Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Современное состояние вопроса и задачи исследования
1.1. Неспецифическая сопротивляемость организма и принципы ее изучения 12
1.2. Торф как источник биологически активных веществ, его применение в медицине и ветеринарии 20
1.3. Характеристика гуминовых кислот 25
1.4. Физиологическая активность и вопросы механизма действия гуминовых кислот 33
1.5. Программа и материал исследования 45
ГЛАВА II. Влияние гумата натрия на некоторые физиологические функции животного организма
2.1. Влияние гумата натрия на показатели крови и сердечно-сосудистую систему 53
2.2. Гистоморфологические исследования после введения гумата натрия 59
2.3. Влияние гумата натрия на состояние некоторых
желез внутренней секреции 61
2.4. Влияние гумата натрия на воспроизводительную функцию экспериментальных животных 63
2.5. Проверка апирогенности гумата натрия 66
2.6. Проверка аллергизирующих свойств гумата натрия 66
2.7. Определение острой токсичности 69
ГЛАВА III Гумат натрия как фактор повышения неспецишческой резистентности организма 72
3.1. Биологическая активность гумата натрия на фар-макобиологических тестах 73
3.2. Влияние гумата натрия на некоторые показатели неспецифической резистентности организма 80
3.3. Влияние гумата натрия на организм при воспроизведении общего кислородного голодания 91
3.4. Влияние предварительного введения гумата натрия на течение и исход токсической анемии 95
3.5. Влияние предварительного введения гумата натрия на развитие серотониновой язвы желудка 100
3.6. Влияние гумата натрия на устойчивость организма при токсическом гепатите 106
Заключение 120
Выводы 137
Указатель литературы 139
Приложение
- Неспецифическая сопротивляемость организма и принципы ее изучения
- Торф как источник биологически активных веществ, его применение в медицине и ветеринарии
- Влияние гумата натрия на показатели крови и сердечно-сосудистую систему
- Биологическая активность гумата натрия на фар-макобиологических тестах
Введение к работе
Актуальность проблемы. Решение ХХУІ съезда КПСС включает вопросы более полного использования, природных ресурсов на основе достижений науки и технического прогресса. Продовольственная программа СССР на период до 1990 г. особое значение придает проблеме биологически активных веществ: "Обеспечить разработку более совершенных методов и средств предупреждения и лечения болезней животных, эффективных биологических и химико-терапевтических препаратов и технологии их производства". Изыскание естественных биологически активных соединений и разработка на их основе высокоэффективных препаратов, повышающих адаптацию животных организмов к неблагоприятным условиям среды, является актуальной фундаментальной проблемой.
Необходимость данных разработок объясняется особенностями современной промышленной технологии получения продуктов животноводства. Это связано с концентрацией животных на крупных фермах, что требует изыскания новых средств для повышения неспецифической сопротивляемости организма животных и активации их адаптационных возможностей.
В настоящее время в целях повышения естественной резистентно-їсти и продуктивности сельскохозяйственных животных используются ферменты, гормоны и другие препараты органического происхожде-. ния. Широкое внедрение в практике медицины и ветеринарии получили препараты, приготовленные по методу академика В.П.Филатова, которые уже более полувека с успехом применяются для повышения защитных и компенсаторных возможностей организма.
В.П.Филатов писал, что "биогенные стимуляторы обнаружены... в лиманной грязи, иле пресных озер, в черноземе, в осенних ли-
стьях, в торфе и других материалах, содержащих остатки животных и растительных организмов, т.е. везде, где живые организмы,приспосабливаясь или медленно умирая, накапливали биогенные стимуляторы" (В.П.Филатов, 1952).
Советский Союз располагает мощными источниками сырьевых ресурсов, на основе которых могут быть получены биологически активные вещества. Наиболее доступным и практически неисчерпаемым сырьем для этих целей является торф.
С давних времен торф получил широкое распространение в сельском хозяйстве, в растениеводстве-в веде органического удобрения почвы и в животноводстве - в виде торфяного питья и сухой подкормки как источник минеральных и органических веществ для стимуляции роста.
В медицине торф применяется*в виде апликаций в бальнеологии. Большую ценность для лечебной медицины представляет инъекционный препарат - торфот, приготовленный по методу В.П.Филатова.
