Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 14
1.1. Структура селезенки и ее морфогенез после воздействия на организм иммунотропных средств 14
1.2. Структура тимуса и ее морфогенез после воздействия на организм иммунотропных средств 34
2. Материал и методы исследования 58
3. Микроструктура белой пульпы селезенки и тимуса мышей в норме 67
3.1. Микроструктура белой пульпы селезенки мышей в норме 77
3.2. Микроструктура тимуса мышей в норме 84
4. Морфогенез белой пульпы селезенки и тимуса мышей после введения им терапевтических доз полиоксидония 85
4.1. Морфогенез белой пульпы селезенки мышей после внутрибрюшинного введения им терапевтических доз полиоксидония 121
4.2. Морфогенез тимуса мышей после введения им терапевтических доз полиоксидония 122
5. Морфогенез белой пульпы селезенки и тимуса мышей после внутрибрюшинного введения иммунизирующих доз вакцины гриппол 146
5.1. Морфогенез белой пульпы селезенки мышей после введения им иммунизирующих доз вакцины гриппол 147
5.2. Морфогенез тимуса мышей после введения им иммунизирующих доз вакцины гриппол 185
6. Обсуждение результатов собственного исследования (межорганные взаимосвязи в строении селезенки и тимуса мышей в норме и морфогенез этих органов при введении животным полиоксидония и иммунизирующих доз вакцины гриппол) 210
7. Выводы 240
8. Литература 277
- Структура селезенки и ее морфогенез после воздействия на организм иммунотропных средств
- Микроструктура белой пульпы селезенки и тимуса мышей в норме
- Морфогенез тимуса мышей после введения им терапевтических доз полиоксидония
- Морфогенез белой пульпы селезенки мышей после введения им иммунизирующих доз вакцины гриппол
Введение к работе
1. Обзор литературы 14
1.1. Структура селезенки и ее морфогенез после воздействия на
организм иммунотропных средств 14
1.2. Структура тимуса и ее морфогенез после воздействия на
организм иммунотропных средств 34
Материал и методы исследования 58
Микроструктура белой пульпы селезенки и тимуса
мышей в норме 67
3.1. Микроструктура белой пульпы селезенки
мышей в норме 77
3.2. Микроструктура тимуса
мышей в норме 84
4. Морфогенез белой пульпы селезенки и тимуса
мышей после введения им терапевтических доз полиоксидо-
ния 85
4.1. Морфогенез белой пульпы селезенки мышей после
внутрибрюшинного введения им терапевтических доз
полиоксидония 121
4.2. Морфогенез тимуса мышей после введения
им терапевтических доз полиоксидония 122
5. Морфогенез белой пульпы селезенки и тимуса
мышей после внутрибрюшинного введения иммунизирующих
доз вакцины гриппол 146
5.1. Морфогенез белой пульпы селезенки мышей после
введения им иммунизирующих доз вакцины гриппол 147
5.2. Морфогенез тимуса мышей после введения
им иммунизирующих доз вакцины гриппол 185
6. Обсуждение результатов собственного исследования
(межорганные взаимосвязи в строении селезенки и тимуса
мышей в норме и морфогенез этих органов при введении
животным полиоксидония и иммунизирующих доз вакцины гриппол) 210
7. Выводы 240
8. Литература
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Актуальным в иммуноморфологии является изучение структурной организации центральных и периферических органов иммуногенеза при введении в организм иммуномодуляторов нового поколения. Важным представляется знание механизмов действия факторов, интегрирующих тимус и селезенку в единый ансамбль (Cohn М., 1985; Besedovsky Н. et al., 1985). В настоящее время достигнуты существенные успехи в исследовании отдельных органов иммунной системы (Сапин М.Р., 1987; Сапин М.Р., Этинген Л.Е., 1996). Между тем, не ясна взаимосвязь структурных и клеточных процессов в тимусе и селезенке, их временная соподчиненность в норме (Фриденштейн А.Я., Чертков И.Л., 1996; Shen F.W. et al., 1989; Rouse R.V. et al., 1984; Kotani M. et al., 1985; Kampiga J. et al., 1998), при ответе на внешние воздействия и при патологии (Беклемишев Н.Д., 1986; Geldof А.А. et al., 1984; Kamperdijk E.W.A. et al., 1984; Boehmer H. et al., 1991; Palathumpat V. et al., 1998).
