Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы. Современные аспекты профилактики и лечения хронической венозной недостаточности. Иглица шиповатая - перспективный источник получения фитопрепарата венотонизирующего действия 10
1.1 Хроническая венозная недостаточность: этиология, патогенез и современные направления .терапии 10
1.2 Номенклатура венотонизирующих средств растительного происхождения и их стандартизация 15
1.3 Ботаническое описание, химический состав и применение в народной и научной медицине сырья иглицы шиповатой 19
1.4 Характеристика, методы выделения и анализа стероидных сапонинов... 21
1.5 Современные аспекты технологии и стандартизации сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья 26
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I 30
Экспериментальная часть. пояснение к эксперименту .31
ГЛАВА II. Фармакогностическое изучение сырья иглицы шиповатой и разработка методов контроля качества 37
2.1 Исследование морфологических признаков сырья 37
2.2 Исследование микроскопических признаков сырья 38
2.2.1 Анатомическое строение корневища 38
2.2.2 Анатомическое строение корня 3
2.3 Установление номенклатуры и норм числовых показателей 42
2.4 Определение критериев подлинности сырья 45
2.5 Разработка методики количественного определения стероидных сапонинов в сырье 48
2.6 Изучение стабильности в процессе хранения 56
2.7 Разработка нормативной документации на сырье 59
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ II 60
ГЛАВА III. Фитохимическое изучение корневищ и корней иглицы шиповатой 62
3.1 Определение рускогенина в сырье иглицы 62
3.2. Определение фенольных соединений 65
3. 3Определение свободных Сахаров 70
3.4. Определение аминокислот 77
3.5 Определение микро- и макроэлементы 80
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ III. 82
ГЛАВА IV. Разработка способа получения сухого экстракта иглицы шиповатой 83
4.1. Подбор оптимальных параметров экстракции 83
4.2 Изложение технологического процесса получения сухого экстракта иглицы шиповатой 91
4.3 Изучение физических свойств сухого экстракта 95
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ IV 96
ГЛАВА V. Изучение химического состава сухого экстракта и разработка показателей его качества 97
5.1 Изучение качественного и количественного состава биологически активных веществ сухого экстракта 97
5.1.1 Определение рускогенина 97
5.1.2 Определение фенольных соединений 100
5.1.3 Определение свободных Сахаров 104
5.1.4 Определение аминокислот 108
5.1.5 Определение содержания микро- и макроэлементов 110
5.2 Разработка методик стандартизации сухого экстракта иглицы 112
5.2.1 Определение подлинности сухого экстракта 112
5.2.2 Количественное определение суммы стероидных сапонинов 114
5.3 Изучение фармакологических свойств сухого экстракта иглицы 117
5.4 Разработка нормативной документации на сухой экстракт 117
Выводы к главе V 118
Общие выводы 119
Список литературы 122
- Ботаническое описание, химический состав и применение в народной и научной медицине сырья иглицы шиповатой
- Исследование микроскопических признаков сырья
- 3Определение свободных Сахаров
- Изложение технологического процесса получения сухого экстракта иглицы шиповатой
Введение к работе
Актуальность темы. Хроническая венозная недостаточность (ХВН) нижних конечностей — одно из наиболее часто встречаемых в повседневной медицинской практике патологических состояний, характеризующихся прогрессивным и часто осложненным течением, существенным социально-экономическим значением. По данным статистики в Российской Федерации данной патологией страдают от 30-50% трудоспособного населения, причем прослеживается зависимость частоты венозной патологии от возраста, которая начинает существенно увеличиваться после 40 лет и у людей старше 60 лет частота различных поражений венозного русла нижних конечностей достигает 80%.
В настоящее время номенклатура венотонизирующих средств представлена в основном препаратами растительного происхождения зарубежного производства на основе конского каштана обыкновенного и его сочетаний с другими компонентами.
Данное обстоятельство диктует необходимость поиска нового вида сырья и создания на его основе эффективного отечественного фитопрепарата для профилактики и лечения венозной недостаточности.
