Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Неспецифическая резистентность организма и принципы ее формирования 9
1.2. Применение препаратов растительного и животного происхождения для повышения резистентности 18
1.3. Использования препаратов из торфа в ветеринарии как средство, повышающее устойчивость организма 25
Глава 2. Материалы и методы исследования 43
2.1. Объект исследования и распределение животных по сериям эксперимента43
2.1.1, Объект исследования 43
2.1.2. Распределение животных по сериям эксперимента 44
2.2. Методы исследования 45
2.2.1. Методы исследования токсикологических свойств препарата и его состава 45
2.2.2. Методы оценки стресс-регулирующей активности гум итона 47
2.2.3. Методы исследования состояния критических систем организма при действии экстремальных воздействий 48
2.2.4. Методы оценки работоспособности организма при применении препарата гумитон 54
2.2.5. Методы оценки продуктивности кур при применении препарата гумитон 55
2.2.6. Методы статистической обработки результатов исследования 56
Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение 57
3.1. Исследование состава препарата гумитон и его токсикологических свойств 57
3.2.Влияние гумитона в условиях стрессорного воздействия на организм 61
3.3. Состояние критических систем организма в условиях применения препарата гумитон 64
3.3.1. Состояние кроветворной системы на фоне экстремальной нагрузки при применении гумитона 64
3.3.2. Состояние желудочно-кишечного тракта в условиях применения препарата гумитон 70
3.4. Влияние гумитона на работоспособность и анаболические процессы организма крыс 89
Глава 4. Применения гумитона в практическом птицеводстве 96
Заключение 105
Выводы 112
Список 114
- Неспецифическая резистентность организма и принципы ее формирования
- Методы исследования состояния критических систем организма при действии экстремальных воздействий
- Исследование состава препарата гумитон и его токсикологических свойств
- Состояние желудочно-кишечного тракта в условиях применения препарата гумитон
Введение к работе
Актуальность.
Психоэмоциональные и информационные нагрузки, гиподинамия, появление новых факторов, в том числе токсических, к которым организм не имеет эволюционно выработанных мер защиты, - все это является причиной снижения неспецифической резистентности (или иными словами устойчивости) организма. При этом под резистентностью организма понимают его способность сохранять свою жизнедеятельность и основные, присущие ему свойства в различных условиях окружающей среды, а также противостоять воздействиям, которые могут привести к изменению этих свойств или гибели [Даренская, Короткевич, 2001]. Исследователи давно ищут пути повышения устойчивости организма к нагрузкам, превышающим средние физиологические возможности. Этого можно достичь, постепенно приучая организм к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды, однако этот путь повышения адаптационных способностей довольно длителен и не всегда приемлем. Обычно для профилактики и лечения повреждающих эффектов стресса и повышения неспецифической резистентности организма используются препараты общеукрепляющего действия - адаптогены, витамины, препараты посредников и метаболитов стресс-лимитирующих систем. В экстремальных ситуациях, требующих включения защитно-приспособительных реакций организма, природные вещества не уступают по своей активности синтетическим средствам и, зачастую, превосходят их.
В связи с этим весьма актуальной проблемой является разработки и применения естественных стимуляторов неспецифической резистентности организма, не содержащих антибиотиков и анаболических гормонов. В качестве таких стимуляторов перспективны препараты из торфа, в составе которых присутствует широкий спектр биологически активных веществ, в том числе аминокислоты, витамины, гуминовые и фульвокислоты. Показано, что гуминовые соединения проявляют мембранотропное действие, способны усиливать активность обменных процессов в организме, повышать его сопротивляемость к неблагоприятным факторам внешней среды. Известны данные исследователей России, Китая, Германии, Польши о применении гуминовых препаратов в комплексе лечения глазных, сердечно - сосудистых, желудочно-кишечных болезней, бронхиальной астмы, а также для использования в онкологической практике в качестве иммуномодуляторов и радиопротекторов, однако в официальном реестре лекарственных средств препараты из торфа единичны. Гуминовые препараты из торфа и бурого угля используются также в сельском хозяйстве в качестве профилактических и лечебных средств. Их применяют при выращивании телят, свиней, кроликов, коров, цыплят-бройлеров для повышения сопротивляемости организма, стимуляции и роста и их продуктивности.