Отсутствие в литературе данных о взаимосвязи в строении различных иммунных органов, о межорганных взаимоотношениях в иммунной системе в норме приобретает особое значение в свете проблем использования современных иммунотропных средств (Сапин М.Р., Этинген Л.Е., 1996; Колобов СВ., Ярема И.В., Зайратьянц О.В., 2001) Ключевая роль цитокинов в функционировании иммунной системы давно привлекала внимание исследователей, что позволило разработать на их основе высокоэффективные иммуномодулирующие лекарственные средства (Чеботарев В.Ф., 1989; Besedovsky Н., 1984; Martin J., 1984). В настоящее вре&ія широкое применение нашли методы, направленные на устранение иммунных
нарушений, называемые иммунокоррегируюшей, или иммуномодулируюшей терапией (Дранник Г. Н., 1996; Хаитов Р. М., 2000).
Сравнительно новым в иммунотропной терапии является использование иммуномодуляторов различного происхождения и механизма их действия (Петров Р.В. и с соавт., 1984, 1987; Лазарева Д.Н., Алехин Е.К., 1987; Шальнев Б.В. и с соавт., 1989; Йегер Л., 1990).
Анализ научной литературы показал, что наиболее популярными иммуномодуляторами в России являются пептиды природные (тактивин, тимолин, миолопид), пептиды синтетические (тимоген, иммунофан), липополисахариды бактериальные (пирогенал, продигиозан), протеогликаны бактериальные и их синтетические аналоги (мурамил-дипептид, ликопид и др.), цитокины (рекомбинантные интерлейкины, колониостимулируюшие факторы). Довольно часто к иммуномодулируюшим препаратам относят также интерфероны (человеческий лейкоцитарный интерферон), индукторы интерферонов (циклоферон, ридостин, неовир и др.).
Многочисленными клиническими и иммунологическими методами изучены как достоинства, так и недостатки этих средств (Дранник Г.Н., 1996; Петров Р.В., Лопухин Ю.М., 1998).Так, природные пептиды имеют низкую эффективность в силу того, что их молекулы состоят всего из нескольких аминокислотных остатков и в организме человека они быстро разрушаются, время их жизни исчисляется минутами. Бактериальные липополисахариды и протеогликаны вызывают продукцию воспалительных цитокинов (ИЛ 1, ФИО и др.), что, по мнению., Р.М.Хаитова с соавторами (1999), и определяет их побочные эффекты в иммунотропной терапии. Введение же цитокинов часто сопровождается не только сильнейшими изменениями в иммунной и кроветворной системах, но и серьезными обшетоксическими эффектами. По данным исследований за 1995-1999 годы в Институте иммунологии Минздрава Российской федерации, около 50% пациентов не вырабатывали интерферон в ответ на действие индуктора интерферона ридостина.
Следует заметить, что выше перечисленные факты были получены из работ, где в основном были использованы клинико-функциональные и иммунологические методы исследования (Ширшеев С.В.,1997; Авакян А.Р.,1999; Манько В.М., Мастернак Т.Б., Иванова А.С.,1997; Хаитов P.M., Пинегин Б.А.,1998, 1999, 2000). Практически нет работ, посвященных структурной организации органов иммунной системы и, в частности, тимуса и селезенки в условиях действия на организм иммуномодуляторов нового поколения. Отсутствуют сведения о последовательных динамических изменениях лимфоидных элементов селезенки и тимуса. В связи с этим трудно представить закономерности морфологических изменений в иммунных органах на системном уровне. В научной литературе нет данных о количественных параметрах тканевого соотношения и клеточного состава лимфоидных образований селезенки и тимуса после действия современных иммунотропных лекарственных препаратов. Отсутствие этих данных объясняется недостаточным вниманием исследователей к микроанатомии органов иммуногенеза на фоне все более модернизирующихся методов молекулярных исследований. Кроме того, в условиях клиники селезенка и тимус недоступны для морфологического изучения после иммунокоррегирующих лечебных мероприятий.
Необходимость исследования иммуногенеза на системном и органном уровнях обусловлена тем, что характер распределения, концентрация титров антител различного класса в сыворотке крови и других жидкостях организма не всегда объективно отражает морфологическую картину самих органов иммунной системы.
Актуальность исследования также связана еще с тем, что закономерности морфогенеза иммунных органов в эксперименте после действия иммунотропных средств могут служить критерием эффективности иммунокоррегируюших вмешательств, что важно как для патологов, так и для клиницистов. И, наконец, только полная морфологическая и
?
морфометрическая картина этих органов позволит судить о резервны;, возможностях иммунной системы организма.
Знания об особенностях реакции лимфоидной ткани в селезенке, контролирующей иммунологический состав крови (Mitchinson N.A., 1989), закономерности изменения структуры и цитоархитектоники в ней, а также в тимусе, одном из центральных органов иммуногенеза, позволят значительно расширить понимание регуляторных процессов, объединяющих эти органы в единый ансамбль (Kirkpatrick С.Н., Leech S., 1982; van Rooijen N., 1987), после действия на организм иммуномодуляторов нового поколения.
Цель и задачи исследования
Целью настоящей работы явилось изучение строения селезенки и тимуса мышей в норме и динамики изменений этих органов при введении в организм иммуномодуляторов нового поколения (полиоксидонии и вакцина "гриппол", синтезированная на его основе).
Для достижения цели исследования были поставлены следующие задачи:
1) изучить структурную организацию и клеточный состав компонентов лимфоидной ткани селезенки и тимуса мышей в норме, для сравнительного исследования морфогенеза центральных и периферических иммунных органов после действия иммуномодуляторов нового поколения;
2) изучить структурную организацию и клеточный состав компонентов лимфоидной ткани селезенки и тимуса мышей после воздействия терапевтических доз полиоксидония;
3) изучить структурную организацию и клеточный состав компонентов
лимфоидной ткани селезенки и тимуса мышей после воздействия
иммунизирующих доз вакцины гриппол;
4) провести статистический анализ морфометрических показателей
компонентов лимфоидной ткани селезенки и тимуса мышей в условиях
применения иммуномодуляторов нового поколения;
5) выявить общие закономерности морфогенеза и особенности изменения
структуры и клеточного состава компонентов лимфоидной ткани селезенки и
тимуса мышей после применения иммуномодуляторов нового поколения.
Научная новизне
Получены данные о закономерностях и особенностях структурной организации компонентов лимфоидной ткани селезенки и тимуса мышей в норме для сравнительного изучения морфогенеза при введении в организм иммунотропных веществ.
установлены новые факты, оо оощих закономерностях реакции центральных и периферических иммунных органов (тимуса и селезенки; на введение терапевтических доз полиоксидония и иммунизирующих доз вакцины гриппол. нами впервые показано увеличение числа средних лимфоцитов и оластных форм клеток в центрах размножения лимфоидных узелков селезенки при введении полиоксидония ^ к 14-м суткам) и при введении гриппола (к /-м суткам;, іакже показано увеличение числа малых лимфоцитов и плазматических клеток разной степени зрелости в тимус-зависимых зонах селезенки после введения вакцины гриппол. достоверно установлено увеличение уже на 14-е сутки количества плазматических клеток в тимус-зависимых зонах оелой пульпы селезенки после введения полиоксидония. Затем этот показатель снижался до контрольных значений к JU-м суткам.
Впервые показано, что количество малых и средних лимфоцитов в селезеночных тяжах увеличивается однотипно как при введении полиоксидония, так и гриппола ^достигая наиоольших значении к 14-м суткам;, клеточный состав селезеночных тяжей после введения вакцины гриппол характеризуется также увеличением числа макрофагов и плазматических клеток, начиная с 4-х суток опытов, достигая максимума к 14-м суткам.
ьпервые доказано, что компоненты лимфоидной ткани селезенки после введения терапевтических доз полиоксидония и иммунизирующих доз вакцины гриппол перестраиваются в определенной последовательности, іак,
в обоих случаях уже к 7-м суткам отмечалось увеличение площади, занимаемой белой пульпой. Значения этого показателя к 14-м суткам была максимальной. На 20-е сутки, после введения полиоксидония площадь, занимаемая белой пульпой? селезенки уменьшалась и к 30-м суткам возвращалась к норме. После введения вакцины гриппол (в отличие от полиоксидония) в последующих сроках эксперимента величина этого параметра фактически не менялась и была достоверно выше уровня контрольных групп.
