Содержание к диссертации
Список сокращений 5
Введение 6
Глава 1 Литературный обзор 11'
С 1.1. Анализ заболеваемости и смертности при обструктивном
холестазе 11
1.2 Изменение лабораторных показателей при холестазе 14
-
Динамика показателей пигментного обмена при холестазе 15
-
Динамика биохимических показателей, отражающих холестатическое повреждение печени при холестазе 17
1.2.3 Динамика биохимических показателей, отражающих
паренхиматозное повреждение печени при-холестазе 19
1.2.4 Динамика биохимических показателей отражающие
белоксинтезирующую функцию печени при холестазе 20
1.2.5* Особенности метаболизма желчных кислот при холестазе.. 21
1.2.6. Показатели, отражающие состояние антиоксидантной и
прооксидантной системы при холестазе 23
-
Морфологические изменений при-холестазе 28
-
Системное влияние холестаза на различные органы и системы 30
1.5. Современные способы лечения механической желтухи 32-
Глава 2 Материалы и1 методы 41
2.1. Характеристика животных 41
2.2.. Общая характеристика эксперимента». 41
-
Введение препаратов- исследования лабораторным животным 45
-
Экспериментальная модель 46
2.5. Лабораторные исследования 47
2.5:1. Оценка биохимических показателей сыворотки крови 47
-
Получение образцов крови и тканей для экспериментальных исследований 48
-
Определение общей антиокислительной активности 49
-
Определение концентрации восстановленного глутатиона... 51
-
Определение концентрации сульфгидрильных групп белков 52
-
Определение активности глутатионпероксидазы (КФ
1.11.1.9)
-
Определение активности глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2) 54
-
Определение активности глутатион-8-трансферазы (КФ 2.5.1.18) 55
-
Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (КФ 1.1.1.49.) 56
-
Определение активности каталазы 57
-
Определение концентрации диеновых конъюгатов 58
-
Определение концентрации 'малонового диальдегида 59
-
Патоморфологическое исследование 60
-
Статистическая обработка результатов 60
Глава 3 Результаты 61
3.1. Характеристика модели и динамика состояния животных на
7 и 14 дни холестаза 61
3.1.1 Влияние холестаза на состояние животных 61
3.1.2. Лабораторные показатели при экспериментальном холестазе 62
3.1.3: Влияние холестаза на морфологическую1 картину ткани-
печени крыс 66
Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной
70 защиты печени, крыс при экспериментальном холестазе....
3.2.1 Влияние холестаза на показатели перекисного окисления-
липидов в тканш печени крыс 70
3.2.2. Влияние холестаза на показатели1 антиоксидантной
активности в ткани печени крыс 72
3.3. Влияние холестаза на функцию почек 77
-
Влияние холестаза на азотвыделительную функцию почек 77
-
Влияние холестаза на морфологическую картину ткани почек крыс 77
3.3.3. Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной
защиты почек крыс при экспериментальном холестазе 1У
3.4. Влияние холестаза на состояние эритроцитов 82
3.4.1. Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной
защиты эритроцитов крыс при экспериментальном холестазе 81
3.5
Влияние холестаза на ткань головного мозга
Оксидативное повреждение и состояние антиоксидантной защиты головного мозга крыс при экспериментальном
холестазе
Влияние холестаза на морфологическую картину ткани
головного мозга крыс 88
Влияния экспериментального лечения S-
аденозилметионином и ремаксолом крыс с холестазом ... 89
Влияния экспериментального лечения на лабораторные
показатели, характеризующие функцию печени и степень ее
повреждения 89
Влияние экспериментального лечения на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной
активности в ткани печени крыс 91
Влияние экспериментального лечения на
морфологическую картину ткани печени крыс 96
Влияние экспериментального лечения на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности в тканях почек, эритроцитах и головном мозге 98
Влияние экспериментального лечения на
морфологическую картину в тканях почек и головного мозга 99
Обсуждение полученных результатов ЮЗ
Выводы 110
Практические рекомендации 111
Литература 112
Приложения 129
Список сокращений.
