Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы
1.1 Применение облепихи в народной медицине в качестве лекарственного растения 10
1.2 Ботаническая характеристика облепихи и биологически активные вещества, входящие в её состав 12
1.3 Биохимические и фармакологические свойства облепихового масла 22
1.4 Применение облепихового масла в медицине 28
1.5 Ботаническое описание и биологически активные вещества каперсов колючих 32
2 Материалы и методы исследования
2.1 Общие методы 37
2.2 Частные методы 40
2.2.1 Определение содержания каротина в облепиховом масле 40
2.2.2 Определение сумм токоферолов в облепиховом масле 40
2.2.3 Определение неомыляемых веществ 43
2.2.4 Выделение и количественное определение гликозидов в каперсах колячих 45
2.2.5 Выделение и количественное определение алколоидов в корнях каперсов 45
2.2.6 Выделение и количественное определение сапонинов в корнях каперсов 46
2.2.7 Выделение и количественное определение флавоноидов в каперсах 46
2.2.8 Выделение и количественное определение кумаринов в каперсах 48
2.2.9 Выделение и количественное определение жирного масла в плодах каперсов колючих 48
2.2.10 Выделение и количественное определение полисахаридов в каперсах 49
2.2.11 Определение содержания связанных полисахаридов. 50
2.3. Фармакологические методы 51
2.3.1 Изучение противовоспалительного действия облепихового масла 52
2.3.2 Изучение влияния облепихового масла на модельзаболевания язвы желудка 52
2.3.3 Изучение механизма действия облепихового масла 53
2.3.4 Метод определения влияния облепихового масла на артериальное давление 57
2.3.5 Изучение влияния облепихового масла на биоэлектрическую активность сердца 57
2.3.6 Изучение влияния облепихового масла на желчеотделение 58
2.3.7 Действие облепихового масла на моторную и секреторную функции желудка 58
2.3.7.1 Изучение влияния облепихового масла на моторную функцию желудка 61
2.3.7.2 Изучение влияния облепихового масла на секреторный аппарат желудка 61
2.3.8 Изучение острой токсичности облепихового масла 62
2.3.9 Изучение хронической токсичности облепихового масла 62
3 Собственные исследования
3.1 Изучение химического состава облепихи и каперсов колючих 63
3.1.1 Изучение условий произрастания облепихи 63
3.1.2 Химический состав плодов и масла облепихи Западного Памира 65
3.1.3 Характеристика флавоноидов, содержащихся в листьях и плодах облепихи 104
3.1.4 Качественный анализ природных соединений растения каперса колючего 125
3.1.5 Идентификация природных соединений из каперсов колючих 127
3.1.6 Получение галеновых препаратов из цветков, плодов и корней каперсов колючих 132
3.2 Фармакологическое изучение облепихового масла 139
3.2.1 Изучение активности суммарных препаратов из плодов и листьев облепихи Западного Памира 139
3.2.2 Токсические свойства облепихового масла 141
3.2.2.1 Изучение острой и хронической токсичности облепихового масла 141
3.2.2.2 Патоморфологическое исследование органов белых крыс и собак, получивших различные виды облепихового масла 150
3.2.3 Специфическая активность облепихового масла 158
3.2.3.1 Противовоспалительное действие облепихового масла 158
3.2.3.2 Активность облепихового масла на модели язвы желудка 165
3.2.3.3 Механизм действия облепихового масла на модели экспериментального воспаления 176
3.2.4 Влияние облепихового масла на функции жизненно важных органов 187
3.2.4.1. Влияние облепихового масла на артериальное давление и дыхание 187
3.2.4.2 Влияние облепихового масла на биоэлектрическую активность сердца 188
3.2.4.3. Влияние облепихового масла на желчеотделение 190
3.2.4.4 Влияние облепихового масла на моторную функцию желудка 192
3.2.4.5 Влияние облепихового масла на секреторный аппарат желудка 196
3.3. Фармакологическая активность масла каперсов 203
Заключение 210
Литература 234
- Биохимические и фармакологические свойства облепихового масла
- Химический состав плодов и масла облепихи Западного Памира
- Патоморфологическое исследование органов белых крыс и собак, получивших различные виды облепихового масла
- Фармакологическая активность масла каперсов
Биохимические и фармакологические свойства облепихового масла
Богатый и разнообразный набор биологически активных веществ, содержащихся в облепихе, обусловил внимание, проявляемое к этому растению и продуктам его переработки, главных из которых является облепиховое масло.