После введения терапевтических доз полиоксидония и иммунизирующих доз вакцины гриппол количество и площади, занимаемые лимфоидными узелками, а также краевой зоной ПАЛМ увеличиваются в 2-2,5 раза, по сравнению с контролем (Р<0,05).
Впервые выявлены закономерности изменения структуры и клеточного состава тимуса после введения терапевтических доз полиоксидония и иммунизирующих доз вакцины гриппол. Установлены временные рамки структурных и клеточных реакций в разных зонах тимуса после воздействия на организм названых реагентов. Эти изменения заключаются, волнообразном увеличении и уменьшении количества средних лимфоцитов, а также бластных форм клеток и макрофагов в субкапсуляной зоне органа. Количество деструктивно измененных клеток увеличивается к 14-м суткам, а к 30-м суткам снижается до уровня контроля.
Клеточный состав внутренней зоны коркового вещества тимуса мышей после введения иммунизирующих доз вакцины гриппол характеризуется волнообразным то увеличением.то уменьшением числа клеток с фигурами митоза и деструктивно измененных клеток. Под действием гриппола количество макрофагов постепенно увеличивается, достигая максимума на 14-е сутки, затем незначительно уменьшаясь и остается постоянным до конца эксперимента.
Впервые выявлены закономерности изменения клеточного состава мозгового вещества тимуса в ответ на действие терапевтических доз полиоксидония и иммунизирующих доз вакцины гриппол. Эти изменения заключаются в увеличении числа малых и средних лимфоцитов (максимальное число их было на 14-е сутки).Количество макрофагов на фоне действия полиоксидония достигало максимальных значении к 14-м суткам, затем, постепенно уменьшаясь к 30-м суткам до уроня контроля. После действия вакцины гриппол аналогичный показатель также был максимальным на 14-е сутки и оставался неизменным до конца опытов (30 суток).
Впервые получены новые данные об изменениях структурных компонентов тимуса, которые выражались в увеличении площадей, занимаемых корковым веществом тимуса. Было отмечено, что после введения терапевтических доз полиоксидония, площадь, занимаемая корковым веществом, на 4-е сутки возрастала и на 14-е сутки достигала максимальных значений. Корково-мозговой индекс равнялся 3,0 + 0,1 (в контроле 2,3±0,2). К 30-м суткам площадь, занимаемая корковым веществом тимуса, приравнивались контрольным значениям. После введения иммунизирующих доз гриппола площадь, занимаемая корковым веществом, вели себя по-другому. Так, если до 14-х суток величина этого показателя увеличивалась, то к 30-м суткам эта площадь, была достоверно большей, чем при контроле.
Научно-практическая ценность работы
Новые данные о динамике структурных и клеточных процессов в селезенке и тимусе после действия на организм иммунизирующих доз вакцины гриппол и терапевтических доз полиоксидония дополняют знания о закономерностях морфогенеза иммунных органов и позволят понять механизм регуляторных процессов, объединяющих эти органы в единый ансамбль.
Исследование межорганных взаимосвязей в иммунной системе при использовании современных иммунотропных средств в иммуноморфологии позволит выработать критерии эффективности современных методов иммунокоррегирующих лечебных мероприятий.
Новые данные о закономерностях структурных преобразований в селезенке и тимусе на фоне действия иммуномодуляторов нового поколения представляют собой модель для дальнейшей разработки способов определения резерва надежности иммунной системы, как основы создания методов их коррекции.
Данные, изложенные в диссертации, могут быть использованы в учебном процессе, курсе лекций по анатомии и экспериментальной иммунологии для студентов медицинских вузов и слушателей ФПКп.
Апробация материалов диссертации
Результаты работы обсуждались на заседаниях кафедры анатомии человека Киргизской государственной медицинской академии (2001, 2002), на заседаниях кафедры анатомии человека Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (2001, 2002). На IV - Международном конгрессе по интегративной антропологии Санкт-Петербург, 23-25 мая, 2002 г. На заседании киргизского общества АГЭ, посвященной 80 - летию К.М.