Особый интерес вызывают гуминовые вещества торфа, составляющие 30-50% его массы. Перспективность и необходимость их глубокого изучения, разработки и использования в различных областях народного хозяйства (растениеводстве, животноводстве и медицине) базируются на анализе литературных данных, свидетельствующих о высоком биологически активном потенциале действия веществ гумусовой природы.
Эффективность использования гуминовых веществ и механизм их действия на растениях исчерпывающе представлен в фундаментальных исследованиях школы профессора Л.А.Христевой в Советском Союзе, а также ряда других стран. Растворимые формы гуминовых кислот (соли одновалентных металлов) в малых концентрациях значительно стимулируют рост, развитие растений, повышают поступление питательных элементов в растения, активизируют белковый
и углеводный обмен и повышают урожай сельскохозяйственных культур.
Действие веществ гумусовой природы на растения особенно заметно при отклонении внешних условий от нормы: при повышенной температуре (Л.А.Христева, 1962), дефиците кислорода ( S'Gumin-ski,Z.Guminska f 1953), пониженной влажности (М.М.Кононова, К.В.Дьяконов, I960), высокой дозе минеральных удобрений (Л.А. Христева, 1947; Л.А.Христева, 1956; A.M.Галушка, А.Я.Безкровная, 1975; R.Chaminade ,1968; С.Гумински, 1968) несоответствии рН среды биологическим особенностям растений ( S.Guminski 1953; v.Hernando , 1968; S.Guminski, M.Badurova , 1965; С.Гумински, З.Г.Гуминска, 1971); для снятия ингибиругощего действия пестицидов (А.Г.Азанов, Л.К.Ткаченко, Т.В.Филиппова, Т.А.Лукьянова, 1973; Л.А.Христева, А.Т.Азанов и др., 1973; Л.П.Сторчай и др., 1977; Л.П.Сторчай, 1980; А.И.Горовая, Г.И.Бражниченко, 1973; А.И.Горовая, А.Ф.Кулик, И.А.Огинова, 1983 и др.).
Таким образом, вещества гумусовой природы повышают неспецифическую сопротивляемость растений.
Имеются единичные ссылки в литературе по использованию солей гуминовых кислот в качестве стимулятора роста для повышения привесов молодняка крупного рогатого скота и птиц, увеличения яйценоскости несушек, а также для ускорения роста и выживаемости рыб.
Однако, в доступной нам литературе нет информации о влиянии гуминовых веществ на различные физиологические процессы, повышающие резистентность животных организмов при неблагоприятных условиях среды.
Отдельные компоненты внешней среды обитания организма часто выступают в качестве отрицательных раздражителей (Г.Селье,1961, 1972), что в значительной мере снижает продуктивность сельскохозяйственных животных. К таким факторам в практике животноводст-
ва следует отнести отлов, перераспределение на животноводческих фермах, транспортировку, инфекции, различного рода погрешности содержания скота, не зависящие от обслуживающего персонала и др. Оптимальный вариант повышения адаптационных возможностей животного организма может быть реализован введением физиологически активных средств неспецифического действия, так как ни тренировка, ни закаливание не могут быть широко приемлемы в практике животноводства и ветеринарии. Именно задача разработки таких средств с определенно заданными адаптогенными свойствами является актуальной, перспективной и экономически выгодной.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось экспериментальное обоснование возможности использования биологически активных соединений гумусовой природы (гумата натрия) для повышения неспецифической резистентности, изучение влияния их на основные физиологические функции организма в норме и при воздействии неблагоприятных факторов с выявлением некоторых сторон механизма действия.
Целевая установка работы включала решение следующих конкретных задач.
Определить влияние гумата натрия на сердечно-сосудистую систему, на гистоморфологическое строение тканей жизненно важных органов и желез внутренней секреции. Изучить тератогенные,эмбрио-токсические, аллергизирующие и анафилактогенные свойства, апиро-генность препарата и Rq»
Определить уровень физиологической активности гумата натрия при воздействии на организм различных неблагоприятных факторов.
Изучить защитный эффект гумата натрия при нарушении гемо-поэза, функции печени и трофических процессов слизистой оболочки желудка.