Плоды облепихи, произрастающей в различных географических зонах, отличаются процентным содержанием масла на 100 гр. сырого веса. Е.Е.Шишкина (1960) приводит следующие данные для сортов: Алтайская-3,28-6,95%о, Чулышманская - 2,84-4,03%», Саянская-2,5-3,87% , Тяньшанская - 1,91-4,41%, Даурская - 2,23,-3,27%. В.Н. Ручкин,(1929) сообщал о содержании масла в плодах облепихи, равном 2%, А.Ф. Евтушенко (1950) - 8,8%, Д.К. Шапиро и др. (1978) - 3,49-4,75%. Содержание масла в Азербайджанской облепихе составляло 1,89-3,6%) (Али-заде М. и др., 1978), Абхазской - 5,03 (Перевитинов Ф.В. 1949), масличность алтайской облепихи составляла 3,4-6% (ободовская Д.А., 1957). Е.И. Пантелеевой (1977) было установлено колебание масличности по годам в пределах 4,7-8,9%. Сорта облепихи , "Новость Алтая", "Масличная", "Дар Катуни", "Витаминная" содержали от 3,38 до 4,6% масла, монгольская облепиха - 2,51-7,16% (Жамъянсан Я., 1973).
Масла из различных растений имеют свои определённые биохимические показатели, являющиеся интегральными показателями качественного состава облепихового масла.
В таблице № 1 приведены физико- химические характеристики облепихового масла, полученного различными авторами различными методами (Горяев М.И. и .др. 1972, Жамъянсан Я., 1973, Зегельман А.Б., и др. 1981, Казанцев В.О., 1959, Ободовская Д.А., 1957, Ручкин В.М., 1929, Шугам Н.В., 1969). Эти данные позволяют установить следующие средние показатели облепихового масла. (Приложение № 1) удельный вес - 0,9210-0,9243 г/смЗ, показатель преломления - 1,4700 (для экстракционного масла-1,4590-1,4660) кислотное число - 3,2-14,0 йодное число - 65-75.
Высокое кислотное число, с одной стороны, свидетельствует о незрелости плодов облепихи, с другой - о частичном закисании ягод при транспортировке.
В странах СНГ промышленное производство облепихового масла было начато в России в 1957 г. на Бийском витаминном заводе в Алтайском крае (Казанцев В.О., 1959). Выпускаемое промышленностью масло представляет собой масло плодовой мякоти, красно-оранжевого цвета с характерным запахом и вкусом, присущимшюдам облепихи и следующими физико-химическими характеристиками: показатель преломления при 20 С-1,470 удельный вес при 20 С-0,9420 кислотное число - не более 14,5 сумма каротиноидов, мг%-220.
Технологическая схема Бийского завода включает в себя выделение масла прессованием (выход 10-15% от масла, содержащегося в плодах), экстракцию облепихового масла растительным в течение 24-30 часов. Недостатком этого метода является потеря каротина (12-22,7%), содержание в полученном продукте до 15-20% подсолнечного масла и высокое кислотное число (до 13-15).
Более перспективным способом получения растительных масел является экстракция. В Таджикиском национальном Университете была разработана технология получения облепихового масла экстракцией фреоном-12 или н-гексаном при обычной температуре (Зегельман А.Б., и др., 1981). Достоинственными этой технологии являяются сокращение времени процесса до 4-8 часов, практически полное извлечения масла (до97-98%). Кроме того, можно выделить следующие преимущества облепихового масла, получаемого по этой технологии:
1. Облепиховое масло экстрагируют из мякоти и семян, чем обеспечивается своевременная переработка сырья, отсутствуют. потери масла семян и биологически активных веществ.
2. Получается масло-концентрат из которого могут быть приготовлены препараты с необходимым содержанием активных веществ.
3. Значительно снижается кислотное число получаемого масла. :\
Таким образом, существующие технологии позволяют обеспечить наибольший выход облепихового масла одновременно с более полной экстракцией биологически активных веществ, что обеспечивает более высокую биологическую активность облепихового масла.
Применение облепихового масла при лечении различных заболеваний было известно давно, но систематическое изучение его лечебных свойств началось сравнительно недавно.