Акылбекова, г. Бишкек, 2003 г. На III - Международной - научной конференции «Индия и Кыргызстан»: Взаимодействие цивилизаций, посвященной 2200 - летию кыргызской Государственности, г. Ош, 2003 г., на межрегиональной научно-практической конференции, в честь 65-летия образования КГМА, г. Бишкек, 2004 г.
Результаты исследования внедрены в учебный и научный процесс кафедры анатомии человека Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, кафедры анатомии человека Киргизской государственной медицинской академии.
Положения, выносимые на защиту
Динамика структурных преобразований селезенки и тимуса в условиях действия терапевтических доз полиоксидония, а также после введения иммунизирующих доз вакцины гриппол.
Обшие закономерности морфогенеза и особенности изменения структуры и клеточного состава лимфоидной ткани селезенки и тимуса после применения иммуномодуляторов нового поколения.
Структура селезенки и ее морфогенез после воздействия на организм иммунотропных средств
Селезенка является важнейшим органом периферического звена иммунной системы, в задачу которого входит иммунный контроль крови и запуск специфических механизмов защиты в ответ на антигены, поступающие в организм (Радостина Т.Н., Сатюкова Г.С., 1961; Сафаров СЮ. и соавт., 1983; Сапин М.Р., Этинген Л.Е., 1996; Моталов В.Г., 2002; Von Herrath Е., 1958; Tischendorf F., 1969; Lennert К., Harms D., 1970; Brozman M., 1985; Van Rooijen N., 1991). Особая конструкция сосудистого русла селезенки, ее стромы и элементов лимфоидной ткани и их цитотопография отличает селезенку от других иммунных органов (Сапин М.Р., Самойлов М.В., 1988; Сорокин А.П. и соавт., 1989; Сапин М.Р., Моталов ВТ., 2002; Weiss L., 1985; Timens W., 1991).
Селезенка покрыта соединительнотканной капсулой, состоящей из коллагеновых волокон, сети эластических волокон и содержащая фиброциты и миоциты (Баранов В.Н., 1974; Моталов В.Г., 2002; Bargmann W., 1977). От капсулы в паренхиму отходят трабекулы, среди которых различают 3 типа: сосудистые, соединительные и радиальные (Faller А., 1985). Сосудистые трабекулы несут в себе артерии, вены и нервы и входят в паренхиму в области ворот селезенки, образуя трабекулярное дерево. Соединительные трабекулы не содержат сосудов и отходят латерально от сосудистых, укрепляя трабекулярное дерево. Радиальные трабекулы отходят от внутренней поверхности капсулы радиально вглубь к трабекулярному дереву. От капсулы и трабекул в паренхиму селезенки отходят ретикулярные волокна, которые вместе с ретикулярными клетками образуют трехмерную сеть, являющуюся стромальной основой пульпы селезенки (Fujita Т., 1985).
Такая конструкция соединительнотканного остова селезенки позволяет быстро изменять объем органа при сокращении миоцитов капсулы и трабекул и сжимании ретикулярной сети (Blut J., Weiss L., 1981; Hartwig H., Hartwig H.G., 1985; Timens W., 1991), что является морфологической основой резервуарной функции селезенки.
Анатомическое строение селезенки определяется конструкцией ее сосудистого русла, прежде всего характером ветвления артерий (Антипов Е.Е., 1969; Полянкин Н.Я., Федонюк Я.И., 1971; Weiss L., 1985). Селезеночная артерия, войдя в ворота, разветвляется на несколько трабекулярных артерий, расположенных в сосудистых трабекулах (Faller А., 1985). От трабекулярных артерий в пульпу селезенки отходят более мелкие пульпарные артерии, которые окружены периартериальными лимфоидными муфтами (ПАЛМ). На основе этих муфт образуются лимфоидные узелки (Агафонов В.И., Дыгай A.M., 1981; Сапин М.Р., Самойлов В.М., 1988; Моталов В.Г., 2001; Van Ewijk W. et Nieuwenhuis P., 1985; Van den Eertwegh A.J.M. et Claassen E., 1991).
