Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Индукция гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши Петракова, Ольга Сергеевна

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Петракова, Ольга Сергеевна. Индукция гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.03.04 / Петракова Ольга Сергеевна; [Место защиты: Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова].- Москва, 2013.- 152 с.: ил. РГБ ОД, 61 13-3/958

Введение к работе

Актуальность проблемы.

Актуальной проблемой современной клеточной биологии является изучение пластичности клеточного фенотипа и возможностей дифференцировки клеток в пределах одного зародышевого листка. Интерес клеточных биологов к in vitro дифференцировке клеток обусловлен тем, что данный процесс может помочь в решении ряда фундаментальных и прикладных задач, таких как установление гистогенетического родства различных клеточных типов, изучение регуляторных генных путей, in vitro моделирование болезней, тестирование лекарств, получение целевых клеток в достаточном для заместительной клеточной терапии количестве. Понимание молекулярно-генетических механизмов, которые задействованы при дифференцировке в те или иные типы клеток, поможет повысить эффективность дифференцировки и избежать потенциальных негативных эффектов.

С наибольшей эффективностью дифференцировка клеток осуществляется в пределах одного зародышевого листка. Что касается энтодермального зародышевого листка, то на данный момент накопилось много сведений о дифференцировке прогениторных клеток печени и поджелудочной железы как in vitro, так и in vivo (Yi et al., 2012). Однако печень и поджелудочная железа являются малодоступными источниками клеток. В то же время сложность терапии печени и недостаток донорских органов обусловливают поиск новых альтернативных источников клеток. Поднижнечелюстная слюнная железа имеет смешанное эктодермально-энтодермальное происхождение (Okumura et al., 2003; Larsen et al., 2010). Между ацинусом и начальной частью гранулярного протока слюнной железы располагается ниша, содержащая факультативные прогениторные клетки (Van Keymeulen et al., 2011; Okumura et al, 2012), имеющие энтодермальное происхождение (Tsuji, Nagai, 1993). Доступность клеточного материала слюнной железы делает этот источник клеток перспективным для дальнейшего изучения (Шубникова, Погодина, 2000; Baek et al., 2012), поднижнечелюстная слюнная железа может стать удобным источником энтодермальных клеток для заместительной терапии патологий печени. Однако на данный момент отсутствуют подробные сведения об экспрессии ключевых регуляторных генов в клетках слюнной железы и молекулярно-генетических механизмах, ответственных за дифференцировку этих клеток, не разработаны оптимальные дифференцировочные протоколы.

Все изложенное выше определило цель и задачи исследования.

Цель работы: изучить способность протоковых клеток поднижнечелюстной слюнной железы мыши к дифференцировке в гепатоцитарном направлении in vitro для исследования фенотипической пластичности клеток в пределах энтодермального зародышевого листка.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методы культивирования клеток поднижнечелюстной

слюнной железы и прогениторных клеток печени мыши и провести сравнительную характеристику культуры клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени.

  1. Провести сравнительный анализ культур клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени по экспрессии ключевых для гепатоцитарной дифференцировки регуляторных факторов и маркеров методами ПЦР-РВ и анализом профилей экспрессии генов глубоким секвенированием в масштабах целого транскриптома.

  2. Разработать программу дифференцировки культуры клеток слюнной железы мыши в гепатоцитарном направлении. Проанализировать степень гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши методами ПЦР-РВ и иммуноцитохимии, а также определить функциональную активность полученных клеток в сравнении с прогениторными клетками печени в 3D условиях культивирования.

  3. Изучить влияние деметилирующих агентов на экспрессию ключевых для гепатоцитарной дифференцировки регуляторных генов и маркеров. Проанализировать влияние деметилирующих агентов на гепатоцитарную дифференцировку клеток слюнной железы.

Научная новизна.

Впервые поведен сравнительный анализ экспрессии регуляторных генов и маркеров культуры клеток поднижнечелюстной слюнной железы и печени мыши, детально исследована экспрессия генов, характерных для протоковых клеток слюнной железы, проанализировано около 29000 мРНК транскриптов. Впервые обнаружена экспрессия маркера адгезии эпителиальных клеток ЕрСАМ в клетках слюнной железы.

Показано, что клетки поднижнечелюстной слюнной железы имеют значительное сходство с другими типами энтодермальных клеток, экспрессируют ряд маркеров прогениторных клеток (ЕрСАМ, CD90, CD 133, Sca-1, c-Kit), а также маркеры, характерные для клеток печени ALB, AFP, СК19 и c-Met. Культура клеток поднижнечелюстной слюнной железы экспрессирует мРНК ранних маркеров энтодермы Hnf-За и Sox9.

После дифференцировки клетки слюнной железы, подобно гепатоцитам, приобретают способность к синтезу мочевины. Вальпроевая кислота, являющаяся деметилирующим агентом, способна увеличить специфичность и эффективность гепатоцитарной дифференцировки клеток поднижнечелюстной слюнной железы.

Практическая значимость.

Результаты, полученные в данном исследовании, могут быть использованы для оптимизации протоколов дифференцировки энтодермальных клеток из предшественников, для выяснения гистогенетического родства энтодермальных клеток и для уточнения их происхождения. Полученные результаты делают возможным разработку принципиально новых методов получения энтодермальных клеток для регенеративной медицины.

Апробация диссертации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: Конференциях молодых ученых ИБР РАН (Москва, 2010, 2011); IV Всероссийской научной школе-конференции «Стволовые клетки и регенеративная медицина» (Москва, 2011); III Конференции «Биология стволовых клеток: фундаментальные аспекты» (Москва, 2011).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них статей в журналах, соответствующих Перечню ВАК - 2, тезисов докладов и материалов конференций - 3, получены положительные решения о выдаче 2 патентов.

Личное участие автора.

Анализ литературы, планирование работы, сбор материала, отработка методик, постановка и выполнение экспериментов, обработка и интерпретация результатов выполнены непосредственно автором. Автор лично участвовал в апробации результатов исследования, подготовке и написании основных публикаций по выполненной работе.

Структура и объем диссертации.

Похожие диссертации на Индукция гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши