [5] и кодирует препробелок, состоящий из 77 аминокислотных остатков, с сигнальной последовательностью в N-концевой области. После транслокации в эндоплазматический ретикулум и отделения сигнального пептида образуется пробелок из 55 аминокислотных остатков, который затем укорачивается до активных пептидов, обозначающихся по количеству аминокислотных остатков с С-конца, например апелин-36, -17, 15 13 и -12 (А36, А17, А13 и А12) [2,4,6]. Кроме того, А13 может подвергаться посттрансляционному пироглутаминированию на уровне N-концевого остатка глутамина (pA13). Эти короткие изоформы состоят из C-концевых фрагментов, которые могут быть ответственны за связывание с рецептором и биологическую активность апелина [4,7]. Было обнаружено, что препроапелин в нативной ткани существует как димер, стабилизированный дисульфидными мостиками остатков цистеина, а А36 и А13 являются мономерами [7]. Есть основания полагать, что эндогенный апелин имеет много изоформ [8]. Во-первых, хроматографические характеристики апелина, выделенного из экстрактов бычьего желудка были гетерогенными. Во-вторых, в последовательности препробелка бычьего апелина по ходу транскрипции после секреторной сигнальной последовательности из 22 аминокислотных остатков располагается много лизиновых (например, в положении 32, 61 и 72) и аргининовых (например, в положении 40, 46, 49, 59, 60, 63, 64, 66 и 68) остатков, которые являются потенциальными сайтами протеолитического расщепления [8]. В-третьих, синтетические пептиды апелина короче А36 (например, А17, А13, pА13) проявляют очень высокую активность к взаимодействию с APJ [2]. Кроме того, в молозиве крупного рогатого скота было обнаружено присутствие 46 различных пептидов апелина: от пробелка до А12 [9]. Таким образом, само понятие «эндогенный апелин» включает в себя совокупность различных изоформ пептида.
Деградация апелина. К настоящему времени схема деградации апелина полностью не изучена, однако известно, что АПФ2 отщепляет С-концевой фенилаланин (например, у А36 и А13) [10]. Исследование активности структуры in vitro показало, что такая модификация не инактивирует пептид, поскольку без С-концевого фенилаланина он сохраняет связывание с рецептором и свою функциональную активность у крыс, однако такой фрагмент не вызывает интернализацию рецептора in vitro и приводит к потере гипотензивного эффекта у крыс in vivo [11]. Эти данные свидетельствуют о том, что укороченные действием АПФ2 фрагменты вызывают конформационное состояние APJ рецептора, отличающееся от вызванного неукороченными пептидами. Кроме того, природные пептиды, циркулирующие в кровотоке активно подвергаются действию амино- и карбоксипептидаз. В опытах in vitro на плазме 10 здоровых добровольцев [12] было показано, что 80-мин. инкубация при комнатной температуре приводила к более чем 90% деградации А12, А13, А17, А36, а деградация pA13 составляла менее 50%. Большая стабильность наблюдалась при инкубации при 4С в присутствии ингибиторов сериновых, цистеиновых и металлопротеаз, в этом случае к 80-й минуте деградация пептидов составляла менее 30%, за исключением A13 с гораздо большей степенью распада [12], при этом А13 описан как субстрат АПФ2 – металлопротеазы, которая принимает участие в деградации апелина [10]. Кроме того, апелин быстро выводится из кровотока с временем полужизни в плазме не более 8 мин. [13,14,15]. Показано, что все предсказанные изоформы апелина присутствуют in vivo, но в сердечной ткани человека преобладающей является pA13 [16], что, по-видимому, объясняется защитой N-конца пептида пироглутаматной частью от экзопептидазной деградации [17]. В плазме преобладающими изоформами являются А17, А13 и pА13 [18,19]. Активность пептидов апелина варьируется в зависимости от экспериментальной системы, однако А13 и pА13 являются наиболее мощными активаторами APJ рецептора, которые экспрессируются клеточными линиями [2,6,8]. Связывание с рецептором. Предполагается, что за диссоциацию с APJ отвечает N-концевая область апелина [4]. Данные опытов in vitro показывают, что pA13 может более эффективно связываться с APJ, чем А36, но А36 показывает более медленную диссоциацию с APJ, чем pA13, таким образом вызывая пролонгированную биологическую активность. Работы по изучению структуры и активности апелина обнаружили, что последовательности аминокислотных остатков Arg-Pro-Leu-Arg и Lys-Gly-Pro-Met явяляются наиболее существенными для связывания пептида A13 с APJ рецептором (рис. 1), а замены Gln1, His7, Pro12 и Phe13 незначительно ухудшают сродство с рецептором [20]. Было показано, что два С-концевых фрагмента апелина N-ацетил-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe-COOH и N-ацетил-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe-COOH проявляют низкое сродство к APJ рецептору [20]. Кроме того, замена в структуре А13 Leu5 или Arg2 на Ala приводит к значительному (более чем 50-кратному) снижению способности связывания с APJ рецептором. Таким образом, последовательность Arg-Pro Leu-Arg в структуре апелина играет ключевую роль для связывания с рецептором. Эта гипотеза подтверждается результатами ЯМР исследований А17 (NH2-Lys-Phe-Arg-Arg-Gln-Arg-Phe-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met Pro-Phe-COOH), которые показали, что последовательность Arg-Pro-Leu-Arg образует четко определенный тип -поворота в растворе [21,22], который, как полагают, играет решающую роль в узнавании и связывании эндогенных пептидов с G-белоксопряженными рецепторами [23].