Создание безвредных, но эффективных средств, способных влиять на уровень адаптационных возможностей организма - одна из ключевых проблем как современной медицины, так и ветеринарии. Отсюда весьма актуальна задача создания гуминового препарата из торфа, обладающего комплексными свойствами, сочетающего специфические и неспецифические эффекты - свойства стимуляторов роста, регуляторов резистентности и иммунитета.
Немаловажную роль в выборе объекта исследования играет и анализ сырьевой базы. Объемы запасов торфа в Томской области, оцениваемые в колоссальную цифру 32,8 млрд. тонн, составляют 20,9% российских ресурсов этого ценнейшего сырья и являются самыми крупными не только в России, но и в мире [Болота Западной Сибири, 1998].
Целью данной работы является изучение возможности повышения неспецифической резистентности организма животных путем применения препарата гумитон. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Исследовать химический состав гумитона и его токсикологические свойства;
2. На модели иммобилизационного стресса изучить влияние гумитона на состояние стресс-систем организма;
3. Изучить состояние критических систем организма в условиях применения гумитона:
кроветворной системы животных при гипоплазии костного мозга, вызванной применением цитостатика циклофосфана;
слизистой оболочки желудка при формировании язв различной этиологии, эвакуаторнуго функцию желудочно-кишечного тракта и одно из основных проявлений язвенной болезни - болевой синдром;
4. Выявить возможность повышения гумитоном устойчивости организма к тяжелой мышечной нагрузке;
5. Оценить эффективность применения гумитона в качестве кормовой добавки для повышения неспецифической резистентности цыплят-бройлеров с использованием интегральных показателей - выживаемости и прироста живой массы цыплят.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Анализ химического состава гумитона убедительно доказывает, что применение его на животном организме может влиять на биосинтетические и энергетические процессы. Гумитон относится к классу малоопасных веществ и не обладает токсичностью.
2. Профилактическое введение гумитона повышает устойчивость организма к действию стресс-факторов: защищает критические системы организма, характеризующиеся наиболее высокой скоростью клеточного обновления (кроветворную и желудочно-кишечную). 3. Гумитон повышает резистентность организма при экстремальных физических нагрузках, стимулируя работоспособность животных и ускоряя темпы восстановления физической работоспособности;
4. Применение гумитона в птицеводстве может быть перспективно вследствие его способности повышать неспецифическую сопротивляемость организма.
Научная новизна.
Впервые проведен комплекс исследований нового препарата гумитон на основе гуминовых кислот торфа, полученного по оригинальной технологии.
В скрининговых экспериментах на лабораторных животных показан широкий спектр действия препарата.
Выявлена способность гумитона повышать резистентность организма путем защиты критических систем - кроветворной и желудочно-кишечного тракта.
Доказана безопасность препарата для его практического применения. В производственных испытаниях подтверждена способность препарата повышать неспецифическую резистентность организма животных.
Практическая значимость.
Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать гуминовый препарат гумитон в качестве кормовой добавки для повышения резистентности организма птицы, снижения падежа, увеличения продуктивности. Полученные результаты и сделанные выводы важны для решения задач, связанных с использованием препарата из торфа в сельскохозяйственном птицеводстве, получением экологически чистой мясной продукции высокого качества. Проведенные исследования легли в основу «Рекомендаций по применению гуминовой кормовой добавки гумитон», комплекта документов для регистрации препарата (сертификат соответствия № РОСС RU. ФВ01.ВІ2437) и разработки патентов для лечения железодефицитной анемии у животных. Препарат применяют в хозяйствах Томской и Оренбургской областей, Хакасии, КНР (провинция Ляонин).