Перспективным объектом изучения, на наш взгляд, являются подземные органы иглицы шиповатой Ruscus aculeatus L., (семейство Liliaceae) используемые в производстве биологически активных добавок к пище, а также
в получении лекарственных препаратов венотонизирующего действия Цикло-3 крем и Цикло-3 форт, капсулы (Франция).
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение подземной части иглицы шиповатой, разработка технологии получения сухого экстракта и их стандартизация.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:
провести фармакогностическое изучение подземных органов иглицы шиповатой, установить диагностически значимые признаки в макро- и микроскопическом строении сырья;
разработать методики качественного и количественного определения основных групп биологически активных веществ (БАВ) в подземных органах иглицы шиповатой;
- установить закономерности выхода БАВ из лекарственного
растительного сырья в зависимости от основных факторов, влияющих на
процесс экстракции;
разработать рациональную технологическую схему получения сухого экстракта, позволяющую проводить максимальное извлечение БАВ;
исследовать химический состав, технологические свойства и разработать показатели качества сухого экстракта иглицы шиповатой, провести валидацию методик анализа;
- по результатам исследований оформить технические условия (ТУ) на
новый вид лекарственного растительного сырья - корневища и корни иглицы
7 шиповатой, разработать проект фармакопейной статьи (ФС) на иглицы
шиповатой экстракт сухой, оформить лабораторный регламент на получение
сухого экстракта, оформить протокол валидации методик анализа.
Научная новизна работы. Информационно-аналитическими исследованиями показана необходимость разработки отечественного лекарственного средства венотонизирующего действия.
На основании макро- и микроскопического анализа установлены диагностически значимые признаки в морфологическом и анатомическом строении корневищ и корней иглицы шиповатой.
Подобраны условия анализа БАВ в сырье иглицы с помощью физико-
химических методов: хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ),
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ),
спектрофотометрии. Изучен качественный и количественный состав основных групп БАВ (стероидные сапонины, фенольные соединения, органические кислоты, сахара, аминокислоты), состав микро- и макроэлементов.
Установлены закономерности выхода экстрактивных веществ и стероидных сапонинов из растительного сырья в зависимости, от степени его измельченности, типа- экстрагента, соотношения сырье/экстрагент, гидродинамических условий, кратности экстракции, температуры, позволяющих разработать рациональный способ получения сухого экстракта иглицы шиповатой.
Подобраны условия анализа стероидных сапонинов в растительном сырье и сухом экстракте и разработаны методики их стандартизации.
8 Показана возможность разработки отечественного лекарственного
средства венотонизирующего действия на основе иглицы шиповатой.
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:
- Технические условия ТУ 9377-170-04868244-2008 «Корневища и корни
иглицы шиповатой»;
Проект ФС «Иглицы шиповатой экстракт сухой» (Акт внедрения методики количественного определения суммы стероидных сапонинов в иглице шиповатой экстракте сухом в Государственном учреждении здравоохранения «Центр сертификации и контроля качества лекарств Департамента здравоохранения г. Москвы» (ГУЗ «ЦСиККЛ ДЗ»);
Лабораторный регламент ЛР 04868244-01-09 на производство иглицы шиповатой экстракта сухого.
Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских -работ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2006 — 2010 гг.», задание 04, шифр 04.13 «Разработка технологий производства высокоэффективных лечебных и профилактических препаратов из растительного сырья».
Основные положения, выносимые на защиту:
- результаты фармакогностического изучения сырья иглицы шиповатой;
результаты исследований качественного состава и количественной оценки БАВ иглицы шиповатой;
результаты исследований по установлению закономерности выхода БАВ в зависимости от степени измельченности сырья, вида экстрагента, соотношения сырье/экстрагент, кратности экстракции, температуры, гидродинамических условий и разработки технологии сухого экстракта;
результаты разработки методик контроля качества сырья и сухого экстракта иглицы шиповатой, обеспечивающих сквозную стандартизацию от источника к лекарственному средству, результаты валидации методик анализа.