4. Изучить некоторые стороны механизма физиологического действия гумата натрия.
Материал и методы исследования. Объектом исследования служили экспериментальные животные (кролики, морские свинки, белые крысы, белые мыши, лягушки).
Гумат натрия вводился парентерально в виде 0,1% водного раствора.
Для решения поставленных задач были использованы современные физиологические, гистоморфологические, биохимические и цитохимические методы исследования.
Уровень физиологической активности гумата натрия определяли реакцией организма экспериментальных животных при воздействии различных неблагоприятных факторов. К ним относятся: гипоксия (пребывание в барокамере и замкнутом пространстве), угнетение тормозных процессов в центральной нервной системе введением токсических доз стрихнина, проводимость сердечной мышцы, нарушенная введением токсической дозы строфантина, степень угнетения функциональных свойств изолированных мышц лягушки при введении альтерирующего агента (хлористого калия).
Защитное действие гумата натрия оценивалось по показателям функционального состояния организма при нарушении гемопоэза (введение фенилгидразина), метаболической устойчивости печени (введение четыреххлористого углерода, гексенала), трофики слизистой оболочки желудка (введение серотонина).
Вопросы изучения механизма действия гумата натрия связаны с определением влияния его на иммунологическую реактивность (фагоцитарная активность лейкоцитов, активность лизоцима), ферментные системы (активность церулоплазмина; активность трансфераз- -АЛТ и ACT, тиоловые группы белков) и некоторые виды обмена (гликоген
в печени, общий белок и его фракции в крови и печени).
Данные экспериментальных исследований обработаны статистически с применением микро-ЭВМ "Электроника" БЗ-2І.
Научная новизна и практическая ценность . Получены новые данные о нормализующем влиянии комплекса биологически активных веществ торфа на различные физиологические функции организма. Дано экспериментальное обоснование применению гумата натрия для повышения неспецифической резистентности организма.
Доказан высокий антитоксический эффект гумата натрия при введении экспериментальным животным отравляющих доз стрихнина,строфантина, фенилгидразина, серотонина, четыреххлористого углерода, гексенала.
Установлено, что гумат натрия безвреден, не обладает аллерги-зирующими, анафилактогенными, тератогенными и эмбриотоксическими свойствами, апирогенен.
Доказано, что механизм положительного предварительного воздействия гумата натрия связан со стимулирующим влиянием его на иммунологическую реактивность, антитоксическую функцию печени и нормализацией сульфгидрильно-дисульфидного равновесия, показателей белкового (общий белок в крови и гепатоцитах, количество карбоксильных групп глютаминовой кислоты в гепатоцитах) и углеводного (гликоген в гепатоцитах) обменов.
Результаты исследований являются предпосылкой для создания нового комплекса биологически активных соединений торфа - гумата натрия с целью активации и расширения адаптационных возможностей организма.
Полученные данные включены в материалы для представления в Ветеринарный Фармакологический Совет МСХ СССР. Гумат натрия (гуми-
нат) утвержден в качестве кормовой добавки для повышения продуктивности и неспецифической резистентности молодняка крупного рогатого скота (см.приложение).
Положения работы и ее выводы расширяют арсенал средств неспецифического действия из природного сырья.
Структура и объем работы. Диссертация написана на русском языке, изложена на страницах машинописи, состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов и приложения. Иллюстрирована 19 таблицами, 12 макро- и микрофотографиями и 7 графиками. Список литературы содержит 282 отечественных и 57 иностранных источника.
Внедрение .По теме диссертации опубликовано 18 работ. I работа принята к опубликованию. В том числе 4 публикации за рубежом (ПНР, ЧССР, ГДР, Ирландия).
Апробация работы. Основные результаты диссертации докладывались и обсуждались на межзональной конференции "Перспективы использования в сельском хозяйстве физиологически активных веществ гумусовой природы" (Днепропетровск,1980г.); зональной научно-технической конференции "Химия гумусовых кислот, их роль в природе и перспективы использования в народном хозяйстве" (Тюмень,1981); Всесоюзном научно-техническом семинаре "Комплексное использование торфа в народном хозяйстве"(Минск, 1981); Совете молодых ученых НИИ глазных болезней и тканевой терапии им.акад.В.П.<Филатова(1980); заседании Одесского отделения Общества физиологов(1981); Республиканской конференции "Применение тканевых препаратов в медицине и сельском хозяйстве", посвященной 50-летию метода тканевой терапии (Одесса,1983); ЭТ1 съезде офтальмологов УССР (Одесса, 1984).