От пульпарной артерии радиально отходят артериолы, которые заканчиваются капиллярами в толще периартериальных лимфоидных муфт и в лимфоидных узелках, в красной пульпе и в краевой зоне, отделяющей периартериальные лимфоидные муфты и лимфоидные узелки от красной пульпы (Snook Т., 1964; 1975; Fujita Т. et al., 1985). Здесь, в краевой зоне, где поток клеток замедлен, начинаются первые межклеточные взаимодействия Т - и В-лимфоцитов и макрофагов (Van den Eertwegh A.J.M. et Claassen E., 1991).
Пульпарная артерия заканчивается пучком "кисточковых" артериол, каждая из которых распадается на 2-3 капилляра. Эти капилляры окружены компактными скоплениями макрофагов, расположенных в тонкой сети ретикулярных волокон и клеток (Blue J. et Weiss L., 1981). Эти скопления известны как эллипсоиды за их форму у некоторых видов животных. Также их называют макрофагально-лимфоидными муфтами (Сапин М.Р., Буланова Г.В., 1988).
В настоящее время уже известны характер тока крови из капилляров в синусы селезенки, характер окончания капилляров в красной пульпе и тип кровотока в органе. В селезенке закрытый тип кровотока и капилляры прямо открываются в синусы (Сапин М.Р., Моталов В.Г., 2002; Fujita Т. et al., 1985; Weiss L., 1985).
Мелкие вены собирают кровь от элементов белой и красной пульпы и, соединясь с венулами, дренирующими венозные синусы, образуют трабекулярные вены, которые, сливаясь в области ворот, формируют селезеночную вену (Bargmann W., 1977).
Красная пульпа селезенки выполняет функцию удаление из кровотока чужеродных веществ (Шарецкий А.Н. и соавт., 1979; Сафаров СЮ. и соавт., 1983; Timens W., 1991). Она состоит из мякотных тяжей селезенки (тяжей Бильрота), ретикулярная строма которых заполнена клетками крови, и системы синусов, которые расположены между тяжами (Miyjshi М. et al., 1970; BrozmanM., 1985).
Основу селезеночных тяжей образует сеть ретикулярных волокон и клеток (Fugita Т. et al., 1985). В петлях этой сети располагаются эритроциты, нейтрофилы, мегакариоциты, макрофаги, лимфоциты. Среди лимфоцитов, по данным Т. Witte et al., (1989), значительное место занимает субпопуляция киллерных клеток, способных не только лизировать опухолевые мишени и зараженные вирусами клетки (Hercend Т., Schmidt R.E., 1988) но и участвовать в регуляции иммунного ответа (Vykarnan A. et al., 1985) и гемопоэза (Herrmann F. et al., 1987). Стенки венозных синусов образованы слоем эндотелиоцитов веретенообразной формы, поддерживаемый со стороны тяжей прерывистым мембраноподобным материалом, состоящим из ретикулярных волокон, собранных в кольца (Thomas С.Е., 1967). Эти кольцевидные структуры ориентированы перпендикулярно длинной оси синуса и покрыты снаружи цитоплазмой ретикулярных клеток (Brozman М., 1985). Стенки венозных синусов фенестрированы, что позволяет клеткам крови.как проходить в них, так и выходить из синусов (Chen L.T. et Weiss L., 1972). В межэндотелиальных промежутках обнаруживаются также цитоплазматические отростки макрофагов, проникающих в полость синусов (Heusermann U. et Stutte H.J., 1974). Лимфоидный аппарат селезенки обеспечивает антиген-специфический контроль крови и формирует иммунный ответ на чужеродные антигены (Dijkstra CD. et al., 1982). Работы последних лет (Сапин М.Р., Этинген Л.Е., 1996; Сапин М.Р., Моталов В.Г., 2002) рассматривают белую пульпу как совокупность периартериальных лимфоидных муфт, имеющих 2 части: глубокую часть, окружающую центральную артерию, и периферическую часть, с которой связаны лимфоидные узелки. В селезенке крыс и мышей, по данным многих исследователей, в периферической части ПАЛМ располагаются лимфоидные узелки (Veerman A.J.P. et Van Ewijk W., 1975; Dijkstra CD. et Kraal G., 1991). Краевая зона окружает глубокие части периартериальных лимфоидных муфт. Лимфоидные узелки, являются структурой, лежащей на границе с красной пульпой (Kumararatne D.S. et al., 1981).