Ботаническое описание, химический состав и применение в народной и научной медицине сырья иглицы шиповатой
Согласно данным литературы, род иглица (Ruscus) в мировой флоре представлен 10 видами [25], из которых на территории СНГ произрастает 4 вида: иглица колхидская (R. colchicum P.F.Yeo (R.hyppophyllum aucf), иглица подъязычная {R. hyppoclosswn L.), иглица гирканская (R. Hyrcanus Woronov) и иглица черноморская (R. ponticus Wororonov ex Grossh.). [26, 38, 42].
Иглица шиповатая (Ruscus aculeatus L.) сем. Лилейные (Liliaceae L.) — двудомный прямостоячий полукустарник высотой 20-60 см, с ползучим корневищем и превращенным в филлокладии боковыми ветвями. Филлокладии жесткие, кожистые, эллиптической или ланцетной формы, оттянутые на конце в колючее остроконечие, с выдающимися параллельными жилками и мелкими пленчатыми шиловидными листьями. Цветки мелкие с зеленоватым увядающим шестираздельным околоцветником, расположены на нижней поверхности филлокладиев в пазухе маленького пленчатого ланцетного прицветника. В тычиночных цветках — сросшиеся в яйцевидную трубку тычинки, пестичные цветки состоят из сложного пестика с трехгнезднои завязью и головчатым рыльцем, окруженного сросшимися в трубку и лишенными пыльников тычиночными нитями. Плод — мясистая, красная чаще односемянная ягода [25, 74, 75, 76].
Иглица шиповатая произрастает в ущельях в светлых можжевеловых, фисташковых, сосновых и дубовых лесах горных районов западной Европы, наряду с этим широко культивируется как декоративное растение в европейский странах, в т.ч. на юге России, на Кавказе в Крыму [25, 80].
На протяжении многих лет препараты иглицы применяются как капилляропротективное, противовоспалительное, венотонизирующее средство. В РФ в настоящее время зарегистрированы французские препараты «Цикло-3» (крем) и «Цикло-3 форт» (капсулы), содержащие сухой экстракт иглицы шиповатой, используемые в терапии венозной недостаточности [33].
По данным литературы подземные органы иглицы содержат стероидные сапонины - рускозиды, состоящие из агликона — рускогенина (рис. 1.3.2) или его изомера неорускогенина и углеводной части, присоединенной с С1 гидроксилу и содержащей до 4 Сахаров (рамноза, глюкоза, арабиноза) [80, 94]. Рис. 1.3.2 - Структурная формула рускогенина
Следует отметить, что в зарубежных фармакопеях (USP, ВР) описание сырья иглицы шиповатой и методик его стандартизации отсутствует, также статьи на данное сырье не представлены и в гомеопатических фармакопеях (немецкой, французской, индийской) [85, 95, 99, 108, 117]. В выпускаемых препаратах «цикло 3» и «цикло 3 форт» используется сухой экстракт иглицы шиповатой, соответствующий требованиям стандарта фирмы-производителя Пьер Фабр Медикамент Продакшн (Франция). Характеристика, методы выделения и анализа стероидных сапонинов
Стероидные сапонины представляют собой природные гликозиды, обладающие гемолитической активностью и распадающихся при кислотном гидролизе на моносахариды и агликон (сапогенин) стероидной природы. В зависимости от стероидной части молекулы стероидные сапонины делятся на две группы: спиростанолового и фуростанолового типа [36, 68, 72, 100]. Сахарные компоненты, присоединенные в положении 3 могут содержать от 1 до 9 моносахаридов (D-глюкозу, D-галактозу, L-рамнозу, D ксилозу, L-арабинозу), соединенных как линейно, так и с разветвлением цепи.
Стероидные сапонины широко представлены в растительном мире, наиболее часто они встречаются в растениях семейств диоскорейные, лилейные, бобовые, лютиковые, норичниковые, пасленовые [70].
В растениях стероидные сапонины находятся во всех частях растения, однако наибольшее их количество накапливается в подземных органах, преимущественно концентрируются в мезофилле и паренхиме. Содержание сапонинов колеблется от 0,01 до 60 % [34, 70].