Работа выполнена в лаборатории фармакологии тканевых препаратов (руководитель лаборатории доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки УССР В.П.Соловьева) Одесского НИИ глазных болезней и тканевой терапии им. акад.В.П.Филатова (директор института - Заслуженный деятель науки, академик .АМН СССР, профессор Н.А.Пучковская).
На защиту выносятся следующие положения.
Функциональное состояние сердечно-сосудистой системы, показатели крови, микроструктура миокарда, печени, легких, надпочечников и щитовидной железы, данные по изучению тератогенных,эмбрио-токсических, аллергизирующих, анафилактогенных, апирогенных свойств свидетельствуют о положительных качествах изучаемого комплекса биологически активных веществ торфа - гумата натрия и отсутствии побочного эффекта.
Высокий уровень физиологической активности гумата натрия при воздействии различных неблагоприятных факторов на организм экспериментальных животных.
Стимулирующее влияние предварительного введения гумата натрия на гемопоэтическую систему при фенилгидразиновой анемии, повышение метаболической устойчивости печени к повреждающему действию четыреххлористого углерода, улучшение трофических процессов слизистой оболочки желудка, нарушенных токсическим воздействием серотонина.
Механизм антитоксического действия гумата натрия связан с влиянием на белоксинтезирующую систему крови, иммунобиологическую реактивность, некоторые показатели обмена веществ (в крови и гепатоцитах), антитоксическую функцию печени, свидетельствующие о неспецифичности препарата и возможности его использования как адаптогена.
Неспецифическая сопротивляемость организма и принципы ее изучения
Еще во П половине XIX столетия Клод Бернар сформулировал положение, что наиболее характерной чертой живых организмов является их способность сохранять постоянство внутренней среды независимо от изменений окружающих условий. Позднее У.Кеннон эту способность приспособительных реакций организма назвал гомеостазом. Таким образом, гомеостаз - это свойство биологической системы сохранять династическое постоянство своей внутренней среды, что и отражает уровень неспецифической резистентности организма. Поскольку гомеостаз может нарушаться различными факторами физической, химической и биологической природы, то и резистентность является категорией более общей, чем специфический иммунитет (Н.В.Васильев, 1976).
Гомеостаз характерен для всех живых организмов, поэтому в его основе лежат некоторые механизмы стереотипного характера, определяющие неспецифическую сопротивляемость к внешним условиям. Это положение наиболее отчетливо и перспективно отражено в учении Г.Селье о стрессе, как результате взаимодействия повреждения и защиты.
Симптомокомплекс стресса назван "общим адаптационным синдромом" (ОАС), который рассматривается как защитная неспецифическая реакция организма (Г.Селье, 1961). Этот синдром включает последовательно стадии тревоги, резистентности и истощения. Мобилизация защитных сил организма в период стадии тревоги и определяет состояние повышенной сопротивляемости организма (стадию резистентности).
Однако термин "стресс" не является универсальным и, в частности, не применим к таким патологическим процессам как инфекция, авитаминозы, вирусные инфекции и др., поскольку в патогенезе их система гипофиз-надпочечники хотя и участвует, но не определяет основных закономерностей развития болезни (А.Адо, 1974). При оценке же уровня резистентности по Г.Селье определяется состояние желез внутренней секреции, количество эозино-филлов, лимфоцитов в крови, индекс креатинина в моче, реакция на АКТГ и др.
Ведущим фактором повышения сопротивляемости организма к экстремальным условиям среды является перестройка клеточного метаболизма, регуляторами которого, как известно, являются ферменты. Усиление ферментативного аппарата клетки закономерно мобилизует защитные силы организма.
М.А.Розин (1967), рассматривая вопрос о возможности усиления адаптационного синдрома под влиянием лекарственных средств, считает, что "действующим препарат может быть в том случае, если под его влиянием индуцируется белковый синтез".