В.Н. Чукаева и др. (1964) сообщили о положительном влиянии облепихового масла на скорость заживления химических ожоговых травм у белых крыс. При этом было обнаружено, что облепиховое масло почти вдвое сокращает срок заживления ожоговых травм по сравнению с животными контрольной группы. Применение облепихового масла сокращало продолжительность фаз регенерационного процесса, ускоряло резорбцию некротических участков повреждённых тканей и ускоряло восстановительные процессы в эпителиальной ткани (Каган М.Ю.,1972).
При изучении влияния облепихового масла на желудочную секрецию в норме и экспериментальной язве, проведённом на собаках, было показано, что при введении облепихового масла перед кормлением мясом отчетливо увеличивается сокоотделение. При введении масла после кормления усиление секреции почти отсутствует (Каурова Л.В., 1969, 1974).
И.Д. Мансурова, М.Б. Бободжанова (1978) и А.А. Линчевская (1978) изучали влияние облепихового масла на перекисное окисление липидов, цитохром Р-450, белки печени, вызванное раздельным и совместным введением четыреххлористого углерода и этанола. При этом было установлено, что облепнховое масло оказывает влияние на биологические мембраны и выраженное анаболическое действие.
Также сообщалось (Олзийхутаг А., 1969) о том, что при экспериментальном атеросклерозе у кроликов облепнховое масло оказывает активное задерживающее влияние на рост гиперхолестеринемии и гиперлипопротеинемии и до известной степени способно предупредить поражения стенки сосудов атеросклеротическим процессом.
А.Т. Ведмеденко (1959) проводил сравнительное изучение регенеративных свойств облепихового масла на кроликах, у которых после трёхкратного закапывания 1%-ного раствора дикаина при помощи трепана производилась несквозная трепанация роговицы на правом глазу, удалялся диск, содержащий эпителий и боуменову оболочку. После чего животным закапывали облепнховое масло и 30%-ный раствор сульфацила натрия. при этом было обнаружено, что облепнховое масло проявляет более сильные регенеративные свойства, чем 30%-ный раствор сульфацила натрия.
Выявлено, что препарат из облепихи крушиновой оказывает антибактериальное действие на патогенные и условно патогенные представители семейства Enterobactericcac, а нормальный обитатель кишечника E.coli оказывается совершенно нечувствительным к действию этих препаратов. Такое дифференцированное воздействие препаратов облепихи является очень ценным лечебным фактором.
Препарат гипофаин, выделенный из облепихи, оказывал тормозящее влияние на рост опухолей Эрлиха, саркомы 45, саркомы Иенсена, карциномы Герена (Пухальская Е.Ч. и др.1960). Сообщалось (Кхандуджа К.А., Есаков Т.Д., 1979), что витамин А у экспериментальных животных оказывал профилактическое, а при некоторых предраковых состояниях и терапевтическое действие.
Указанные выше данные говорят о том, что сведения по экспериментальному изучению облепихового масла носят разрозненный характер. Все это диктует необходимость проведения более полного фармакологического изучения облепихового масла.
Химический состав плодов и масла облепихи Западного Памира
Одной из наиболее важных технических характеристик сортов облепихи является показатель масличности в пересчете на сырой вес, который очень сильно зависит от района произрастания облепихи, причем масличность естественных форм облепихи, в основном, выше культурных сортов.
Проведение нами исследования масличности произрастающих на Западном Памире форм облепихи показали, что они отличаются более высоким содержанием масла по сравнению с формами облепихи, произрастающей в других регионах стран СНГ. Однако этот показатель различен у сортов, произрастающих в разных районах Памира.
Данные таблицы № 2 показывают, что содержание масла в формах облепихи, произрастающих в верховьях реки Пяндж район Ишкаїііим (ИК-1) на высоте 2530-2800 метров над уровнем моря составляет 5,4-15,1%. Причем 81 % от общего числа форм составляет формы с масличностыо выше 7,0%. Масличность форм облепихи, произрастающей по поймам реки Ванч (В-), находящимся на высоте 1700-2400 метров над уровнем моря составляет 7,1-15 %, то есть все формы имеют масличность выше 7,0 %. Облепиха, прозрастающая по поймам реки Гунт (Г-) на высоте 2600-3430 метров над уровнем моря, содержит от 5,0 до 8,4 %, причем масличность выше 7% наблюдается у 33 % изученных форм (2 формы из 6). Почти такую же масличность (4,6-8,5 %) имели и формы облепихи, произрастающие в ущелье реки Шахдары (ШХ-), находящемся на высоте 2850-3400 метров над уровнем моря - три формы из девяти (33 %) имели масличность выше 7 %.