Апробация работы. Основные положения работы представлены на Международной конференции «Современная гастроэнтерология и проблемы заболеваний органов пищеварения XXI века», г. Томск, 1999; IV Международной научно-практической конференции «Качество - стратегия XXI века», г. Томск, 1999; первой научно-практической конференции «Промышленно-экономическое развитие Западно-Сибирского региона на базе местного природного органического сырья», Омск, 2000; Международной научно- практической конференции «Высокие технологии добычи, глубокой переработки и использования озерно-болотных отложений», г. Томск, 2003; Региональной научно-практической конференции «Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве, растениеводстве и экономике», Томск, 2006..
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 18 печатных работ: 1 монография, 10 статей, 7 тезисов, получено 2 патента Российской Федерации на изобретение.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 208 источников, из них 177 отечественных и 31 зарубежных. Работа изложена на 134 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц и иллюстрирована 14 рисунками.
Неспецифическая резистентность организма и принципы ее формирования
Организм находится в состоянии непрерывного приспособления к условиям окружающей среды и условием его выживания является гомеостаз - способность сохранять относительное динамическое постоянство внутренней среды и в то же время изменять свое функциональное состояние в ответ на изменение условий среды. Процесс приспособления обеспечивает ритмическая слаженная деятельность всех функциональных систем, их гармоническое пропорциональное сочетание и взаимодействие. Усилия, направляемые организмом на поддержание гомеостаза в различных условиях, определяют особенности его ответной реакции на внешние воздействия [Горизонтов, 1976]. Любая реакция организма на действие экстремальных факторов складывается из специфической и неспецифической составляющих. Неспецифические реакции, будучи более древними и биологически выгодными в плане мобилизации резервных возможностей безотносительно к воздействующему фактору, сохранились, поскольку обеспечивали больше шансов на выживание. Наиболее общей характеристикой таких реакций является вовлечение в ответ многих функциональных систем, обеспечивающих жизнедеятельность целостного организма.
Под резистентностью организма понимают его способность сохранять свою жизнедеятельность и основные, присущие ему свойства в различных условиях окружающей среды, а также противостоять воздействиям, которые могут привести к изменению этих свойств или гибели [Даренская, Короткевич, 2001]. Резистентность организма тесно связана с его реактивностью [Адо, 1984; Кулагин, Лосев, 1984]
Известно, что в зависимости от вида и силы воздействия одни раздражители вызывают кратковременные изменения в функционировании одной или нескольких систем организма, не вызывая при этом нарушений гомеостаза, в то время как действие других приводит к серьезным нарушениям в функции различных систем и организма в целом. Представляет большой интерес точка зрения Л.Х. Гаркави и соавт. (1977, 1990), которые полагают, что в основе развития приспособительных реакций целого организма лежит количественно-качественный принцип. В ответ на действие раздражителей, различных по качеству, развиваются различные по величине, но стандартные, адаптационные, иными словами, неспецифические реакции, а специфика каждого раздражителя лишь накладывается на общий неспецифический фон. И действительно, каждый раздражитель характеризуется качеством и количеством. Качество - это то, что отличает один раздражитель от другого и обуславливает, таким образом, его специфическое действие. Количество (сила, доза) - это то, что характеризует любые раздражители, самые разные по качеству. Иными словами, количество - это то общее, что свойственно любому раздражителю и обуславливает его неспецифическое действие.
Однако при одних и тех же виде и силе раздражителя или воздействующего фактора ответная реакция организма определяется в значительной мере его индивидуальными особенностями. Общая неспецифическая адаптационная реакция организма была впервые описана Г.Селье (1960, 1977), показавшим, что в ответ на действие разных по качеству, но сильных раздражителей в организме стандартно развивается один и тот же комплекс изменений. Эта реакция получила название общего адаптационного синдрома, или реакция напряжения (стресс). Наряду с элементами защиты, при стрессе имеют место и элементы повреждения. Но ценой повреждения целесообразно приспосабливаться только по отношению к сильному раздражителю, который может угрожать жизни. В то же время по отношению к раздражителям слабой или средней силы такой путь приспособления биологически нецелесообразен и поэтому не мог закрепиться в процессе эволюции. Дальнейшие исследования показали возможность существования качественно другого, чем стресс состояния, также приводящего к изменению неспецифической резистентности, но без патологических проявлений, характерных для стресса [Лазарев, 1960; Симонов, 1969]. Это позволило в дальнейшем выделить три вида адаптационных реакций в зависимости от силы воздействия: стресс, реакция тренировки и реакция активации [Гаркави и др. 1977, 1990].