Определение метаболитов энергетического обмена
Энергетическое состояние реперфузированного сердца крысы. Изменение метаболического состояния изолированного сердца под влиянием 5-мин. инфузии перед ишемией природного пептида А12 или его структурных аналогов A II, АIII, АIV и AV к концу реперфузии представлено в таблице (прил. 2). В контроле наблюдалось значительное снижение содержания АТФ (до 34% от исходного состояния) и увеличение содержания АДФ и АМФ (в среднем в 1,7 и 5,1 раз соответственно). Общий пул адениннуклеотидов (АН) и энергетический потенциал (ЭП) постишемических кардиомиоцитов были уменьшены почти на 40% от исходных значений. Кроме того, содержание ФКр в миокардиальной ткани было снижено более чем в 2 раза от исходных значений, в то время как содержание лактата было в 4 раза выше. Эти изменения отражали недостаточное восстановление аэробного метаболизма в реперфузированных сердцах.
Инфузия A12 перед ишемией увеличивала восстановление AТФ в сердце в два раза, одновременно уменьшая содержание АДФ по сравнению с контролем. В результате АН сохранялся значительно лучше, чем в контроле, и достоверно не отличался от значения в исходном состоянии. Это перераспределение в содержании адениннуклеотидов значительно увеличивало ЭП в группе A12 по сравнению с контролем. Инфузия природного пептида не оказывала достоверного влияния на содержание Кр и Кр в сердце. Однако она улучшала восстановление ФКр в 1,5 раза по сравнению с контролем. Лучшее сохранение АТФ и ZАН в реперфузированном миокарде под действием А12 предполагало изменения в утилизации глюкозы – единственного энергетического субстрата, использующегося при перфузии сердец. В контроле содержание лактата и пирувата в миокарде было увеличено в 5 раз по сравнению с исходным значением (прил. 2), что свидетельствовало об анаэробном характере утилизации глюкозы при реперфузии. В противоположность контролю, в группе А12 накопления лактата в сердце к концу реперфузии обнаружено не было – его содержание не отличалось от исходного.
Влияние аналогов АII, АIII или АIV на энергетическое состояние реперфузированных сердец было аналогично действию A12. Эти пептиды значительно улучшали восстановление АТФ и ФКр, увеличивали сохранение АН и ЭП в постишемических кардиомиоцитах. Применение этих аналогов A12 снижало содержание лактата в сердце по сравнению с контролем практически до исходного значения. Содержание Кр в сердце после инфузии пептидов АII, АIII или АIV достоверно не отличался от этого показателя в контроле и в исходном состоянии. Таким образом, метаболическая защита, обеспеченная этими аналогами А12, была столь же эффективной как при введении природного пептида.
