Введение к работе
Актуальность темы. Для России с ее богатейшими растительными ресурсами характерен широкий масштаб производства фитопрепаратов. В состав многих из них входят флавоноидные соединения.
Относительно недавно этот список пополнился препаратом Диквертин, обладающим антиоксидантными и капилляропротекторными свойствами. Растительным источником диквертина служит древесина лиственницы. Состав его представлен тремя флавоноидными соединениями при подавляющем количестве (90% и выше) одного из них – дигидрокверцетина.
Банк присущих диквертину фундаментальных фармакологических свойств обеспечивает ему базисный статус для создания на его основе препаратов, комбинированных с другими лекарственными средствами с целью оптимизации отдельных видов фармакологического действия. В последние годы проведены совместные исследования сотрудниками НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН и кафедры органической химии ММА им. И.М. Сеченова по разработке принципиально новой группы гемореологических лекарственных препаратов. Известно, что гемореологические нарушения осложняют течение таких заболеваний, как ишемическая болезнь сердца, артериальная гипертензия и др.
Препарат, сочетающий диквертин и аскорбиновую кислоту, зарегистрирован как ангиопротекторное лекарственное средство Асковертин. Препарат, сочетающий диквертин и ацетилсалициловую кислоту (под рабочим названием Саливертин), прошел стадию доклинического изучения с выявлением антитромбоцитарного и гемореологического действия. Cочетание диквертина с двумя компонентами – аскорбиновой кислотой и -каротином – используется как биологически активная добавка к пище «Каровертин».
Появление новых комбинированных препаратов в силу усложнения состава действующих веществ, существенно различающихся по свойствам, ставит задачу поиска оптимальных путей их фармацевтического анализа.
Актуальность настоящей работы определяется необходимостью совершенствования на современном физико-химическом уровне стандартизации базового фитопрепарата диквертина, а также создания системы стандартизации новых комбинированных препаратов.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлась разработка методологического подхода к оптимизации хроматографического анализа в качестве сквозного унифицированного метода стандартизации как базового препарата диквертина, так и комбинированных препаратов на его основе.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
модификация и унификация методик анализа диквертина – от растительного сырья, субстанции, стандартного образца до лекарственной формы;
совершенствование методик спектрального (УФ, ИК, ЯМР) анализа стандартного образца дигидрокверцетина;
разработка методик хроматографического анализа с учетом специфичности состава комбинированных препаратов – асковертина, саливертина и БАД – каровертина;
валидация предлагаемых методик на основе изучения соответствующих валидационных характеристик;
включение разработанных методик в фармакопейную документацию.
Научная новизна. Предложен единый методический подход к стандартизации комбинированных препаратов на базе диквертина путем сквозного использования метода ВЭЖХ в сочетании со специфичностью пробоподготовки.
Определены оптимальные хроматографические условия эффективного разделения флавоноидных компонентов диквертина и аскорбиновой кислоты, компонентов диквертина и ацетилсалициловой и салициловой кислот в составе комбинированных препаратов – асковертина и саливертина соответственно. Разработаны селективные и воспроизводимые методики качественного и количественного анализа действующих веществ комбинированных препаратов.
Предложены спектральные (УФ-, ИК-, ЯМР 1Н, ЯМР 13С) и хроматографические критерии подлинности и оценки качества стандартного образца дигидрокверцетина.
Разработан оригинальный комбинированный способ использования в определенной последовательности методов твердофазной экстракции, ВЭЖХ и спектрофотометрии для анализа разнополярных компонентов каровертина.
Впервые разработана система стандартизации лекарственного растительного сырья – древесины лиственницы цельной и измельченной.
Практическая значимость. Методики анализа действующих веществ препаратов диквертина, асковертина и саливертина валидированы и унифицированы с целью определения таких фармакопейных показателей, как подлинность, родственные соединения, посторонние примеси, растворение, однородность дозирования, количественное определение. Разработанные аналитические методики включены в зарегистрированные фармакопейные статьи: Лиственницы древесина цельная, измельченная «ангро»; Дигидрокверцетин–стандартный образец; Диквертин субстанция; Диквертин таблетки; Асковертин таблетки; в проект фармакопейной статьи Саливертин таблетки; в Технические условия на БАД «Каровертин».
Предложенные методики апробированы на производственных сериях таблеток диквертина, асковертина и саливертина.
Основные положения, выносимые на защиту.
Результаты изучения хроматографических характеристик флавоноидных компонентов диквертина. Усовершенствованная методика стандартизации и оценки качества диквертина методом ВЭЖХ.
Спектральная (УФ-, ИК-, ЯМР 1Н и ЯМР 13С) и хроматографическая характеристика дигидрокверцетина как стандартного образца и оценка его индивидуальности и степени чистоты.
Оптимальные хроматографические параметры ВЭЖХ для одновременного качественного и количественного анализа аскорбиновой кислоты и флавоноидов диквертина. Валидированная и унифицированная для определения ряда фармакопейных показателей методика стандартизации препарата асковертина методом ВЭЖХ.
Оптимальные хроматографические параметры ВЭЖХ для одновременного качественного и количественного анализа ацетилсалициловой кислоты, примеси салициловой кислоты и флавоноидов диквертина. Валидированная и унифицированная для определения фармакопейных показателей методика стандартизации желудочно-резистентных таблеток саливертина методом ВЭЖХ.
Комплексный аналитический подход (твердофазная экстракция, ВЭЖХ, спектрофотометрия) к анализу компонентов каровертина (аскорбиновая кислота, диквертин, b-каротин).
Стандартизация лекарственного растительного сырья – древесины лиственницы цельной, измельченной «ангро».
Результаты изучения возможности использования разработанных методик в анализе опытно-промышленных серий асковертина и лабораторных серий саливертина.
Апробация работы. Основные положения работы доложены на IV, VI, IX и X международных съездах «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Великий Новгород 2001, С-Пб 2002, 2005 и 2006), на VI Симпозиуме по фенольным соединениям (Москва 2004) на XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2005).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры органической химии ММА им. И.М. Сеченова: «Физико-химические основы стандартизации и биотрансформации лекарственных средств и биологически активных добавок к пище». Номер госрегистрации 01200110547.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 0000 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, двух глав, отражающих собственные экспериментальные исследования, выводов, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 000 таблицами, 000 рисунками и 000 схемами. Библиографический список включает 124 отечественных и 64 зарубежных источников.