Реакция стресса - общая неспецифическая реакция организма на сильные раздражители. Эта реакция протекает стадийно и характеризуется определенным комплексом изменений в нейроэндокринной системе и оказывает влияние на уровень неспецифической резистентности организма, его метаболизм, воспалительный потенциал. Первая стадия стресса-«реакция тревоги» развивается через 6 часов после стрессорного воздействия и продолжается 24 - 48 часов. Ее характеризует уменьшение массы тимуса, лейкоцитоз, определенное соотношение форменных элементов белой крови: лимфопения, аиэозинофилия, нейтрофилез и развитие кровоизлияний и язв в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта.
В эндокринной системе наблюдаются следующие изменения: выброс в кровь адреналина надпочечниками, стимуляция секреции АКТГ гипофиза, приводящая к повышению секреции глюкокортикоидов коры надпочечников. Секреция минералокортикоидов угнетена, как и деятельность щитовидной и половых желез. Вторая стадия стресса, развивающаяся вслед за стадией тревоги — стадия резистентности (устойчивости, т.е. организм становится устойчивым к сильным повреждающим воздействиям, и эта устойчивость повышается). На этой стадии происходит нормализация деятельности эндокринных желез и тимико-лимфатической системы, а иногда даже повышается активность желез, угнетенных на первой стадии. и Если раздражитель очень сильный или повторяется, то развивается третья стадия — истощения, которая по характеру присущих ей изменений, напоминает реакцию тревоги. Исключение является лишь снижающаяся секреция глюкокортикоидов, что характерно для хронического стресса, развивающегося при систематическом действии стрессора. Повышение резистентности, наблюдающееся после реакции тревоги, достигается «дорогой ценой», т.к. стадия тревоги сопровождается повреждениями, напряжением и большими энергозатратами. Таким образом, защита достигается ценой повреждения. Формирование стадии резистентности, когда происходит нормализация и даже повышение устойчивости организма после реакции тревоги, объясняют изменениями, происходящими в центральной нервной системе (ЦНС). Известно, что в ЦНС под влиянием сильных раздражителей развивается резкое возбуждение, которое затем сменяется запредельным торможением - «крайней меры защиты» по И. П. Павлову. При запредельном торможении чувствительность центральных нервных аппаратов снижается, а значит, падающие на организм другие сильные воздействия, уже воспринимаются не как сильные. Это относится и к эндогенным афферентным сигналам. Поэтому, по мнению Л. X. Гаркави и др. (1990), после реакции тревоги развивается не стадия стресса, а другие реакции на раздражители либо слабой, либо средней силы, в зависимости от степени запредельного торможения. С их развитием эти авторы и связывают повышение неспецифической резистентности организма, что ранее приписывалось стрессу.
Методы исследования состояния критических систем организма при действии экстремальных воздействий
Методы исследования состояния критических систем организма при действии экстремальных воздействий Исследования кроветворной системы проведены в соответствии с требованиями одобренных Фармкомитетом МЗ России (Москва, май 1991) рекомендаций, вступивших в силу с 1992 г. Использовали модель гипоплазии костного мозга в результате применения цитостатика циклофосфана. Эксперименты проведены на мышах линии СВА. Гумитон в дозе 100 мг/кг вводили животным ежедневно в течение 10 суток, циклофосфан в дозе 100 мг/кг вводили на 4 и 7-е сутки от начала введения гумитона. Оценку эффективности лечебных воздействий проводили на 11 -е сутки эксперимента.