Инфузия перед ишемией потенциального функционального антагониста APJ рецептора пептида AV также улучшала метаболическое состояние реперфузированных сердец по сравнению с контролем. Это было подтверждено лучшим сохранением АТФ, АН, ЭП и ФКр и снижением содержания лактата в миокардиальной ткани по сравнению с контролем (прил. 2). Однако увеличение содержания АТФ, АН и ЭП в сердце было ниже, чем после инфузии A12 или структурных аналогов АII, АIII или АIV. Исключение составлял ФКр – его содержание в сердце достоверно не отличалось от этого показателя для пептидов A12, АII и АIII. Функциональные и метаболические данные, полученные в опытах с аналогом AV, показывают, что этот пептид наименее эффективен при защите сердца от ишемического и реперфузионного повреждения. Результаты опытов, выполненных на изолированном перфузируемом сердце, показали, что изученные структурные аналоги природного пептида А12 способны улучшать восстановление сократительной и насосной функции сердца при реперфузии и снижать развитие реперфузионной контрактуры. Эти эффекты сопровождаются лучшим сохранением макроэргических фосфатов (АТФ и ФКр), увеличением ЭП постишемических кардиомиоцитов и снижением накопления лактата в реперфузированном сердце. Отмечена способность структурных аналогов А12 (АII и АIII) уменьшать повреждения клеточных мембран на стадии ранней реперфузии. Из анализа приведенных данных следует, что по эффективности кардиозащиты модифицированные структурные аналоги А12 не отличались от природного пептида.
Целью этого этапа работы было выяснить, способны ли структурные аналоги апелина защищать сердце от ишемического и реперфузионного повреждения у наркотизированных крыс in vivo. Для этого было оценено влияние аналогов AII – AV на размеры острого ИМ, изменение гемодинамических показателей, метаболическое состояние ЗР и активность маркеров некроза в плазме в конце реперфузии. Действие этих соединений изучено при внутривенном болюсном введении в широком диапазоне доз в сравнении с эффектами природного пептида А12.
Влияние структурных аналогов пептида А12 на восстановление функции изолированного сердца крысы
В данной работе в качестве основы для создания потенциального лекарственного средства для лечения ИБС и сердечной недостаточности, был выбран природный пептид А12. Он представляет собой минимальный С концевой фрагмент полипептида препроапелина (66–77), который обладает высоким сродством к трансмембранному APJ рецептору, сопряженному с Gi белком, и является биологически активным соединением [131]. В отличие от более изученных пептидов А13, А17 и А36, последовательность остатков аминокислот в структуре этого апелина одинакова у человека и животных различных видов. Эндогенный A12 активно экспрессируется во многих тканях и органах, в особенности в головном мозге, надпочечниках, сосудистом эндотелии, сердце, легких и жировой ткани [2,5,6]. Действуя посредством нейроэндокринных механизмов А12 участвует в регуляции гомеостаза жидкости и в контроле потребления пищи [132,133]. Внутривенное введение экзогенного А12 способно снижать АД у анестезированных крыс in vivo в большей степени, чем введение таких же доз А13 и А36 [31]. Отмечено, что в результате этого происходит увеличение концентрации нитратов и нитритов в плазме крови животных, предполагающее образование NO. Это предположение было подтверждено отменой снижения АД в ответ на введение А12 под действием L-NAME. Гипотензивное действие А12 также было продемонстрировано в работе Lee и соавт. [5]. Этими авторами было изучено дозозависимое действие апелина на параметры гемодинамики у анестезированных крыс Wistar. Наблюдался быстрый ответ на внутривенное введение А12, который длился 3-4 мин и заключался в снижении систолического и диастолического АД и незначительном компенсаторном увеличении ЧСС. Положительное инотропное действие на сердце было обнаружено при внутрибрюшинной инъекции А12 крысам in vivo [43], которое заключалось в снижении пред- и постнагрузки и увеличении ЧСС.
В последние годы были получены подтверждения включения системы А12/APJ в регуляцию сердечно-сосудистой системы при различной экспериментальной патологии. Так, положительное инотропное действие на сердце крыс с сердечной недостаточностью было обнаружено Dai и соавт. [134]. Перфузия РКХ, содержащим 70 нМ А12, повышала силу сокращения трабекулы и увеличивала внутриклеточные осцилляции ионов Ca2+, которые регистрировали с помощью флуоресцентного индикатора fura-2. Гипотензивный эффект А12 был обнаружен у спонтанно гипертензивных крыс линии SHR [7]. Инъекции А12 в дозе 15 мкг/кг веса животного снижали систолическое и диастолическое давление, приводя к достоверному снижению среднего АД. Участие А12 и APJ рецептора в регуляции сердечно сосудистого гомеостаза было подтверждено у пациентов с сердечной недостаточностью [56]. С помощью иммунохимических методов эти авторы продемонстрировали увеличение уровня А12 в плазме больных на начальных стадиях сердечной недостаточности. В дополнение к этому ими было показано, что при использовании левожелудочкового аппарата вспомогательного кровообращения содержание пептида в эндотелии коронарных артерий и сердечной мыщце увеличивается. В недавнем клиническом исследовании, проведенном на пациентах с острым ИМ, было показано, что концентрация А12 (также как и других С-концевых фрагментов апелина) значительно снижена по сравнению с этим показателем у здоровых лиц [14]. Более того, содержание А12 остается существенно меньше нормального значения в течение последующих 24 недель. Эти факты указывают на то, что А12 и APJ рецептор могут быть перспективными терапевтическими мишенями у больных с сердечно-сосудистой патологией.
Результаты, полученные в настоящей работе, свидетельствуют о высокой биологической активности А12 в условиях экспериментальной ишемии и реперфузии сердца. Мы впервые показали прямое действие этого пептида на функцию и коронарные сосуды изолированного перфузируемого работающего сердца крысы. Было обнаружено улучшение восстановления показателей сократительной и насосной функции сердца при реперфузии под влиянием инфузии А12 как до, так и после периода глобальной ишемии. При этом было отмечено дозозависимое действие пептида – его способность оказывать пре- и посткондиционирующее действие на сердце возрастала с увеличением концентрации в РКХ (рис. 11). На модели перфузируемого сердца крысы улучшение показателей ИСФ и насосной функции (МО и АО) было связано с уменьшением подъема Рдиаст во время реперфузии (рис. 12). Защитное действие А12 на функцию сердца сопровождалось снижением повреждения мембран постишемических кардиомиоцитов, которое подтверждалось уменьшением активности ЛДГ в миокардиальном эффлюенте при реперфузии (табл. 3). В дополнение к этому в работе впервые показано, что помимо функциональных эффектов А12 улучшал метаболизм ишемизированного миокарда. Сердца, защищенные пептидом перед глобальной ишемией, обнаруживали лучшее восстановление аэробного обмена во время реперфузии. Содержание макроэргических фосфатов (АТФ и ФКр), АН и ЭП кардиомиоцитов было достоверно выше, чем в контроле. Эти сдвиги в энергетическом состоянии реперфузированного сердца сопровождались снижением содержания лактата в миокарде практически до предишемического значения (прил. 2), прямо указывая на снижение анаэробного гликолиза/гликогенолиза.
Кардиопротекторные свойства структурных аналогов А12
К началу выполнения данной работы в литературе отсутствовали данные об участие NO-зависимых механизмов, запускаемых апелинами, в уменьшении повреждения сердца при ишемии и реперфузии. Влияние L-NAME на введение А12 или его структурного аналога AII было выяснено нами на моделях ишемического и реперфузионного повреждения сердца ex vivo и in vivo. На изолированном перфузируемом сердце было обнаружено, что метаболическое и функциональное восстановление реперфузированного миокарда и стабильность мембран постишемических кардиомиоцитов значительно снижается, если в перфузионную среду одновременно с пептидами апелина добавлен L-NAME (рис. 15, табл. 8, прил. 7). На модели регионально ишемии миокарда у крыс in vivo ограничение ИМ сопровождалось снижением САД при внутривенном введении А12 или AII (рис. 16, табл. 9). Снижение САД под действием пептидов, скорее всего, было вызвано вазодилатационными свойствами NO, образующегося в результате активации NO-синтаз этими пептидами. Это подтверждалось значительным уменьшением кардиопротекторной эффективности обоих пептидов на фоне ингибирования активности NO-синтаз L-NAME – увеличением размеров ИМ и активности МВ-КК и ЛДГ в плазме параллельно с меньшим снижением САД во время реперфузии (рис. 16, табл. 9, 10). Взятые вместе, эти результаты убедительно демонстрируют одновременное снижение метаболического и функционального влияния струтрурного аналога AII в присутствии неспецифического ингибитора NO-синтаз L-NAME. Это предполагает участие NO в механизмах защитного действия AII, которые тесно связаны с восстановлением энергетического состояния реперфузированного миокарда. Дальнейшее изучение кардиотропных свойств структурных аналогов апелина с помощью спиновых ловушек АФК и NO, а также селективных ингибиторов компонентов киназных каскадов и изоформ NO-синтазы представляется практически значимым для дальнейшего изучения механизмов защиты сердца этими фармакологическими лигандами APJ рецептора.
