Введение к работе
Актуальность темы. Азотсодержащие соединения основного ;арактера (АССОХ) как вещества, обладающие сильным физиологическим действием находят широкое применение в современной іедицинской практике. Необходимо отметить, что АССОХ (в том іисле амидопирин, амизил, атропин, пахикарпин, промедол, трихнин и другие, которые явились предметом нашего более де-ального рассмотрения на различных этапах химико-токсикологи-іеского исследования) после введения в организм оказывают не олько лечебное действие, но при определенных условиях могут виться причиной аллергических состояний, острых и хронических травлений, нередко с летальным исходом.
В последние годы в большинстве развитых стран мира отме-іается резкое увеличение количества отравлений лекарственными ірепаратами, в том числе и АССОХ. Отмечаются комбинирование отравления АССОХ в сочетании с другими веществами. В іашей стране эта проблема также является актуальной. В настоянеє время приходится наблюдать интоксикации, возникающие у іаркоманов и токсикоманов. Встречаются случаи умышленного ірименения ряда сильнодействующих лекарственных веществ с іелью приведения потерпевшего в беспомощное состояние с по-ледующим применением противоправных действий. Немедицин-кое потребление сильнодействующих лекарственных ненаркотических) средств, способных вызывать состояние завини ости может повлечь за собой вредные последствия для обще-тва, поскольку аналогично наркотикам приводит к деградации [ичности, к конфликтам с законом.
Диагностика отравлений представляет большие трудности, ак как клиническая, патолого-анатомическая и гистологическая
картина при интоксикации человека АССОХ, как правило, нехарактерна и не позволяет установить и дифференцировать отравления этими соединениями. В таких случаях основным доказательством причины интоксикации являются результаты химико-токсикологического исследования.
Несмотря на значительное число работ, посвященных анализу азотсодержащих соединений основного характера, до настоящего времени продолжают оставаться актуальными вопросы исследования в области разработки новых и дальнейшего совершенствования существующих методик их химико-токсикологического анализа. Успешная реализация этой проблемы может быть выполнена при применении различных скрининговых систем и широком использовании современных физико-химических методов анализа, обладающих экспрессностью, высокими разрешающими возможностями и обеспечивающими определение не только нативных токсических веществ, но и их основных метаболитов, применительно к исследованию биологических объектов, не только свежих, но и находящихся в состоянии гнилостного изменения.
Цель и задачи исследования. Теоретическое и практическое обоснование изолирования, очистки, концентрирования, определения лекарственных азотсодержащих соединений основного характера и их метаболитов для создания новых методик химико-токсикологического анализа на основе результатов микрокристаллоскопии, УФ - спектрофотометрии, экстракционной фотоколориметрии, хроматографии в тонких слоях сорбента и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
- теоретически прогнозировать, экспериментально подтвердить оптимальные условия изолирования азотсодержащих веществ
основного характера и применить полученные результаты для разработки методик выделения их из биологических объектов;
- предложить эффективные способы очистки АССОХ, выде
ленных из биологического материала;
- провести сравнительное изучение хроматографического
разделения АССОХ на различных сорбентах, в различных систе
мах растворителей ТСХ и ВЭТСХ с целью систематизации и уни
фицирования;
обосновать выбор комплекса реакций и методов обнаружения АССОХ, обеспечивающих чувствительность и специфичность идентификации;
разработать чувствительные методики количественного определения АССОХ на основе УФ - спектрофотометрии, экстракционной фотоколориметрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии;
изучить пригодность разработанных методик обнаружения и количественного определения для химико-токсикологического анализа азотсодержащих соединений основного характера.
Научная новизна. Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность прогнозирования оптимальных условий экстрагирования азотсодержащих соединений в зависимости от рКа, рН среды и природы органического растворителя.
В результате проведенных систематических исследований по сравнительному хроматографнческому разделению АССОХ предложена новая оригинальная система растворителей. Рассчитана ее разрешающая способность, показана возможность использования для скрининг - анализа.
Разработаны условия разделения и обнаружения АССОХ в тонком слое сорбента, а также на пластинах ВЭТСХ и "Сорбфил" на основе поэтапного комбинированного детектирования.
Показана эффективность предлагаемой системы растворителей для очистки АССОХ, выделенных из биологических объектов, от сопутствующих балластных веществ.
Предложены микрокристаллоскопические реакции на амидопирин с роданидными комплексами цинка, кобальта, кадмия; клофелин с кислотой золотохлористоводородной; промедол с кислотой пикролоновой и ализариновым красным.
1'ачработаны методики идентификации и количественного определения АССОХ, имеющих хромофорные группы, на основе методов УФ - спектроскопии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Показаны достоинства кислоты пикриновой как реагента для экстракционно-фотометрического определения АССОХ.
Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены оптимальные условия образования и экстрагирования продуктов взаимодействия АССОХ с кислотой пикриновой.
Изучены спектральные характеристики продуктов взаимодействия лекарственных азотсодержащих соединений основного характера с кислотой пикриновой. Установлено, что продукты взаимодействия АССОХ с кислотой пикриновой являются ионными ассоциатами.
Показано, что реакция взаимодействия с кислотой пикриновой в избранных условиях может быть использована для разработки унифицированной методики экстракционно-фотометрического определения многих лекарственных АССОХ.
Разработана экспрессная методика экстракционно-фотометрического количественного определения атропина сульфата, па-
хикарпина гидройодида, промедола, стрихнина нитрата, амизила, основанная на реакции взаимодействия с кислотой пикриновой, в субстанции, лекарственных формах и биологическом материале.