Облепиха, произрастающая по поймам реки Пяндж (ИК-1) и Ванч (В-), обладает более низкой влажностью плодов, по сравнению с известными литературными данными, о чем свидетельствовали результаты, полученные нами при систематическом изучении этого показателя в течение ряда лет (таблица 2).
Высказывалось (Мамадризохонов А., 1973) предположение о том, что УФ-радиация влияет на процессы роста и развития растений, что выражается в повышенной транспирации лисьтев растений Западного Памира. Автор показал, что почти в 2 раза происходило ускорение созревания ячменя и на такую же величину уменьшалась транспирация листьев. Также с условиями произрастания облепихи можно связать и пониженное содержание влаги в плодах облепихи Западного Памира. По данным литературы (Гульмамадов Г., 1975) рост плода обычно происходит на высоком уровне транспирации. Повышенная УФ-радиация способствует еще большей транспирации, следствием чего является снижение влажности плодов облепихи.
В связи с тем, что одной из целей наших исследований являлось выявление форм облепихи, пригодных для введения в культуру и для селекции было необходимо разработать подход для отбора форм, обладающих качествами, обуславливающими как биологические признаки (околюченность, размер и прочность на отрыв плодов и т.д.), так и масличность плодов.
Изучение масличности форм облепихи, произрастающей на Западном Памире, показало наличие корреляции между масличностыо и влажностью плодов (таблица 2): чем больше сухих веществ, тем выше масличность. Например, форма ИК-13 содержит в плодах 51 % сухих веществ, показатель масличности при этом составляет 14,6%, для формы ИК-14 эти показатели составляют, соответственно, 32,7 и 8,4%. Вследствии этого мы считаем, что расчет масличности плодов облепихи необходимо проводить как на сырую массу, так и на сухую массу плодов. Однако, необходимо отметить, что такое соотношение сохраняется не всегда. Примером этого могут служить формы Б-2 и Б-4: Форма Б-2 имеет сухую массу 51,8%, масличность - 5,7%, форма Б-4 - 43,2% и 8,8% соответственно.
При расчете масличности на массу сухого вещества плодов устраняется влияние влажности, однако при этом нарушается соотношение масла на сырую массу и на сухое вещество. Например, отнесенные к низкомасличным при расчете на сырое вещество формы Г-5, ШХ-9, ШХ-19, при расчете масла на сухое вещество уже относятся к высокомасличным (содержание масла более 30 %) (таблица 3).
Возможно, что при расчете масличности на сухую массу повышается объективность анализа. Однако, при этом форма Г-6, относящаяся к низкомасличным формам, становится высокомасличной при расчете на сухую массу (таблица 3). Эта форма отличается низким содержанием сухих веществ в плодах (25,8 %) и большим весом семян, поэтому валовое накопление масла плодами является невысоким.
В связи с этим возникает необходимость в разработке наиболее объективного способа оценки масличности плодов облепихи. На наш взгляд таким критерием может стать накопление масла в 100 плодах в расчете на сырой вес. Применение этого способа расчета масличности показало, что более низкомасличными являются высокомасличные (при расчете на сырое вещество) мелкоплодные формы долины реки Ванч. Одним из самых высокомасличных являются формы ИК-5, ИК-17, ИК-16, ИК-19, ШХ-19, имеющие плоды весом 172-213 мг. и содержание масла на 1 плод -18 -21 мг. При этом также учитывали урожайность формы.
Среди изученных нами 54 форм облепихи только у 13 содержание, масла составляло ниже 7 % при расчете на сырую массу. Поэтому произрастающую на Западном Памире облепиху можно считать ценным материалом для введения в культуру необходимо отбирать формы, накапливающие наибольшее количество масла в расчете на 100 плодов и имеющие наибольшее количество мякоти. Чем выше эти показатели, тем ценнее форма с точки зрения масличности. К таким формам относятся ИК-5, ИК-16, ИК-17, ИК-19, ШХ-19, содержание от 4,4 до 6,4 гр. сухой мякоти на 100 плодов и от 1,8 до 2,2 гр. масла. Исходя из этого можно для введения в культуру рекомендовать формы ШХ-19 и ИК-16.