По физико-химическим свойствам стероидные сапонины являются в основном бесцветными или слегка желтоватыми аморфными веществами; в кристалличестком состоянии известны только представители этой группы БАВ, имеющие до четырех моносахаридных остатков [15, 30].
Исследование микроскопических признаков сырья
Для выявления диагностических признаков в анатомическом строении проведено микроскопическое исследование корневища PI корня иглицы шиповатой.
При рассмотрении микропрепаратов поперечного среза корневища должны быть видны: покровная ткань, узкая кора, кольцо механической ткани, широкая сердцевина с проводящими пучками. Покровная ткань - эпидерма представлена округлыми клетками с утолщенной наружной стенкой, бурого цвета. На микропрепарате покровной ткани в плане видны устьица аномоцитного типа и полигональные, вытянутые клетки. Паренхима коры представлена округлыми, тонкостенными, тангентально вытянутыми клетками, среди которых встречаются идиобласты с пучками рафид оксалата кальция. Кольцо механической ткани состоит- из 1-2 рядов тангентально вытянутых с утолщенными, одревесневшими стенками клеток перициклической . склеренхимы. Сердцевина представлена округлыми, различных размеров паренхимными клетками, среди которых имеются идиобласты с пучками рафид оксалата кальция. Концентрические центрофлоэмные (амфивазальные) проводящие пучки, диффузно рассеяны в сердцевине, при этом более крупные (по диаметру) из них расположены к центру корневища, а мелкие - ближе к кольцу склеренхимы, иногда вплотную к нему (рис.2.2.1.4).
При рассмотрении микропрепаратов поперечного среза корня должно быть видно первичное строение: широкая мощная кора и небольшого диаметра полиархный центральный (осевой) цилиндр с центростремительной дифференциацией сосудов ксилемы. Покровная ткань корня - ризодерма (каждая клетка эпидермиса развилась в одноклеточный волосок). Ризодерму подстилает однорядный слой экзодермы, состоящей из полигональных радиально вытянутых клеток с лигнифицированными стенками.
Паренхима коры корня представлена округлыми клетками разнообразного размера, межклетники имеют, преимущественно, треугольную форму. Среди паренхимных клеток встречаются идиобласты с пучками рафид оксалата кальция (рис.2.2.2.5).
Внутренняя граница коры представлена кольцом эндодермы, состоящей из U - образных клеток с толстыми одревесневшими внутренними и боковыми стенками, среди которых имеются тонкостенные пропускные клетки, располагающиеся напротив каждого луча ксилемы. Наружный слой осевого цилиндра - перицикл - однорядный, выражен слабо. Участки флоэмы в осевом цилиндре располагаются между лучами ксилемы, которая занимает основную площадь осевого цилиндра, и представлена волокнами ксилемы с одревесневшими толстыми стенками, среди которых видны многочисленные лучи из трахеид протоксилемы и крупных сосудов. В центральной части корня расположена сердцевина, состоящая из округлых тонкостенных клеток, среди которых могут встречаться идиобласты с пучками рафид оксалата кальция.
Выбор номенклатуры числовых показателей и установление их норм произведены в соответствии с требованиями ГФ XI изд. к оформлению НД на лекарственное растительное сырье на основании результатов анализа 5 опытных партий иглицы шиповатой корневищ и корней. Для стандартизации и контроля качества нового вида цельного лекарственного растительного сырья нами предлагается использовать номенклатуру числовых показателей, принятую в современной нормативной документации на официнальные виды лекарственного растительного сырья.
В их числе: потеря в массе при высушивании; содержание золы общей; содержание золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм, содержание других частей растения, в т.ч. отделенных при анализе; содержание органической и минеральной примеси.