Определение общего количества лейкоцитов и эритроцитов периферической крови проводили в соответствии с традиционной гематологической методикой. Образцы крови, полученные из хвоста животных, набирали в меланжеры, разводили 3% раствором уксусной
кислоты (лейкоциты) или раствором Гайема (эритроциты) и производили подсчет в камере Горяева [Лабораторные методы исследования, 1987].
Подсчет ретикулоцитов осуществляли на мазках крови, приготовленных на предметных стеклах и окрашенных Азур-бриллиант-кризил-блау, пересчитывали на 1000 эритроцитов, выражая результат в миллипроцентах [Лабораторные методы исследования, 1987]. Для определение общего количества миелокариоцитов костного мозга содержимое бедренной кости животного вымывали 1 мл 3% раствора уксусной кислоты, ресуспензировали, переносили в камеру Горяева и считали число кариоцитов в 5 больших квадратах сетки с последующим перерасчетом на 1 х 106 клеток/бедро [Лабораторные методы исследования, 1987]. Подсчет качественного состава миелокариоцитов (миелограмм) производили на мазках костного мозга, приготовленных на предметных стеклах и окрашенных Азур 2 эозином, в расчете на 400 клеток с последующим перерасчетом в процентах или абсолютных величинах [Лабораторные методы исследования, 1987].
Клонирование клеток-предшественников эритропоэза и грануломоноцитопоэза (культура тканей in vitro) производили, как описано у Е.Д. Гольдберга с соавторами (1992) с некоторыми модификациями. Клетки костного мозга, выделенные из бедренных костей животных в асептических условиях, дважды отмывали от примеси протеинов и помещали в вязкую среду. Взвесь клеток (I х 10 / мл) разливали по 200 мкл в пластиковые планшеты и инкубировали при 37С, 100% влажности и 5% содержании углекислого газа. На третьи сутки подсчитывали число эритроидных колоний, содержащих не менее 40 клеток, на 7 сутки - число гранулоцитарно-макрофагальных колоний. О влиянии гумитона на желудочно-кишечный тракт судили по противоязвенной активности исследуемого препарата, изменении моторики ЖКТ и анальгезирующей активности. Исследование противоязвенной активности гумитона проведено с использованием 5 экспериментальных моделей. Перед воспроизведением экспериментальных язв желудка животных лишали пищи за 24 часа или 48 часов в зависимости от модели язвообразования. В конце экспериментов животных умерщвляли методом дислокации шейного отдела позвоночника, желудки извлекали, вскрывали по малой кривизне, промывали холодным физиологическим раствором и макроскопически с помощью лупы при ярком освещении определяли число и площадь деструкции, которые дифференцировали на точечные (менее 1 мм), крупные (более 1 мм) и полосовидные. Учет язвенных поражений проводили по схеме, предложенной Г.В. Оболенцевой и Я.И Ходжай [Оболенцева и др., 1974]. Подсчитывали среднее количество изъязвлений на одно животное в группе (степень изъязвления), процент животных с язвами. Индекс Паулса определяли как интегральный показатель количества деструкции по формуле:
Противоязвенную активность препаратов определяли как отношение индекса Паулса в контрольной группе к индексу Паулса в опытной группе. Исследуемое средство считали активным, если противоязвенная активность составляла 2 и более единиц [Pauls F. et al., 1947]. Гумитон вводили мышам в эффективной дозе 100 мг/кг. Эффективная доза для крыс с учетом специальных коэффициентов по таблицам Freireich Е. J. (1966) составила 50 мг/кг. В качестве эталонных препаратов использовали пелоидин и адаптоген элеутерококк. В своих исследованиях были использованы 5 моделей язвообразовапия. Среди быстровоспроизводимых «острых» экспериментальных язв модель «стресс-язвы» является наиболее адекватной, так как в механизме ее возникновения ведущее значение имеет нейрогуморальный фактор [Заводская, Морева, 1981]. Экспериментальных животных (мышей) стрессировали посредством подвешивания за шейную складку на 22 часа [Добряков, 1978]. В результате частичной иммобилизации у животных развивалось язвенное поражение слизистой оболочки желудка. Животных эвтаназировали посредством дислокации шейного отдела позвоночника, подсчитывали количество язв на поверхности слизистой оболочки желудка. Исследуемые препараты вводили в течение 6 дней до начала эксперимента, седьмое введение осуществляли за 1 час до подвешивания. При введении резерпина. Резерпин в ульцерогенной дозе вызывает у животных образование язв желудка, микроскопически весьма напоминающих деструктивные изменения слизистой оболочки у больных язвенной болезнью [Барнаулов и др., 1983]. Опыты проведены на 46 мышах-самцах линии СВА. Профилактический курс природных препаратов (гумитона и пелоидина) составлял 7 введений. Резерпин вводили орально в дозе 15 мг/кг в 5% растворе диметилсульфоксида (ДМСО) двукратно с интервалом 4 часа. Эвтаназию животных осуществляли через 20 часов после последнего введения резерпина. Интервал между введениями резерпина и природных препаратов составлял 30 мин.