Некоторые авторы (Пантелеева Е.И., 1977, Шишкина Е.Е., 1966) при исследовании по годам отмечали колебания в содержании масла в плодах облепихи. Подобное явление наблюдали и мы при изучении облепихи Западного Памира
Кроме того, мы исследовали плоды облепихи на содержание водорастворимых витаминов, в частности, витамина С (аскорбиновой кислоты)
При этом были отмечены колебания в содержании аскорбиновой кисслоты от 102 до 508 мг. на 100 гр. сырого веса плодов, 50% форм облепихи содержали более 200 мг. на 100 гр. плодов.
Формы облепихи, произрастающие по пойме реки Пяндж (ИК-), содержали аскорбиновой кислоты от 102 до 186 мг. на 100 гр. плодов-11 из 18 форм, 200-218 мг.-З из 18, 293-313 мг. -2, 377-475 мг. -2 формы из 18.
Высоким содержанием аскорбиновой кислоты (314-508 мг. на 100 гр. плодов) характеризовались формы облепихи, произрастающие на верхней границе её обитания -3450 метров над уровнем моря по долине реки Гунт (Г-1), а произрастающие на высоте 2630 метров над уровнем моря - содержали от 188 до 339 мг. аскорбиновой кислоты на 100 гр. плодов. Это говорит о том, что содержание аскорбиновой кислоты достигает максимума в формах облепихи, произрастающих на верхней границе обитания. Такая же закономерность наблюдается для формы ПМ-1, произрастающей на высоте 3450 метров в пойме реки Памир.
Однако, этой закономерности не было обнаружено при изучении форм облепихи, произрастающих в пойме рек Шахдара (ШХ-) и Ванч (В-).
Подобная противоречивость данных может являться следствием специфики форм облепихи. При переходе от биологической до полной потребительской стадии созревания химический состав плодов облепихи постоянно изменяется, причем на первой и второй стадиях созревания скорость этого процесса различна и содержание аскорбиновой кислоты в плодах падает по мере созревания.
Патоморфологическое исследование органов белых крыс и собак, получивших различные виды облепихового масла
Для исследования влияния облепихового масла на внутренние органы проводили их патоморфологическое исследование.
Крысы были разбиты на 6 опытных и одну интактную группу. Животные получали каждый день в течении 2 месяцев УМФ и УМГ в дозах 2 и 5 гр/кг, БОМ и ПМ - 5гр/кг. По истечение 2 месяцев крыс забивали путем декапитации. Сразу после этого проводили макроскопический осмотр большинства органов. Для изучения гистологического строения брали следующие органы: печень, желудок, правую почку с надпочечником, селезенку, шейный лимфоузел и щитовидную железу.
Печень у крыс, которые получали подсолнечное и различные виды облепихового масла, макроскопически выглядела также как и у интактных животных.
При гистологическом исследовании особых отличий между печенью опытных и контрольных животных не отмечалось. В отдельных случаях наблюдалось полнокровие вен портальных трактов. Единичными, как и в контроле, были случаи гранулематоза. В одном случае был обнаружен выраженный перихолангит.
Печень интактной крысы была покрыта тонкой, плотной соединительнотканной капсулой. Сохранено балочное строение долек. Четко выражено радиальное расположение балок в дольке. Цитоплазма гепатоцитов базофильная, мелкозернистая. Ядра печеночных клеток имеют круглую форму, нормохромные с хорошо заметными ядрышками.
Цитоплазма и ядра печеночных клеток почти всех опытных крыс были сравнимы с интактным контролем. Почти во всех группах, даже у животных, получивших подсолнечное масло, несколько снизилось число двуядерных клеток, митозы чаще встречались в группах животных, которые получали УМФ и УМГ в дозе 5 гр/кг в течение 2 месяцев - в среднем 2-4 митозы на 40 полей зрения микроскопа.
Как известно, внутреняя стенка желудка и при макро- и при микроскопическом исследованиях разделяется на две половинки, одна из которых железистая, а другая - рубцовая. Железистая часть состоит из прямых трубчатых желез, стенки которых выстланы эпителиальными клетками, дифференцированными в различных функциональных направлениях. Слизистая рубцовой части желудка выстлана многослойным плоским ороговевающим эпителием.
Патоморфологическое изучение желудка крыс, которым вводили все виды облепихового масла показало, что цитоплазма и ядра железистых клеток и клеток эпителия рубцовой части не отличались от таких же клеток у интактных животных.
Во всех группах Отмечались единичные случаи дистрофии клеток желез дна желудка и различная степень гипер- и гипохромии ядер. Также у опытных животных почти не отличалось от интактных животных кровонаполнение слизистого и подслизистого слоев.