АЛТ- аланинаминотрансфераза
ACT — аспартатаминотрансфераза
АФК - активные формы кислорода
ВГ —восстановленный глутатион
ДК - диеновые коньюгаты
ГГТП- гамма-глютамилтранспептидаза
Гл-6ф-ДГ - глюкозо-6ф-дегидрогеназа
ГП - глутатионпероксидаза
ГР — глутатингедуктаза
TST — глутатион-8-трансфераза
ЖК - желчные кислоты
К - каталаза
ЛО-ложнооперированные
МД - малоновый диальдегид
НАДФ—никотинамидадениндинуклеотидфосфат
ОАА -общая антиокислительная активность
ПОЛ - перекисное окисление липидов
РМ-ремаксол
СГ - сульфгидрильные группы белков
ТРИС— трис (гидроксиметил)аминометан
ЩФ - щелочная фосфатаза
ФР -физраствор
S-AM- S-аденозилметионин
Введение к работе
Актуальность исследования. Синдром внепеченочного холестаза развивается при целом ряде заболеваний гепатобилиарной области. В его основе лежит нарушение оттока желчи, связанное с механической обтурацией внепеченочных желчных протоков (Шерлок Ш.,1999; Иванченкова Р.А., 2006).
Наиболее часто внепеченочный холестаз развивается на фоне желчнокаменной болезни* (Борисов А.Е. и соавт., 2003; Савельев B.C. и соавт., 2003; Красильников Д.М. и соавт., 2008)., которая является самой распространенной причиной госпитализации* в клинике хирургических болезней (Rosenmuller М. et al., 2007). Кроме того, внепеченочный холестаз возникает при таких онкологических заболеваниях каюрак поджелудочной железы, желчного пузыря и внепеченочных желчных протоков, которые суммарно составляют 15% всех злокачественных новообразований' (Долгушин Б.И., Косырев В.Ю., 2004., O'Brien К. et.al, 2003).
Летальность пациентов с механическими желтухами по настоящее время- остается высокой, и по данным разных авторов составляет 9-^35% (Борисов А.Е и соавт., 2003; Dixon J.M. et al., 1984; HanX.C. et al., 2003).
Основными осложнениями, являющимися причиной- летальности при механической желтухе являются* почечная недостаточность, инфекционные осложнения, желудочно-кишечные кровотечения (Dixon J.M. et al., 1984; HanX.C. et al., 2003; Keighley M.R. et al., 1984 и Mishra D. et al. 2007), и, по данным Борисова А.Е. и соавт., (2003) - печеночная недостаточность вследствие развития токсического гепатита.
Основным методом лечения при механической желтухе остается оперативное, которое сегодня проводится как традиционным способом, так и с помощью эндоскопических и эндовидеохирургических методик (Борисов А.Е и соавт., 2003; Gergely МД986; Mishra D. et al. 2007). Однако для уменьшения количества интраоперационных осложнений механической желтухи в клинике также проводится и консервативное лечение (Dawson J.L. et al. 1968; Юдин А.А., 2010; Болевич СБ., 2010). Одним из направлений консервативной терапии может являться использование гепатопротекторов. Их применение при обтурационной механической желтухе изучено недостаточно, особенно при сохраняющемся нарушении оттока ж елчи. В то же время использование данных препаратов может быть перспективным для профилактики повреждения печени и других органов при механической желтухе.
На сегодняшний день свободнорадикальное окисление клеточных структур при обструктивном холестазе остается мало изученным вопросом, хотя по мнению Dirlik М. и соавт. 2009 именно свободнорадикальное окисление является одним из главных механизмов повреждения при данном заболевании. По мнению Chroni Е. И и соавт. (2006), Konstantinou D. и соавт. (2008) можно говорить о развитии глубоких нарушений как систем свободнорадикального окисления, так и антиоксидантной защиты при остром и хроническом обтурационном холестазе. Однако- многие вопросы, касающиеся данного направления исследований, остаются неизученными. В' частности, несмотря на подтвержденные антиоксидантные свойства S-аденозилметионина и ремаксола (Яковлев А.Ю. и соавт., 2010; Gonzalez-Correa J.A. et al., 1997) эффективность применения этих гепатопротекторов при обтурационном холестазе и их влияние на процессы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при данной патологии изучены недостаточно. Рассмотрение этих вопросов может быть перспективным для расширения представления о механизмах повреждения при холестазе и способах коррекции его осложнений.