Известно, что одним из элементов, формирующих устойчивость клеток, является их способность репарировать повреждения. В обеспечении репарационного процесса существенная роль также принадлежит синтезу белка (Д.Н.Насонов, 1959). Факты, подкрепляющие это предположение, получены на растительных и животных клетках ( K.Mothes , 1947; М.Ф.Мережинский, 1961; А.Г.Швецкий, Л.М.Воробьева, 1978).
Белковый синтез, процесс, требующий большой затраты энергии и притока пластических масс, определяет неспецифический характер адаптационного синдрома, что Р.Н.Ахмеров, Н.М.Кондрашова (1976) связывают с неспецифическими биоэнергетическими процессами: "Биоэнергетика и есть то главное неспецифическое средство, которое природа вложила во всякое живое существо".
Адаптация организма определяется тем, в какой мере живая система в изменившихся условиях как внутренней, так и внешней среды способна сохранить гомеостаз (стационарное состояние) и обеспечить его стабильность во времени.
Устойчивая адаптация, по мнению Меерсона Ф.З. (1973), развивается последовательно. Первичным сигналом, активизирующим генетический аппарат клетки, является дефицит макроэргов и увеличение потенциала фосфорилирования. В дальнейшем формируются структурные изменения, обеспечивающие увеличение мощности систем транспорта, утилизации кислорода и ресинтеза АТФ.
В определенной мере изучены основные факторы, играющие роль в преодолении стрессовых нагрузок. К ним относятся метаболит-ные реакции митохондрий, активность сукцинатдегидрогеназы (Н.М.Кондрашова, 1979), временное увеличение потребления кислорода (Л.Проссер, Ш.Браун, 1967), причем, животные с более развитой гликолитической системой имеют более высокие адаптационные способности (З.И.Барбашова, I960; А.Трифонова, 1958), увеличение выделения фенольных веществ в моче (Ю.А.Манятин,1972), увеличение активности гиалуронидазы в крови (Б.Г.Колб, В.К.Кух-та, Е.Ш.Конопля, 1961) и др.
Важнейшим параметром гомеостаза, определяющим степень сопротивляемости организма к условиям внешней среды, инфекционным и различным повреждающим факторам, являются мембраны и их основные структурные элементы - липопротеидные комплексы, по которым происходит энергетический транспорт электронов.
Н.В.Лазарев (1958) высказал гипотезу о существовании в организме высших животных и человека комплексных, неспецифических защитных реакций, которые проявляются в очень разнообразных, но содружественных изменениях физиологических функций, а "полива лентность методов, повышающих сопротивляемость организма так же, как разнообразные проявления этой резистентности (включая инфекции и модели заболевания), не укладываются в понятие "общего адаптационного синдрома Селье". Таким образом, в организме существуют центральные механизмы, регулирующие целый комплекс защитных реакций, в которых признаки активации "системы Селье" являются частью возникающего более широкого синдрома, названного Н.В.Лазаревым (1962, 1963) состоянием неспецифически повышенной сопротивляемости - СНПС. Это состояние следует рассматривать как разновидность общего адаптационного синдрома, которая возникает при прерывистой адаптации к умеренным раздражителям, и обязательным признаком которой является повышение резистентности не только к специфическому агенту, но и к агентам другой природы (В.Я.Русин, 1978).
Сравнение общего адаптационного синдрома ОАС и СНПС показало, что при развитии СНПС отсутствуют заметные изменения в железах внутренней секреции, что качественно отличает это состояние от ОАС (Н.В.Лазарев, 1962).
Торф как источник биологически активных веществ, его применение в медицине и ветеринарии
Торф является мощным источником физиологически активных веществ, хотя они полностью не идентифицированы и малоизучены. Природа их неоднозначна. Биологически активные вещества могли содержаться в растениях - торфообразователях, или появиться в ходе торфообразования биохимическим путем. Установлено, что в составе торфообразователей содержится много различных глюкози-дов, алколоидов, сапонинов, дубильных веществ, эфирных масел и других физиологически активных соединений (С.С.Драгунов, Л.Н.Попова, 1968). Учитывая, что в процессе торфообразования активное участие принимают низшие грибы, актиномицеты и бактерии, то к вышеперечисленным веществам следует добавить еще различные антибиотики, ферменты, витамины и другие биологические соединения, продуцируемые микроорганизмами (Г.В.Наумова, 1981).