Почти не отличались от контрольной группы и макро - и микроскопическая картины почек животных опытных групп. Почка интактных крыс снаружи покрыта плотной, тонкой соединительнотканной капсулой. Просветы почти всех капсул клубочков четко различимы и большей частью широкие. Проксимальные канальцы выстланы высокими эпителиальными клетками с мелкозернистой цитоплазмой, границы которых в большинстве случаев нечеткие. Просветы этих канальцев в основном различимы. Ядра эпителиальных клеток круглые, в них хорошо различим хроматин. Дистальные канальцы выстланы эпителиальными клетками, имеющими кубическую форму с мелкозернистой, слегка базофильной цитоплазмой, в основном овальные ядра, часто- круглые с хорошо различимым хроматином. Также различимы просветы всех дистальных канальцев.
Прямые канальцы большей частью выстланы кубическим эпителием, реже-плоским. Эти клетки имеют мелкозернистую цитоплазму, слабо базофильную и круглые нормохромные ядра. Четко различим просвет канальцев.
У опытных животных ткань селезенки было обычной консистенции темно-красного цвета на разрезе. Число лимфоидных фолликулов сильно варьировало от 11 в группе животных, получивших БОМ в дозе 5 гр/кг в течение 2 месяцев до 28 в группе животных, получивших ПМ в дозе 153 гр/кг в течение месяца. Количество герминативных центров было наибольшим в группах крыс, которым вводили ПМ и БОМ в дозе 5 гр/кг в течение 2 месяцев и составляло 10-11 против 3 в контроле. Не отличались от интактной группы просветы синусов и их наполнение кровью. Почти не изменялось или незначительно увеличивалось количество мегакариоцитов в опытных группах по сравнению с контрольной. В трех группах крыс, получивших УМФ в дозе 5 гр/кг в течение месяца и УМФ в дозах 2 и 5 гр/кг в течение двух месяцев количество мегакариоцитов увеличивалось до 0,35-0,48 в одном поле зрения по сравнению с контролем, где этот показатель равнялся 0,21.
Лимфоузлы у животных опытных групп почти ничем не отличались от таковых в интактной группе. Кровенаполнение узла всех животных было умеренным. Лишь в одном случае в группе животных получивших УМФ в дозе 2 гр/кг в течение 2 месяцев, отличалось выраженное полнокровие паренхимы узла. В селезенке всех животных, получивших различные виды масла, находились герминативные центры. В группе животных, получивших УМГ в дозе 2 гр/кт в течение 2 месяцев количество митозов было наибольшим и составляло 34 на один герминативный центр. В группе животных, которым вводили УМФ в течение 2 месяцев отмечалось от 3 до 24 митозов на один вторичный фолликул (в среднем 13 митозов на группу) в реактивных центрах узла. Других гистологических отличий в лимфоузлах животных опытных групп выявлено не было.
У опытных крыс, получавших БОМ в дозе 5 гр/кг, УМФ и УМГ в дозах 2 и 5 гр/кг в течение двух месяцев отмечалось увеличение (приблизительно в 2 раза) по сравнению с контрольными животными фолликулов щитовидной железы. Щитовидные железы животных остальных групп были сравнимы с контролем. Форма фолликул щитовидной железы везде была круглой и изредка овальной. Только в группах крыс, которые получали все дозировки УМФ, чаще встречались угловатые, а в трех случаях - фистончатые фолликулы
Картина обособления интерфолликулярного эпителия в островки и дальнейшая их лифферепцировка в микрофолликулы не отличались от таковых в контрольной группе. Только в одном случае, в группе крыс, которым вводили УМФ в дозе 5 гр/кг в течение 2 месяцев отмечалось образование дочерних фолликул
В 2 случаях из 5 в группе крыс, получивших БОМ в дозе 5 мг/кг в течение 2 месяцев была отмечена десквамация интрафолликулярного эпителия в полость фолликула. Такие же фолликулы с десквамированными эпителиальными клетками нередко встречались у крыс, которым вводили в течение 2 месяцев различные дозы УМФ.
Каких либо особенностей в гистологическом строении надпочечников у животных всех опытных групп по сравнению с контролем не отмечали. В группах животных, которым вводили УМФ в дозе 5 гр/кг и УМГ в дозе 2 гр/кг в течение 2 месяцев было отмечено незначительное кровенаполнение и в двух группах, в которых животным вводили УМФ в дозе 5 гр/кг и БОМ в дозе 5 гр/кг в течение 2 месяцев отмечалось расширение капиллярных синусов по сравнению с контролем.
Одновременно с проведением патоморфологических исследова-ний было изучено влияние облепиховых масел БОМ, УМГ и УМФ на морфологический состав периферической крови при использованитг нерорального и-улн введения препаратов. Для общего анализа собирали кровь вытекшую из забитой тушки крысы. При этом в крови определяли количество гемоглобина (гр%), эритроцитов (млн.), лейкоцитов (тыс.), тромбоцитов (тыс.), ретпкулоцитов (%) и дифференциальный подсчет лейкацитарной формулы в 1 ммЗ. Эги же параметры исследовали в крови животных контрольной грз ппы.
Фармакологическая активность масла каперсов
Исследованные образцы масла были получены методом экстракции сжиженным газом хладоном-12 (фреон-12) в закрытом цикле (Ветров П.П. и др.. 1974) и представляют собой густую маслянистую жидкость желто-оранжевого цвета со специфическим запахом и вкусом.
При проведении фармакологических исследований было необходимо изучить общее действие и токсические свойства масла каперсов, провести фармакологический скрининг по выявлению спектра активности масла каперсов по сравнению с официальными средствами, содержащими подобные действующие вещества и обладающими аналогичным спектром действия.
Изучение общего действия и острой токсичности масла каперсов проводили на белых мышах массой 16-18 г., которым препарат вводили внутрижелудочно (Ходжиматов М.Х., Бобоходжаева СМ., 1976, Беленький М.А., 1963, Хайдаров Х.М. и др., 1992, Uddin A.V. et al., 1986) в неразведешюм виде и в виде 20 и 50%-ных масляных растворов в дозах от 500 до 2000 мг/кг массы животного. В качестве препарата сравнения было использовано облепиховое масло в тех же дозах. При определении острой токсичности факт смерти животных фиксировали не только в первые сутки после введения. Для того, чтобы убедиться в отсутствии смертельных исходов со значительным латентным периодом наблюдение за животными вели в течение 7 дней.
Проведенные эксперименты показали, что пероралыюе введение всех доз неразведенного масла каперсов не приводило к изменениям в поведенческих реакциях или появлению симптомов, свидетельствующих о влиянии хмасла на вегетативную нервную систему, были сохранены рефлексы и нормальная нервно-мышечная возбудимость. В течение 7 дней после введения препаратов поведение опытных животных не отличалось от поведения интактных, не было отмечено ни одного случая острой летальности.
Полученные результаты по изучению общего действия и острой токсичности масел каперсов и облепихи позволили заключить, что они не оказывают действия на высшую нервную деятельность и вегетативную нервную систему. Таким образом, масла каперсов и облепихи относятся к практически нетоксичным веществам (Тринус Ф.П. и др., 1975, Попова Л.Н.идр., 1991).
Язвозащитные свойства масла каперсов изучали на модели индометациновой язвы (Попова Л.Н. и др. , 1991). Для этого в контрольной серии крысам самцам массой 170-180 г, которых сутки держали на голодной диете, но воду давали без ограничений, вводили 2%-ную суспензию индометацина в 1%-ной слизи в дозе 25 мг/кг массы животного. Через сутки проводили умерщвление животных хлороформом, вскрывали желудок по малой кривизне, отмывали от содержимого под проточной водой, окрашивали в течение 20-30 минут в растворах трепанового синего или краски Эванса и вели общий подсчет язв и эрозий у групп животных, подвергшихся лечению по сравнению с контрольными. Во всех экспериментах масло каперсов вводили в тех же концентрациях, что и в предыдущих опытах через оливообразный зонд за 1 час до введения индометацина. В качестве препарата сравнения также использовали облепиховое масло. Эффективность масла определяли по снижению количества и величины язв и эрозий у групп леченых животных по сравнению с контрольными. Язвозащитную активность оценивали по расчитанным V процентам защитной реакции, принимая общее количество ульцерогенных дефектов в контрольной серии опытов за 100%, которое в среднем на одну крысу для всех разведений масла каперсов составляло 21,9+1,3.
Следующие серии экспериментов были поставлены на фоне предварительного введения масла каперсов в различных разведениях из расчета 0,2 мл/100 г массы животного.
Предварительное введение неразведенного масла каперсов снижало индометациновое повреждающее действие на слизистую оболочку желудка с 21,9+1,3 в контрольной группе до 10,2+0,9 в опытной. Язвозащитная активность масла составила 53,6%. Введение 50%-ного масла каперсов снизило количество ульцерогенных дефектов до 11,9+2, в контроле этот показатель составил 21,9+1,3. Процент защитного эффекта достигал 45,9%. Однократное введение 20%-ного масла каперсов способствовало только незначительному уменьшению общего количества язв и эрозий - с 21,9+1,3 в контрольной до 18,8+2,1 в опытной группе.
Таким образом, при предварительном введении наибольшей язвозащитной активностью обладает неразведешюе масло каперсов. С уменьшением концентрации масла в исследуемых образцах снижается его язвозащитная активность, что, по-видимому, объясняется уменьшением концентрации биологически активных веществ, содержащихся в испытуемых образцах.
Сравнительную оценку язвозащитной активности масла каперсов проводили по отношению к облепиховому маслу витаминного завода с содержанием суммы каротиноидов 180, 150, 130 и 80 мг%. Выбор облепихового масла в качестве контроля был основан на том, что в нем имеются одинаковые с маслом каперсов биологически активные вещества, обуславливающие их специфическое действие на регенеративные процессы.
Проведенные нами эксперименты показали, что защитная реакция у крыс, которых лечили облепиховым маслом с различным содержанием каротиноидов была различной и составляла для масла с содержанием каротиноидов 180 мг% - 60,2% ( общее число язв и эрозий в среднем на одну крысу было равным 7,03+0,9, тогда как в контроле - 18,3) , 150 мг% -50,5% , 130 мг% - 32,2% , 80 мг% - 28,4%. Полученные результаты показали , что наибольшую язвозащитную активность проявляет облепиховое масло с содержанием каротиноидов 180 мг%. Результаты, полученные во всех сериях экспериментов приведены на рис. 9 и в таблице 56.
Исходя из вышеизложенного, был сделан вывод о том, что наибольшим язвозащитным действием обладает неразбавленное масло каперсов, которое по своему язвозащитному действию приближается к облепиховому маслу с содержанием каротиноидов 130-150 мг%.
Эксперименты с маслами каперсов и облепихи позволили выявить следующую закономерность: с уменьшением содержания активных действующих веществ при разведении масел снижается их репарационная активность, а следовательно, и лечебный эффект.
Следующая серия экспериментов была посвящена изучению влияния неразделенного масла каперсов на воспалительный процесс, вызванный формалином и серотонином. Оба препарата вводили под плантарный апоневроз голеностопного сустава в растворах в небольших объемах. Объем лапок всегда строго до определенного уровня определяли плетизмометрически до введения повреждающего агента и через 3, 6, 24, 72 и 96 часов после введения формалина и через 15, 30,45 минут, 1, 5, 3, 6 и 24 часа после введения серотонина.
Крысам контрольной группы (12 гол.) за 48, 24 и 0,5 часа до введения формалина и далее ежесуточно (в дни измерений за 0,5 часа до них ) пероралыю вводили физиологический раствор. Животным опытных групп перорально вводили масла каперсов и облепихи в дозе 0,2 мл на 100 г массы. Объем лапок определяли через 3, 6, 24, 72 и 96 часов после введения повреждающего агента.
В качестве примера ниже приведен протокол одного из опытов данной серии.
Крысе-самке массой 160 г за 48, 24, 0,5 часа до инъекции формалина перорально вводили 0,32 мл физиологического раствора. В дни измерений за 15 минут до введения формалина измеряли объем правой задней лапы до уровня голеностопного сустава. Он составил 1 мл (100%). Под плантарный апоневроз этой лапы ввели 0,1 мл 3,3%-ного раствора формалина. Объем лапы составил через 3 часа 1,4 мл (140% исходного объема), 6 часов -1,6 мл (160%), 24 часа -1,92 мл (192%), 72 часа -1,6 мл (160%), 96 часов -1,36 мл 136%).
Двум следующим группам крыс, по 15 "животных" в каждой, пероралыю в дозе 0,2 мл/100 г массы животного вводили масла каперсов и облепихи за 48, 24 и 0,5 часа до введения формалина и затем в дни измерений за 0,5 часа до них. Увеличение объема лапок по сравнению с данными контрольной группы почти не изменялось и составляло в среднем через 3 часа - 136,5% , 6 часов - 153,5% , 24 часа - 197,4%», 72 часа - 170,7% , 96 часов - 155,3%.