Кроме того, в проект нормативной документации включены показатели: содержание суммы стероидных сапонинов в пересчете на рускогенин. Нормы для этих показателей рекомендованы на основании результатов анализа образцов от опытных партий сырья. 1. Содержание суммы стероидных сапонинов в пересчете на рускогенин в исследуемых партиях колебалось от 3,42 до 3,55 %. В проекте НД предлагается установить норму по этому показателю не менее 3 %, учитывая, что на исследовании находились опытные партии сырья. 2. Влажность. Результаты анализа по содержанию влаги составили от 6,05 до 8,34 %. Следует отметить, что образцы сырья перед анализом хранились в условиях отапливаемого помещения (в лаборатории). В проекте НД норму для этого показателя рекомендуется установить не более 13 % по аналогии с требованиями НД на подземные органы других видов лекарственных растений. 3. Содержание золы общей. По результатам анализа содержание золы общей в сырье не превышало 13 % (от 11,98 до 12,52 %). В проекте НД норма рекомендована не более 13 %.
3Определение свободных Сахаров
Изучение свободных Сахаров проводили методом ВЭЖХ с рефрактометрическим детектированием. Наряду с определение качественного состава свободных Сахаров проводят исследование свободных органических кислот. Методика проведения анализа: Около 10,00 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 200 мл, прибавляют 100 мл воды и нагревают в течение 2 ч на кипящей водяной бане, затем охлаждают, фильтруют в мерную колбу вместимостью 200 мл и объем раствора доводят кислоты раствором серной 0,01М до метки и перемешивают (испытуемый раствор). По 20 мкл испытуемого раствора и растворов СО лимонной, щавелевой, янтарной кислоты, глюкозы, арабинозы, галактозы вводят в хроматограф. Результаты представлены на рис. 3.3.11.
Для количественной оценки содержания углеводов в сырье иглицы выбран метод спектрофотометрии. Предлагаемый нами метод предусматривает экстракцию полисахаридного комплекса из сырья водой, его осаждение из водного извлечения спиртом этиловым, гидролиза и образования окрашенного комплекса продуктов гидролиза (моносахаров) с пикриновой кислотой в щелочной среде и последующим измерением его оптической плотности [5, 22, 71].
В ходе разработки методики были подобраны следующие параметры: измельченность сырья, время экстракции, время гидролиза полисахарида, время образования окрашенного комплекса. В результате было установлено, что оптимальным является использование сырья, измельченного до размера частиц, проходящего сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм при однократной экстракции в течение 1 ч при соотношении сырье/экстрагент 1:25, времени гидролиза 2 ч и времени реакции 1 ч. Изучение спектра поглощения комплекса моносахаридов иглицы показало, что окрашенный комплекс имеет максимум поглощения при длине волны 466±2 нм, аналогичный максимум имеет комплекс глюкозы с пикриновой кислотой (рис. 3.3.12). Таким образом, предложено использовать в качестве аналитической длину волны 466 нм и проводить определения суммы моносахаридов после гидролиза полисахарида в пересчете на глюкозу.
Около 2,000 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 300 мл, прибавляют 200 мл воды очищенной и нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч на кипящей водяной бане. Извлечение охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр под вакуумом. Фильтрат количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, объем раствора доводят водой до метки (раствор А). 10 мл раствора А помещают в.колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл 10 % раствора кислоты серной, перемешивают в течение 5 мин и нагревают с обратным холодильником в течение 1 часа на электрической плитке. Извлечение охлаждают и количественно переносили в стакан вместимостью 50 мл. Колбу промывают 5 мл 30 % раствора натрия гидроксида и 4 раза по 5 мл водой очищенной, присоединяя их к основному раствору, затем нейтрализуют потенциометрически до рН 6,5-7,0 30 % раствором натрия гидроксида и 10 % раствором серной кислоты. Раствор количественно переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл и объем раствора доводят до метки водой очищенно В две мерные колбы вместимостью 50 й, перемешивают и фильтруют через бумажный складчатый фильтр (белая лента), отбрасывая первые 15-20 мл фильтрата (раствор Б).
В две мерные колбы вместимостью 50 мл отмеривают 2,5 мл 1 % раствора кислоты пикриновой, 7,5 мл 20 % раствора натрия карбоната и перемешивают в течение 5 мин, в одну колбу прибавляют 2 мл раствора Б (испытуемый раствор), в другую 5 мл раствора глюкозы СО и перемешивают в течение 1-2 мин. Колбы с содержимым погружают в кипящую водяную баню на 1 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора водой очищенной до метки, перемешивают.