Неполная отмена защиты структурным аналогом АН при ингибировании активности NO-синтазы L-NAME в наших опытах, скорее всего, связана с реперфузионными каскадами, которые запускаются этим пептидом независимо от NO. К ним, прежде всего, относится каскад MEK1/2 ERK1/2, вызывающий ингибирование проапоптозных белков BAX/BAD и уменьшение выхода из митохондрий цитохрома С. Уменьшение гибели кардиомиоцитов, инициированное ингибированием открытия митохондриальной поры пептидами апелина может быть также результатом фосфорилирования киназы гликоген синтазы-Зр или белков BAX/BAD протеинкиназой В (Akt) [79](рис. 4).
Повидимому, пептид AII может стимулировать образование NO не только посредством активации эндотелиальной NO-синтазы, но и увеличивая синтез самого белка. Так, при инкубации ткани аорты крысы было обнаружено, что пептид А13 увеличивает продукцию эндотелиальной NO-синтазы на уровне белка в несколько раз более эффективно, чем на уровне мРНК [141]. Увеличение экспрессии гена эндотелиальной NO-синтазы под действием структурных аналогов апелина может происходить не только в сосудах, но и в миокарде. На такую возможность указывает значительное возрастание продукции эндотелиальной NO-синтазы под действием А13 при моделировании гипоксии и реоксигенации в культуре неонатальных кардиомиоцитов крысы [72]. Отметим, что для образования NO под действием NO-синтазы необходимо наличие L-аргинина, транспорт которого в клетки осуществляется с
Показано, что экзогенный А13 увеличивает захват аортальной тканью L-аргинина из среды инкубации одновременно с увеличением продукции мРНК переносчиков этой аминокислоты САТ-1 и САТ-2В [141]. Таким образом, стимуляция транспорта L-аргинина в клетки и увеличение экспрессии NO-синтаз под действием природных пептидов апелина являются дополнительным подтверждением возможности использования пути L-аргинин/ NO-синтаза/NO структурными аналогами А12 для защиты миокарда. Изучение этих механизмов в будущем представляется необходимым для более четкого представления кардиопротекторного действия препаратов, разработанных на основе химического модифицирования С-концевых фрагментов апелина.
Механизмы антиоксидантного действия структурных аналогов А12. Структурные аналоги апелина могут снижать ишемическое и реперфузионное повреждение сердца вследствии антиоксидантных свойств NO, образующегося при активации изоферментов NO-синтазы [143,144]. Другой возможностью является влияние этих пептидов непосредственно на активность антиоксидантных ферментов сердца. Систематического изучения влияния пептидов апелина на активность ферментов антиоксидантной защиты сердца и перекисное окисление липидов к началу нашей работы проведено не было. Однако результаты работы Zeng и соавт., выполненной на культуре кардиомиоцитов крысы, предполагали такую возможность [72]. Эти авторы показали, что при моделировании гипоксии и реоксигенации экзогенный А13 уменьшал образование вторичного продукта свободнорадикального окисления липидов - МДА - и генерацию О2", а также увеличивал активность СОД, утилизирующей О2"". В связи с этим нами была сопоставлена способность структурного аналога AII уменьшать ишемическое и реперфузионное повреждение сердца с его влиянием на активности Cu/Zn СОД, КАТ и ГП, а также на образование МДА и АФК. На обеих моделях ишемического и реперфузионного повреждения сердца под действием AII эффективная защита реперфузированного миокарда сопровождалась предотвращением снижения или увеличением активности антиоксидантных ферментов по сравнению с контролем (табл. 11, 12). Повышению компенсаторных возможностей эндогенной антиоксидантной системы в сердце крыс под действием AII соответствовало снижение содержания МДА в реперфузированном средце. Эти результаты хорошо согласуются с меньшими повреждениями мембран кардиомиоцитов, которые были оценены по активности ЛДГ и МВ-КК при реперфузии (табл. 4, прил. 4).