Р. связи с активным метаболизмом амидопирина в организме разработаны условия изолирования, доказательства и количественного определения его главных метаболитов 4-аминоантипи-рина и 4-ацетиламиноантипирина на основе ХТС, УФ - спектроскопии и ВЭЖХ.
Изучены вопросы сохраняемости отдельных АССОХ в трупном материале и моче.
Практическая ценность и внедрение результатов исследования. В рамках общего совершенствования химнхо-токсихологн-ческого анализа на основе принципов комплексного использования химических и современных физико-химических методов разработаны методики выделения и определения азотсодержащих Соединений основного характера в биологических субстратах, позволяющие сократить время проведения экспертиз и обеспечивающие более эффективное решение судебно-химических задач.
Результаты проведенных исследований рекомендованы для внедрения и используются в судебно-медицинской практике, в центрах по лечению острых отравлений и в химико-токсикологических лабораториях медико-профилактических и наркологических центров.
По теме диссертационного исследования подготовлено информационное письмо, которое прошло апробацию в 3-х лабораториях Министерства здравоохранения РФ (Бюро судебно-медицинской экспертизы ГУЗАМО, Бюро судебно-медицинской экспертизы Липецкой и Свердловской областей), положительно оценено, рекомендовано к печати Научно-исследовательским инсти-
тутом судебной медицины, издано и разослано для внедрения в судебно-хииические отделения Бюро СМЭ Российской Федерации.
Материалы исследования вошли в учебник профессора М.Д.Швайковой "Токсикологическая химия". - М.: Медицина, 1975. - С. 205 - 207; методические указания "Химико-токсикологический анализ веществ, вызывающих одурманивание". - М.: МЗ СССР, 1989. - С. 80 - 82; в учебно-методические разработки: "Группа веществ, изолируемых экстракцией полярными растворителями". - М.: 1ММИ им. И.М.Сеченова, 1987. - С. 14 - 15, 77; "Группа ядовитых и сильнодействующих веществ, изолируемых полярными растворителями. Качественные реакции". - Пермь: ПГФИ, 1993.- С. 21 - 22; в сборник "Расчетные задачи по фармакопейному анализу лекарственных веществ".- Пермь: ПГФИ, 1993. -72 с.
Отдельные разработанные методики включены в практику судебно-медицинских лабораторий через постоянно действующие курсы усовершенствования судебно-медицинских экспертов-химиков страны при кафедре токсикологической химии ММА им, И.М.Сеченова н циклы специализации "Химико-токсикологический анализ наркотических и одурманивающих веществ в биологических жидкостях" при кафедре токсикологической химии Пермской фармацевтической академии.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на съездах, конференциях, совещаниях с опубликованием тезисов: на Всесоюзном совещании по аналитическому контролю производства лекарственных и фармацевтических препаратов, Пермь, 1974 г.; на Втором Всесоюзном съезде фармацевтов, Рига, 1974 г.; на Республиканском совещании "Актуальные вопросы судебно-медицинской экспертизы", посвященном 50-летию образования Узбекской ССР, Нукус, 1974 г.; на семинаре
преподавателей кафедр токсикологической химии, Москва, 1974
г.; на Первом Всесоюзном съезде судебных медиков, Киев, 1976 г.;
аа Республиканской конференции "Хроматографические и элек-
грофоретические методы исследования биологически активных
гоединений", Свердловск, 1976 г.; на научно-практической кон
ференции "Вопросы охраны окружающей среды", Пермь, 1978 г.;
іа 7-ой областной научно-технической конференции по химии и
симической технологии, Пермь, 1979 г.; на III Всесоюзном съезде
фармацевтов, Кишинев, 1980 г.; на научио-практической конфе-
жнцни "Совершенствование методов анализа лекарственных
:редств", Тюмень, 1984 г.; на Всесоюзном симпозиуме
Современные проблемы антидопингового контроля в спорте",
Москва, 1985 г.; на научно-практической конференции Въентьян-
жого медицинского института, Лаос, 1987 г.; на Всесоюзной
:онференции, посвященной 20-летию создания Государственного
іаучно-исследовательского института по стандартизации и кон-
ролю качества лекарственных средств Минздрава СССР
Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных
редств", Москва, 1991 г.; на международной научно-практиче-
хой конференции "Фармация и фармакология", Пермь, 1993 г.; на
еспубликанской научно-практической конференции
Биоповреждения в промышленности", Пенза, 1994 г.; на межву-овской научной конференции, посвященной 30-летию Тюменско-о Государственного медицинского института "Актуальные про-лемы фармации", Тюмень, 1994 г.; на юбилейной научной кон-іеренции, посвященной 60-летию Курского Государственного іедицинского университета "Актуальные вопросы эксперимен-альной и клинической медицины и фармации", Курск, 1995 г.; на [ Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство",
-к-
Москва, 1995 г.; на научных конференциях Пермского Государственного фармацевтического института, 1974 - 1995 г.г.
В полном объеме результаты диссертационного исследования доложены на межкафедральной конференции Пермской фармацевтической академии, 1996 г.
Публикации, По теме диссертации опубликовано 37 работ, информационное письмо, учебное пособие для студентов и слушателей факультета усовершенствования провизоров, получено 4 рационализаторских предложения.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 275 страницах машинописного текста, содержит 60 таблиц, 35 рисунков. Работа состоит из введения, 6 глав, выводов, списка литературы, включающего 394 источника, из них 115 на иностранных языках и приложения.
