Введение к работе
Актуальность темы. Негативная эпидемиологическая ситуация по инфекционно-вирусной заболеваемости в России (25-30 млн. случаев ежегодно) обуславливает необходимость разработки новых высокоэффективных противовирусных лекарственных средств.
На кафедре органической химии ГОУ ВПО «Уральский государственный технический университет - УПИ» в ходе изучения группы азолодигидропиримидиновых соединений получено биологически активное вещество триазопирим (дигидрат натриевой соли 5-метил-6-нитро-4,7-дигидро-1,2,4- триазоло [1,5-a] пиримидин-7-она).
Данное вещество характеризуется умеренной токсичностью и обладает выраженной противовирусной активностью в отношении возбудителей гриппа различных типов, в том числе гриппа птиц, ряда геморрагических лихорадок, энцефалита.
Перспективность триазопирима отражает целесообразность его внедрения в медицинскую практику, однако, способы контроля качества указанного вещества не разработаны. Кроме того, результаты изучения отечественной и зарубежной литературы свидетельствуют о практически полном отсутствии сведений по анализу азолодигидропиримидиновых веществ с узловым атомом азота.
Следовательно, актуальным является проведение исследований по изысканию методов и разработке методик анализа триазопирима, необходимых как для стандартизации и фармакокинетического изучения указанного вещества, так и для совершенствования способов контроля качества азолодигидропиримидинов с узловым атомом азота.
Цели и задачи исследования. Целью диссертационного исследования явилась разработка и валидация методик контроля качества триазопирима, оценка стабильности и стандартизация изучаемой субстанции.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
- изучить физические и физико-химические свойства триазопирима, предложить методики его идентификации химическими и физико-химическими методами;
- выявить оптимальные условия, предложить методики ВЭЖХ и ГЖХ определения органических примесей в исследуемой субстанции;
- изучить кислотно-основные свойства и разработать методику количественного анализа триазопирима в субстанции титриметрическим методом;
- обосновать нормы качества триазопирима, рассмотреть влияние физических факторов на стабильность исследуемого вещества, установить срок годности;
- провести подбор условий и разработать методику определения триазопирима в биологических жидкостях методом ВЭЖХ;
- предложить проект ФСП на субстанцию триазопирима и методические указания по определению исследуемого вещества в биологических жидкостях.
Научная новизна. Впервые проведено химико-фармацевтическое изучение нового азолодигидропиримидинового биологически активного вещества триазопирим.
Установлены УФ, ИК спектрофотометрические, термические параметры триазопирима. Методом изомолярных серий исследованы реакции диазотирования - после гидрирования нитрогруппы - и азосочетания исследуемого вещества. С помощью эмиссионного спектрального анализа изучены процессы осаждения триазопирима ионами тяжелых металлов.
С использованием статистической оптимизации выявлены условия определения нелетучих органических примесей в субстанции триазопирима методом обращенно-фазной (ОФ) ВЭЖХ. В результате реализации стрессовых экспериментов показано, что примеси являются продуктами деструкции основного вещества. Доказано присутствие в триазопириме остаточного органического растворителя, найдены оптимальные условия его ГЖХ-определения с использованием насадочной колонки.
В результате УФ спектрофотометрического установления константы основности теоретически обоснована необходимость использования протогенной неводной среды для количественного анализа триазопирима методом ацидиметрии. Обоснованы нормы качества субстанции триазопирима. В результате изучения стабильности исследуемого вещества в установленных условиях хранения методом «ускоренного старения» определен срок годности (5,5 лет).
В опытах in vitro с использованием математического планирования выбраны условия изолирования триазопирима из биологических жидкостей, для определения исследуемого вещества в извлечении рекомендовано использовать метод ОФ ВЭЖХ.
Практическая значимость результатов исследования. Предложены способы идентификации исследуемого вещества физико-химическими (УФ, ИК спектроскопия, термография) и химическими методами.
Разработаны методики установления чистоты субстанции триазопирима методами ГЖХ (остаточный органический растворитель) и ВЭЖХ (нелетучие органические примеси). Предложена методика количественного анализа триазопирима в субстанции методом ацидиметрического титрования в протогенной среде. Разработана ВЭЖХ методика определения триазопирима в биологических жидкостях.
В результате валидации установлена пригодность разработанных методик для анализа, показаны, в частности, их правильность и удовлетворительная сходимость результатов.
Внедрение результатов исследования в практику. Разработаны проект ФСП на субстанцию триазопирима и методические указания по определению исследуемого вещества в биологических жидкостях. Проект ФСП принят ОАО «Уралбиофарм». Получены положительные результаты апробации подготовленных методических указаний в ГОУ ВПО «Уральский государственный технический университет-УПИ» и ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия».
Положения, выдвигаемые на защиту:
1. Результаты экспериментов по установлению УФ, ИК спектрофотометрических, термических характеристик триазопирима, разработке способов его идентификации физико-химическими и химическими методами.
2. Итоги исследований по разработке методик испытания триазопирима на чистоту методами ГЖХ и ВЭЖХ
3. Результаты экспериментов по изучению кислотно-основных свойств триазопирима и выбору условий количественного анализа исследуемого вещества титриметрическим методом
4. Нормы качества, стабильность и срок годности субстанции триазопирима
5. Результаты исследований по разработке методик определения триазопирима в биологических жидкостях методом ВЭЖХ
Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии в 2005 и 2006 гг. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 2 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах «Фармация» и «Экология человека».
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава», номер государственной регистрации 01200206156.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста, содержит 35 таблиц и 40 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, 4 глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 129 источников, из которых 44 на иностранных языках, и приложений.