Исследование состава препарата гумитон и его токсикологических свойств
В исследованиях состава препарата установлено, что добавка кормовая гуминовая из торфа гумитон содержит (в процентах): 1,60±0,01 сухого вещества, 1,04±0,01 гуминовых кислот, 0,32±0,01 фульвокислот. Реакция среды 8,71±0,01. Бактериальная обсемененность отсутствует. Массовая доля элементов в мг/кг составляет: железа - 66, кальция - 83, меди - 0,78-0,79, цинка- 0,49, марганца - 1,18. В препарате определено 16 аминокислот из 20 существующих, включая семь незаменимых (табл. 3). Общее содержание незаменимых аминокислот составило 35% от суммы всех аминокислот. В сухом гум итоне содержится витаминов в мг/кг: сумма каротин оидов - 7,54; Е (d-токоферол) - 5,93; Bt (тиамин) - 0,98; В2 (рибофлавин)- 3,53; В3 (пантоте-новая кислота) - 2,83; никотиновая кислота - 9,65; В6 (пиридоксин) - 1,03; Вс
Методом ИК-спектроскопии [Методы количественного органического элементного микроанализа, 1987] подтверждено наличие в гумитоне таких активных групп, как -COO , -СООН, -ОН, NH2, NH3+, -ОО, которые могут присутствовать в органических соединениях типа карбоновых кислот, фенолов, аминокислот, солей органических кислот, как наиболее вероятных соединений, выделяемых из торфа при его щелочном гидролизе. В связи с тем, что гумитон представляет собой, прежде всего, аммонийные соли гуминовых и фульвокислот, в его ИК-спектрах наблюдаются полосы валентных колебаний не свободных карбоновых кислот, а их аммониевых солей и комплексов с двух- и трехвалентными катионами типа Са, Mg, Fe, которые в небольших количествах присутствуют как в исходных торфах, так и в щелочных экстрактах из них.