Гуминовые кислоты, входящие в состав органического вещества торфа, играют огромную роль в сохранении биологических веществ в залежи (А.Ф.Драгунова, С.С.Драгунов, 1962). Благодаря своему химическому строению они вступают во взаимодействие с такими биологически активными веществами как холин, парааминобензой-ная кислота, тиамин. Такие соединения как биотин, рибофлавин, пантотеновая кислота, никотинамид - сорбируются гуминовой кислотой.
Торф, как источник биологически активных веществ, оказывает благоприятное действие на живые организмы.
Терапия торфом эмпирически получила значительное распространение еще в XIX веке. Регулярное же бальнеологическое исследование торфа в естественно-научной и медицинской области началось только в начале XX века (Н.А.Якубов, 1948). Торф успешно применяется в бальнеологии и в настоящее время. Его применение улучшает различные нейрорегуляторные функции, увеличивает адаптационные свойства, стимулирует компенсаторные механизмы организма.
К.Е.Кветин (1963) считает, что качество торфяной ванны зависит от содержания гуминовых кислот. Гуминовые кислоты представляют собой сильно набухшие гели и придают полутвердую пластическую консистенцию торфяной ванне, при этом используются их сорбционные, бактериостатические и вяжущие свойства.
Одним из ведущих показаний применения торфяных ванн являют- . ся ревматические заболевания, что основано на способности торфа снижать активность гиалуронидазы. Торфяные ванны противодействуют патологическим изменениям соединительной ткани, суставных оболочек и суставной жидкости, обусловленных чаще всего повышенной активностью гиалуронидазы тканей (К.Е.Квентин, 1963; В.В.Апостолюк, К.А.Апостолюк, 1966).
Органические коллоиды торфа, его бактерицидные свойства, способность адсорбировать микрофлору и различные вредные химические соединения являются важными лечебными факторами в борьбе с болезнетворными организмами, особенно при гнойных хронических процессах.
В бальнеологических лечебницах Австрии, Венгрии, ГДР при более чем 70 заболеваниях используют торфяные ванны, аппликации, пасты и торфяную воду. Это, в основном, заболевания желудочно кишечного тракта, ревматизм, заболевания нервной системы, органов движения, кожные заболевания (Н.А.Якубов, 1948; В.И.Чистяков, Л.М.Кузнецова, 1976; С.Дамзе, А.Горнок, Я.Янковяк, А.Карский, 1963).
Широко использовались в медицине и адсорбционные свойства торфа. Из торфа изготовлялся перевязочный материал (д-р Редон, 1917; Губарев, 1917) и была попытка использовать его в качестве сорбента при желудочно-кишечных заболеваниях (С.Е.Буркат, 1962).
В 1948 году Г.Л.Вайсман и Л.Д,Лейденская (1948) предложили препарат из торфа "Торфален" в виде порошка. "Торфален" применялся при поносах, колитах, при острых кишечных растройствах, однако, препарат не получил широкого распространения в медицине.
Обнаружено положительное действие фракций, выделенных из торфа, при лечении бронхиальной астмы, гипертонии, а также установлено их защитное действие при ионизирующем облучении (H.Wrobel , C.Jasiak , I97S; И.П.Межулис, 1966).
Препарат торфот (отгон торфа) единственный инъекционный препарат из торфа, применяемый в медицине. В препарате сконцентрированы биологически активные вещества, которые способны перегоняться из торфа с водным паром. В состав торфота входят органические кислоты - уксусная, пропионовая и масляная, содержание которых составляет около 2% по отношению к общему количеству кислот, а также высшие кислоты жирного ряда - лауриновая, мири-стиновая, миристолеиновая, пальмитиновая, пальмитоолеиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая, трипептагептадекановая. В виде следов найдены капроновая, каприновая и эйкозановая. Кроме того, анализ показал, что в торфоте имеется значительное количество ароматических и оксикислот, не принадлежащих к ряду насыщенных или непредельных алифатических
Влияние гумата натрия на показатели крови и сердечно-сосудистую систему
Исследование проведено на 2-х видах животных - белых крысах и кроликах. Продолжительность опыта на белых крысах - б месяцев, в течение которых опытной группе животных ежедневно вводили по 0,3 мл 0,1% раствора гумата натрия. Контрольные крысы в том же количестве и в те же сроки получали физиологический раствор. Определяли общее состояние, вес животных, количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина на 30-й, 60-й и 180-й дни введения.