Цель исследования: изучить особенности свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в различных органах на модели экспериментальной обтурационной механической желтухи у крыс.
Задачи исследования
Исследовать показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты в ткани печени экспериментальных животных с холестазом.
Оценить системное влияние холестаза на состояние свободнорадикального окисления и некоторых показателей антиоксидантной защиты в почках, головном мозге и эритроцитах у экспериментальных животных.
Выявить особенности патоморфологических изменений в печени и некоторых отдаленных органах экспериментальных животных при экспериментальномхолестазе.
Определить эффективность инфузионных препаратов - ремаксола и S— аденозилметионина как гепатопротекторов при экспериментальном холестазе у крыс.
5. Изучить состояние антиоксидантной защиты и показателей свободнорадикального окисления в печени, почках, головном мозге и эритроцитах при экспериментальном лечении холестаза инфузионными гепатопротекторами.
Положения, выносимые на защиту
Нарушение оттока желчи сопровождается выраженной активацией свободнорадикального окисления и угнетением показателей антиоксидантной защиты в ткани печени, что имеет значение в патогенезе ее холестатического повреждения.
При экспериментальном холестазе происходит активация свободнорадикального повреждения на системном уровне в тканях других органов, причем на фоне угнетения антиоксидантных ферментов системы глутатиона и некоторых других компонентов антиоксидантной защиты происходит компенсаторная активация каталазы.
3. Внутривенное введение препаратов Ремаксол и S—аденозилметионин при экспериментальном холестазе у крыс сопровождается гепатопротективным действием и оказывает корректирующее влияние на состояние свободнорадикального- повреждения и антиоксидантную защиту на системном уровне
Научная новизна исследования
Впервые выполнено комплексное- исследование процессов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при экспериментальном холестазе с одновременное оценкой биохимических и морфологических показателей в тканях печени, почек, головного мозга и эритроцитах и показано; что оксидативное повреждение и нарушение антиоксидантной защиты при холестазе носят системный характер.
Впервые показано, что использование в лечении экспериментальных животных препаратов S-аденозилметионина и ремаксола приводит к снижению уровня первичных и- вторичных продуктов перекисного окисления липидов в различных органах, а также активации каталазы и системы обмена глутатиона - глутатионредуктазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и глутатион-зависимых антиоксидантных ферментов - глутатионпероксидазы и глутатион-8-трансферазы.
Научно-практическое значение работы
Данные, полученные в исследовании, расширяют современные представления о значении свободнорадикального^ окисления в патогенезе обтурационного холестаза, а также о роли свободнорадикального окисления в повреждении различных органов при данной патологии. Полученные данные об эффективности влияния инфузионных гепатопротекторов ремаксола и S-аденозилметионина на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты позволяют рассматривать данные препараты как возможные средства патогенетической терапии, воздействующие на процессы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при обтурационной механической желтухе.
Полнота изложения материалов в работах, опубликованных соискателем
Основное содержание диссертационной работы отражено в 3-х статьях в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертационных исследований (список публикаций в журналах, рекомендованных ВАК РФ).
Результаты исследования доложены на Всероссийской конференции с между народ ным участием "Актуальные вопросы неотложной хирургической гастроэнтерологии" 1—7 ноября 2010 года в Геленджике, Всеросийском форуме «Пироговская хирургическая неделя» в г. Санкт-Петербург 24-28 ноября 2010 года и на Научно-практической конференции «Актуальные проблемы гастроэнтерологии» 10 декабря 2010 в г. Москва.
Благодарность
Автор благодарит доцента кафедры биохимии и лабораторной диагностики Военно-медицинской академии Грашина Романа Ариковича за помощь в проведении лабораторных исследований показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности.
