Введение к работе
Актуальность исследования. При проведении судебно-медицинских экспертиз вещественных доказательств на современном этапе все более значимым становится использование цитологических методов исследования (Томилин В.В., 2001; Барсегянц Л.О., 2005; Anderson Е., Beams H.W., 1993; Hertig А.Т., Adams E.S., 1997). Особенно это актуально при проведение судебно-медицинских экспертиз, связанных l половыми преступлениями, количество которых из года в год не уменьшается (Варшавец Н.П., 2005; Капустин А.В., Исаев А.И.. 2005). В связи с тем, что преступления, связанные с половой неприкосновенностью граждан РФ, относятся к категории особо тяжких, правоохранительные органы, проводя расследование, предъявляют высокие требования к уровню выполнения судебно-медицинских экспертиз (Барсегянц Л.О., 2005; Намаконов А.И., 2005).
При проведение экспертиз в связи с совершенными половыми преступлениями ведущим вопросом является морфологическая дифференциальная диагностика клеток вагинального и буккалыюго эпителия (Загрядская А.П., 2002; Петрова А.С.. 1998; Намаконов А.И., 2005, Blandau R.J., Bergsma D., 2004). Существующие в настоящее время различные подходы при подборе методик для решения этого вопроса имеют высокий процент отрицательных результатов (Антонова СИ., 1997; Петрова А.С., 1999; Гуртовая СВ., 1999; Загрядская, 2001; Федоровцев А.Л, Королева Е.И., 2003; Balboni G.C., 1999). В условиях очень ограниченного количества цитологического материала на вещественных доказательствах, нередко представленного единичными клетками, результаты судебно-медицинской экспертизы очень часто бывают отрицательными (Гуртовая СВ., 1999; Федоровцев А.Л, Королева Е.И., 2003).
Как следует из представленных данных, современные возможности морфологической дифференциальной диагностики эпителиальных клеток в экспертной практике достаточно ограничены. Именно поэтому использование в судебно-медицинской практике новых методов цитологического исследования, позволяющих повысить качество экспертиз, является актуальным и значимым.
Цель исследования: Оценить возможности и эффективность использования иммуноцитохимического метода при исследовании эпителиальных клеток в пятнах выделений на вещественных доказательствах для выявления и дифференцирования клеток вагинального и буккального эпителия.
Задачи исследования:
1. Оценить возможность использования иммуноцитохимического авидин-
биотинового метода с антителами к рецепторам эстрогена и прогестерона для
дифференциации клеток вагинального и буккального эпителия.
2. Изучить возможности оптимизации применения авидин-биотинового метода
для дифференцирования клеток вагинального и буккального эпителия путем
повышения температуры инкубации антител до 37 С.
-
Определить выраженность активности реакций клеток вагинального эпителия в зависимости от периода овариально-менструального цикла при использовании авидин-биотинового метода.
-
Использовать иммуноцитохимический авидин-биотиновый метод для определения органо-тканевой принадлежности эпителиальных клеток на вещественных доказательствах из практических экспертных наблюдений.
5. Дать экспертную оценку данных иммуноцитохимического исследования
клеток в пятнах выделений человека на вещественных доказательствах при
определении органо-тканевой принадлежности клеток эпителиального
происхождения.
Научная новизна. В работе впервые использован иммуноцитохимический авидин-биотиновый метод с целью морфологического дифференцирования клеток буккального и вагинального эпителия. Были определены изменения интенсивности окраски клеток вагинального эпителия в зависимости от фаз овариально-менструального цикла, при этом отмечено повышение активности рецепторного аппарата клеток вагинального эпителия: на эстроген - в фолликулиновую фазу цикла и в период овуляции; на прогестерон - в лютеиновую фазу цикла. Выявлена возможность оптимизации использования авидин-биотинового метода для дифференцирования клеток буккального и вагинального эпителия путем повышения
емпературы инкубации антител к эстрогену и прогестерону до 37 С. Определен
птимальный вариант проведения иммуноцитохимического авидин-биотинового
метода для окраски цитологических препаратов, пригоговлеиных из пятен на
вещественных доказательств, с целью дифференцирования клеток буккального и
вагинального эпителия.
Практическая значимость. Впервые использованный иммуноцитохимический
метод исследования с авидин-биотйновой системой снзуалцзаци!". для целей
судебно-медицинской практики позволил повысить результативность
цитологических исследований в пятнах выделений человека на вещественных
доказательствах. Применение в работе судебно-медицинских учреждений
иммуноцитохимического авидин-биотинового метода позволит повысить
результативность и качество судебно-медицинских экспертиз. Положения выносимые на защиту:
1. Определены возможности использования и оптимизации
иммуноцитохимического авидин-биотинового метода с антителами к рецепторам
эстрогена и прогестерона для дифференциации клеток вагинального и буккального
эпителия.
2. Эффективность использования авидин-биотинового метода с антителами к
рецепторам эстрогена и прогестерона коррелирует с активностью реакций клеток
вагинального эпителия в зависимости от конкретного периода овариально-
менструалыюго цикла.
3. Высокая эффективность иммуноцитохимического авидин-биотинового
метода исследования клеток в пятнах выделений человека на вещественных
доказательствах позволяет увеличить результативность проводимых судебно-
медицинских экспертиз и повысить их качество за счет возросшей объективности
выводов эксперта.
Внедрение результатов исследования в практику. Результаты, полученные в процессе выполнения настоящего исследования, внедрены в практическую работу судебно-биологических отделений Кемеровского, Новосибирского, Омского, Томского, Иркутского областных, Алтайского и Красноярского краевых бюро
судебно-медицинской экспертизы. Материалы, полученные в процессе выполнения работы, используются в учебном процессе на кафедрах гистологии и эмбриологии Красноярской и Омской государственной медицинской академии, Алтайском и Новосибирском государственном медицинском университете.
Апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на: Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств» (Воронеж, 2007); совместном заседании сотрудников ОГУЗ Новосибирское областное бюро судебно-медицинской экспертизы и коллектива кафедры судебной медицины с курсом факультета повышения квалификации и постдипломной подготовки врачей Новосибирского государственного медицинского университета (2007); научно-практической конференции, посвященной 65-летию образования органов судебно-медицинской экспертизы Вооруженных Сил Российской Федерации (Москва, 2008); юбилейной конференции, посвященной 70-летию кафедры судебной медицины с курсом факультета повышения квалификации и постдипломной подготовки врачей Новосибирского государственного медицинского университета (Новосибирск, 2007); ежегодной конференции студентов и молодых ученых Новосибирского государственного медицинского университета (Новосибирск, 2007,2008).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из которых 1 - в ведущем рецензируемом научном журнале. По материалам работы изданы методические рекомендации для врачей «Экспертная оценка результатов иммуноцитохимического (авидин-биотинового) метода при исследовании эпителиальных клеток в пятнах выделений человека».
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах и состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследования, четырех глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов (заключения), выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающей 172 источника, в том числе 65 зарубежных. Диссертация содержит 27 микрофотографий, 5 таблиц, 9 диаграмм.
Личное участие автора. Материалы, представленные в диссертации,
проанализированы и обработаны лично автором. Автор принимала
непосредственное участие в приготовление и окраске всех исследованных
цитологических препаратов.