Установлено, что на протяжении всего срока наблюдения отклонений от нормального физиологического состояния и веса животных не выявлено. Уровень показателей крови при введении гумата натрия сохраняется в пределах физиологических колебаний (табл.2.1).
Опыты на кроликах при 2-х месячном введении гумата натрия по 0,5 мл свидетельствзшт об аналогичном влиянии препарата на исследуемые показатели с определенной тенденцией к повышению количества эритроцитов (табл.2.2).
Исследование курсового введения гумата натрия на протромбино-вый индекс (метод Туголукова, М.Д.Лемперт,1960) выявило изменения этого показателя в пределах физиологической нормы (91,7-99,3%).
Полученные данные длительного введения исследуемого препарата (хроническая токсичность) белым крысам и кроликам свидетельствует об отсутствии какого-либо патологического влияния на гематологические показатели.
Для выявления кардиотонических свойств 0,1% раствора гумата натрия было изучено его действие на сократительные свойства миокарда по методу Штраубе, влияние на сосуды изолированного уха кролика по методу Писемского,а также показатели электрокардиограммы.
Действие препарата изучалось в трех концентрациях: 0,1% раствор гумата натрия и в разведении 1:10, 1:100. Работа сердца графически регистрировалась на ленте плетизмографа. Полученные данные представлены графически на рис.2.1.
Из рис.2.1. следует, что перфузия сердца 0,1% раствором гумата натрия вызывает кратковременное обратимое снижение амплитуды и частоты сердечных сокращений. После пропускания раствора Рингера работа сердца восстанавливается до исходного уровня.
Проверка последующих разведений 0,1% раствора (1:10, 1:100) гумата натрия, которые близки к разведению препарата в биологических жидкостях организма, не вызывала каких-либо патологических изменений в работе изолированного сердца лягушки.
Перфузия изолированного уха кролика осуществлялась в контроле жидкостью Рингера-Локка при комнатной температуре. Давление жидкости составляло 70-80 см водяного столба. 0 состоянии сосудов судили по количеству вытекающих капель в единицу времени(в мин). Уменьшение их свидетельствует о сужении соеудов и, наоборот,расширение сосудов сопровождается увеличением количества капель.
Полученные результаты опыта представлены в табл.2.3.
Из- табл.2.3 следует наличие тенденции к обратимому сужению просвета изолированных соеудов при введении 0,1% раствора гумата натрия. Концентрация препарата 1:10, 1:100, 1:5000 не вызыёает статисшгаески достоверного влияния на просвет сосудов./Именно эти разведения практически близки к концентрации его в крови организма животных и человека при курсовом введении.
Проверка влияния курсового введения 0,1% раствора гумата натрия на работу сердца была также проведена электрокардиографически. Препарат ввводили ежедневно подкожно в дозе 0,5 мл в течение 30 дней. ЭКГ регистрировали до начала эксперимента (исходный фон), через 15 и 30 дней инъекций и через 15 дней после окончания курса введения препарата. Запись электрокардиограммы в 3-х отведениях проведена на аппарате БЕКС-4.
При анализе данных ЭКГ (рис.2.2) установлено, что введение исследуемого препарата кроликам в течение указанного срока не оказывает каких-либо заметных изменений в состоянии сердечной мышцы.
Таким образом, полученные нами сведения о влиянии гумата натрия на изолированное сердце, изолированные сосуды и электрокардиограмму свидетельствуют об отсутствии каких-либо побочных, неблагоприятных влияний препарата на сердечно-сосудистую систему.
Биологическая активность гумата натрия на фар-макобиологических тестах
Стрихнинный тест- основан на способности биологически активных веществ повышать сопротивляемость организма к воздействию отравляющих доз стрихнина. Стрихнин был избран ввиду отчетливо выраженного закономерного проявления его токсических свойств (М.Б.Вургафт,1949; Т.Е.Орлова, 1963).