Оптическую плотность испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 466 нм, в кюветах с толщиной поглощающего слоя жидкости 10 мм, используя в качестве раствора сравнения следующий: В мерную колбу вместимостью 50 мл отмеривают 2,5 мл 1 % раствора кислоты пикриновой, 7,5 мл 20 % раствора натрия карбоната и перемешивают в течение 5 мин и нагревают в кипящей водяной бане 1 ч. Раствор охлаждают и объем раствора доводят до метки водой очищенной, перемешивают. Параллельно измеряют оптическую плотность комплекса глюкозы.
Изложение технологического процесса получения сухого экстракта иглицы шиповатой
ТП 2.1.1. В сборник с помощью цилиндра измеряют 3,646 л спирта этилового 96 % (3,500 л 100 %) и 1,486 л воды очищенной, перемешивают и отбирают пробу полученного спирта для определения его крепости на анализ. Получают 5 л спирта этилового 70 % (плотность 0,8854 г/см ) или 3,500 л 100 %, который используют для экстракции измельченного сырья.
ТП 2.1.2. Экстракт из измельченных корневищ и корней иглицы шиповатой получают трехкратной экстракцией в колбе, соединенной с обратным холодильником и мешалкой. Нагрев реакционной смеси осуществляется с помощью колбонагревателя с терморегулятором.
При первоначальном ведении процесса экстракцию измельченного сырья проводят спиртом этиловым 70 %. При последующих загрузках на первую экстракцию подают извлечение, полученное при третьей экстракции предыдущей загрузки с добавлением такого количества спирта этилового 70 %, чтобы объем экстрагента составлял 5 л. 0,5 кг измельченных корневищ и корней иглицы шиповатой загружают в круглодонную колбу, заливают 5 л экстрагента. После окончания загрузки проводят экстракцию при постоянном перемешивании и нагревании до температуры (60±5) С в течение 2 часов. После чего извлечение фильтруют в сборник, а сырье еще дважды экстрагируют аналогичным способом. Шрот после помещают в шротосборник и отправляют в отвал.
Фильтрование проводят под вакуумом через слой ваты гигроскопической, находящийся между двумя листами бумаги фильтровальной, помещенной на перфорированную пластинку воронки Бюхнера в сборник.
Получают 3,620 л первого экстракта (плотность 0,8935 г/см ), 3,620 л второго экстракта (плотность 0,8901 г/см ), 3,620 л — третьего (плотность 0,8855 г/см). Первый и второй экстракты объединяют (объем 7,640 л, плотность 0,8933 г/см3) и передают на ТП. 2.3.
Объединенный экстракт порциями переносят в круглодонную колбу, которую соединяют с роторным испарителем.
Упаривание ведут при температуре реакционной массы (60±5) С и давлении 0,09 мПа (0,9 кгс/см") приблизительно до« 1/16 первоначального объема (0,5 л). В результате упаривания получают 0,5 л водного кубового остатка (плотность 1,068 г/см) и 6,38 л отгона спирта этилового 71 % (плотность 0,8852 г/см ). Отгон помещают в сборник и вновь используют после приготовления спирта этилового 70 % для экстракции сырья. Водный кубовой остаток, содержащий действующие вещества, сливают в сборник. Потери спирта при экстракции, фильтрации, упаривании и со шротом составляют 0,59 л или 28,3 % от загруженного. ТП 2.4 Центрифугирование концентрированного экстракта. Концентрированный экстракт подвергают очистке от балластных веществ центрифугированием на центрифуге. Получают- очищенный экстракт (плотность 1,056 г/см ) и осадок в количестве 0,029 кг, который помещают в контейнер и отправляют в отвал.
Очищенный экстракт сливают в сборник и передают на ТП 2.5. ТП 2.5. Сушка очищенного концентрированного экстракта.
Очищенный концентрированный экстракт разливают примерно поровну в три выпарительные чашки и помещают в сушильный шкаф. Сушку экстракта проводят при температуре (60±5) С. Получают 0,076 г сухого экстракта.