Присутствие органических кислот в гумитоне подтверждается проявлением характерных для карбоксилат-ионов полос поглощения в области частот: 1640 см"1 vacmi. (с.) и 1410 см"1 vcl1!l1. (с). Наличие спиртов подтверждается следующими полосами поглощения: v (ОН) (с.) в области 3400-3500 см 1, v (С-О) (ср.) в области 1050 см"1, 5 (ОН) (ел.) в области 1250-1300 см"1. При этом сильное смещение полосы поглощения в область меньших частот (примерно на 150-200 см 1) относительно стандартных значений (3615-3635 см"1) свидетельствует о проявлении межмолекулярной водородной связи гидроксильнои группы между спиртами, а также с молекулами воды. О присутствии в гумитоне аминосоединеиий в виде аминов и аминокислот свидетельствуют полосы поглощения v (N-H) (с.) в области частот 3100-3300 см"1, группа полос v (C-N) (ср.) в области 1050-1250 см 1, 5 (N-H) (ел.) в области 1450-1500 см 1 и широкая полоса средней интенсивности в области 400-900 см"1. Смещение валентных колебаний v (N-H) в область низких частот примерно на 100-200 см" подтверждает участие аминогруппы в межмолекулярных водородных связях. Благодаря присутствию окислителя в реакционной среде при получении гумитона промежуточные продукты окисляются до гуминовых, карбоно-вых, аминокислот. Об этом свидетельствует увеличение соотношения карбоксильных групп к фенольным до 0,94 в гумитоне по сравнению с 0,53 в гу-мате натрия, полученном из того же самого сырья методом щелочного гидролиза без окислителя. Возрастает и абсолютное содержание кислых групп в гумитоне (метод потенциометрического титрования [Современные методы исследования, 1984]): 4,8 мг-экв/г карбоксильных групп и 5,1 мг-экв/г сухого вещества - фенольных гидроксилов, что, соответственно, в 5,3 и 3 раза превышает их содержание в гумате натрия.
Анализ состава гумитона позволяет предположить, что применение его на животном организме может влиять на биосинтетические и энергетические процессы. Поэтому в дальнейших исследованиях мы попытались изучить его токсикологические свойства. Для изучения острой токсичности препарата гумитон вводили в дозах 2000 и 5000 мг/кг. В течение двух недель после введения каких-либо проявлений неблагоприятного воздействия препарата на организм выявлено не было. У отдельных крыс, получавших препарат в дозе 5000 мг/кг, наблюдали расстройства функции желудочно-кишечного тракта, что может быть связано со значительным объемом вводимой жидкости. Согласно ГОСТ 12.1.007-76, регламентирующим классификацию веществ по степени их опасности, препарат гумитон может быть отнесен к 4 группе - «Малотоксичные вещества» (величина ЛД5о при введении через рот свыше 1000 мг/кг). В обширной программе проверки безвредности любого нового лечебного препарата или лекарственной формы, включающей определение острой и хронической токсичности, изучения различных физиологических функций организма, патогистологических исследований органов и др., особое место отводится проверке влияния препарата на тератогенные и эмбриотоксичс-ские свойства. В результате проведенных исследований установлено, что гумитон при введении его в различные сроки беременности в использованных дозах не меняет внешнего вида и поведения животных. Введение препарата не оказало влияния на распределение родившихся животных по полу. Не отмечено также изменений пред- и постим плантационный период: число желтых тел, мест имплантации и живых плодов у подопытных животных не отличались от контрольных величин. Изучаемый препарат не вызывал появления уродств, не приводил к увеличению количества плодов с патологическими нарушениями внутренних органов, не оказывал влияния на процессы формирования скелета. Результаты исследований показали, что введение препарата даже в дозе 500 мг/кг в течение всего срока беременности существенно не влияло на внешний вид, поведение и динамику массы крыс. Крысята родились в срок, с нормальной массой. У подопытных животных на 30 и 60-ый день после рождения отмечалась несколько большая масса тела по сравнению с контролем . Не было выявлено каких-либо различий при изучении показателей становления двигательной активности, формирования сенсорно-двигательных рефлексов, поведения крысят в условиях «открытого поля», способности к обучению и памяти. Способность крысят к избавлению от стресс-ситуации в опытной группе, также, как и в контрольной не была нарушена.
Состояние желудочно-кишечного тракта в условиях применения препарата гумитон
В предварительных исследованиях по изучению стресс-регулирующей активности гумитона было установлено, что повышение резистентности организма в стрессовой ситуации под действием данного препарата обусловле но его защитным действием на ЖКТ. Поэтому были проведены более полные исследования состояния ЖКТ при стрессе.