По современным представлениям стрихнин блокирует действие! химических веществ, играющих роль тормозящих факторов при передаче возбуждения в постсинаптических нервных окончаниях спинного мозга, вызывая, таким образом, "возбуждающий" эффект ( T.M.Araki, It0» O.Oscazsson , I96I;P.G.Kostynk, T.Oshima ,1962). Этот препарат в высоких концентрациях оказывает парабиотическое действие на мембрану нервных и мьшечных волокон, что выражается в статистически достоверном уменьшении амплитуды потенциала действия и удлинении латентного периода (Т.А.Сафонова, В.Л.Журавлев, В.И.Иванов, 1976). Б токсических дозах стрихнин вызывает иррадиацию возбуждения по всем моторным центрам нервной системы, что приводит к судорожным сокращениям скелетной мускулатуры и может быть с большой наглядностью использовано в эксперименте.
Опыт с предварительным введением гумата натрия на стрихнин-ном тесте проводился на белых мышах в виде отдельных серий. Критерием определения защитного эффекта гумата натрия служил процент выживаемости животных после введения отравляющей дозы стрихнина (0,01 мл 0,1% раствора на I кг массы животного). Данная доза стрихнина вызывает 100% гибель контрольных мышей. Каждая серия опыта предназначалась для выявления оптимальной дозы и продолжительности введения гумата натрия.
Нами было установлено, что введение гумата натрия за 0,5 часа и I час до отравления животных стрихнином не увеличивает продолжительность жизни и процент выживаемости их.
Следующая серия экспериментов была проведена на 3-х группах белых мышей (по 50 животных в каждой), которым в течение 10 дней предварительно подкожно вводили 0,1 и 0,3 мл 0,1% раствора гумата натрия. При 100% смертности контрольных животных после отравления стрихнином установлен высокий процент выживаемости опытных мышей. При предварительном введении 0,1 мл гумата натрия он составляет 55%, а при дозе 0,3 мл этот показатель достигает 70%.
Выявленная нами оптимальная доза гумата натрия 0,3 мл была проверена дополнительно в двух вариантах при изменении схемы введения препарата. При одно- и двукратном предварительном введении гумата натрия в течение одной недели выживаемость опытных животных составляет соответственно 30 и 70%.
Полученные результаты опыта свидетельствуют о влиянии гумата натрия на повышение неспецифической резистентности организма. Установлена зависимость антитоксического действия препарата от дозы и срока введения. Наиболее выраженный эффект наблюдается при профилактическом введении 0,3 мл 0,1% раствора гумата натрия ежедневно в течение 10 дней и 2-кратно в течение семи дней.
Антитоксический эффект гумата натрия может быть связан с влиянием его на защитные механизмы, включающие опосредованное действие его на центральную нервную систему через изменение химизма крови.
Строфантинный тест характеризует уровень антитоксического действия биологически активных веществ при введении отравляющей дозы строфантина на продолжительность работы сердца лягушки. Действие токсических доз строфантина проявляется в усилении систолических сокращений сердца, удлинении диастолы, замедлении ритма сердца, понижении возбудимости, замедлении атрио-вентрикулярной проводимости.
Опыты проводились на лягушках массой 30-40 г. Грудная клетка животных вскрывалась для наблюдения за работой сердца лягушки in situ Предварительно в течение 7 дней контрольной и двум опытным группам лягушек ;(по 10 штук в каждой) вводили соответственно физиологический раствор и гумат натрия в дозе 0,1 и 0,3мл. Критерием для суждения о влиянии гумата натрия служила та разность в продолжительности работы сердца контрольных и опытных лягушек, которая была отмечена после введения равноценных отравляющих доз раствора строфантина - 0,2 мл 0,5% раствора (В.П.Соловьева, 1964).
Полученные данные эксперимента представлены в табл.3.5.
Из таблицы следует, что предварительное введение гумата натрия лягушкам отчетливо снижает токсическое действие строфантина и повышает стойкость сердечной мышцы, удлиняя работу сердца на 43,7-48,7% по сравнению с контролем.