В настоящее время доказана роль стресса как главного или вспомогательного фактора язвенных поражений слизистой желудка [Меерсон, 1981]. Объединяющим началом множественности причин и механизмов возникновения и формирования язвенной болезни принято считать дисадаптоз, как процесс, характеризующийся нарушением функционального состояния центральной нервной системы, расстройством нервно-корковых взаимоотношений, дистонией вегетативной нервной системы в сочетании с гормональной дисфункцией. Препарат сравнения экстракт элеутерококка относится к группе адаптогенов - веществ растительного происхождения, обладающих малоспецифическим общетонизирующим воздействием на функции ЦНС, эндокринную регуляцию, обменные процессы и повышающих адаптацию организма к неблагоприятным условиям. Иммобилизационный стресс (подвешивание за шейную складку) вызывал образование изъязвлений в слизистой оболочке желудка, обусловленное изменениями нейрогуморального статуса организма. Введение экстракта элеутерококка в 1,4 раза снизило количество язв, но не изменило количество животных с язвенными поражениями, поэтому противоязвенная активность невелика (табл. 8). Профилактическое введение гумитона, в отличие от экстракта элеутерококка, позволило снизить как количество мышей с язвенными поражениями (с 83% в контроле до 45% в опытной группе), так и количество язв на одно животное (в 3,5 раза). Подсчет индекса Паулса и определение противоязвенной активности подтвердили высокую эффективность препарата по отношению к процессу язвообразования; показатель противоязвенной активности превышал 6 единиц. Таблица 8 - Сравнительная оценка влияния гумитона и экстракта элеутерококка на язвообразование в слизистой оболочке желудка при стрессе у мышей-самцов линии Balb/c Группа наблюдения Количество животных вгруппе Количествоживотных сязвами, % Количествоязв на одноживотное Индекс Паулса Противоязвеннаяактивность, ед. Таким образом, препарат гумитон проявляет выраженное гастрозащит-ное действие на модели иммобилизационного стресса. Выявленный эффект, с учетом данных литературы, может быть связан с влиянием препарата на регулирующие системы и, в частности, регулирующим неироэндокринные процессы [Меерсон, 1981].
Исследование влияния гумитона на развитие «острого» язвенного дефекта слизистой желудка проводили на модельных системах, отражающих различные этиопатогенетические факторы развития язвенного процесса: на фоне введения резерпина, ацетилсалициловой и уксусной кислот, при перевязке пилорической части желудка (по Н. Shay). В качестве препарата сравнения был выбран пелоидин (экстракт из иловой лечебной грязи)- биогенный стимулятор, применяемый в медицинской практике при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки и наиболее близкий к гумитону по составу. Предполагают, что образование биологически активных веществ в лиманных грязях и торфе обусловлено вымершей микрофлорой и микрофауной. Биогенные стимуляторы способны при введении в организм оказывать стимулирующее влияние и ускорять процессы регенерации [Машковский, 1991].
Образование язв при резерпиновой модели обусловлено тем, что применение данного препарата способствует истощению депо катехоламинов, повреждению энерговоспроизводящих систем клеток, что в конечном итоге приводит к нарушению состояния трофики желудочной стенки и развитию язвенных деструкции [Барнаулов и др., 1983]. При введении резерпина мышам контрольной группы в 89% случаев возникали язвенные дефекты слизистой желудка, индекс Паулса - 4,17 (табл. 9). Препарат сравнения пелоидин на фоне введения резерпина не проявил противоязвенного действия. Применение гуминового препарата существенно уменьшило выраженность язвенного процесса: отсутствие язв отмечено у 67% животных, степень изъязвления снизилась в 9 раз, площадь изъязвления в 12 раз по сравнению с контролем. Полностью отсутствовали крупные и полосовидные язвы, а число точечных язв уменьшилась в 8 раз. Противоязвенная активность гумитона на модели резерпинового повреждения желудка оказалась крайне высока и составила 23 единицы (напомним, что препарат считают активным, если противоязвенная активность равна 2 и более единицы). Таким образом, препарат гумитон благоприятно влиял иа трофику желудочной стенки и, очевидно, устранял нарушения энергетического обмена, вызванного как нейрогенным повреждением, так и резорбтивным повреждением химического ульцерогена.