Микроструктура белой пульпы селезенки и тимуса мышей в норме
Материалом исследования служили препараты селезенки и тимуса, взятые у животных 2-х интактных групп (см. главу "Материал и методы и исследования", табл. 1 и 2). Каждая группа интактных животных в последующем разделены на три подгруппы (в подгруппе по 3- 4 мышки), которые забивались на 4, 14 и 30 сутки после начала эксперимента. После этого определялись масса тела и внутренних органов (селезенки и тимуса), для вычисления коэффициента массы этих органов иммунной системы.
Мы использовали показатели коэффициента массы внутренних органов в нашей работе потому, что они более точно в количественном отношении отражают динамику изменений весовых параметров селезенки и тимуса по ходу экспериментов.
Результаты анализа изменений массы тела и массы селезенки интактных животных показали, что во всех сроках исследований эти величины были одинаковыми. Так, масса тела животных во всех сроках опытов составила в среднем 20,0 грамм, колебаясь в пределах от 19,0 до 21,0 граммов (табл. 7).
Масса селезенки во всех сроках исследований составила 0,090+0,003 грамма, с размахом крайних показателей от 0,084 до 0,099 граммов. Величина коэффициента массы селезенки у интактных животных составила от 0,41% до 0,50% от общей массы тела, в среднем равняясь 0,45±0,020%.
Мы изучили особенности формы и строения элементов белой пульпы селезенки мыши в норме (лимфоидных узелков, периартериальных лимфоидных муфт), их клеточный состав и характер их взаимоотношений между собой и с элементами красной пульпы.
Белая пульпа селезенки мышей представлена хорошо структурированными периартериальными лимфоидными муфтами и лимфоидными узелками, являющимися утолщениями периартериальных лимфоидных муфт. Между этими скоплениями лимфоидной ткани, периартериальными лимфоидными муфтами (ПАЛМ), находится красная пульпа - селезеночные тяжи и венозные синусы. Каждая периартериальная лимфоидная муфта селезенки мышей состоит, из внутренней плотно упакованной части, окружающей пульпарную (центральную) артерию (глубокая часть ПАЛМ) и краевой зоны (периферическая часть ПАЛМ), которая узким поясом окружает со всех сторон центральную часть ПАЛМ, а также лимфоидные узелки (рис. 1).
При морфометрическом исследовании срезов селезенки интактных мышей были выявлены характерные особенности взаимоотношений элементов белой пульпы между собой и с элементами красной пульпы. Белая пульпа занимает на гистотопографических срезах селезенки мыши от 37,1% до 46,0% площади паренхимы органа, в среднем, составляя 41,3±1,9%, тогда как площадь красной пульпы варьирует от 45,2% до 54,4% и составляет, в среднем, 49,6+2,0%. Большая часть белой пульпы приходится на периартериальные лимфоидные муфты, площадь которых на срезах селезенки колеблется от 22,8% до 31,2% от всей площади белой пулпы (в среднем-27,0±1,8%).
У интактных животных лимфоидные узелки на гистотопографических срезах селезенки мыши всегда занимали 1/3 площадь, по сравнению с периартериальными лимфоидными муфтами (в среднем- 14,3±1,5%). Глубокая и периферическая части периартериальных лимфоидных муфт занимают на срезах селезенки близкие по величине площади: 13,2±1,7% площади срезов приходится на периферические части ПАЛМ, 13,8±1,6% -на глубокие части ПАЛМ (рис. 2). Площадь селезеночных тяжей на срезах селезенки варьирует от 20,1% до 28,4%, составляя в среднем 25,3±1,8%. Венозные синусы селезенки занимают на срезах органа почти одинаковую площадь с тяжами (от 20,8% до 27,2, в среднем- 24,3+1,4%). Площадь стромальных элементов на срезах селезенки мыши в норме равнялась 8,8±1,3%, с размахом колебаний от 6,0% до 12,0% (табл. 8). Мы изучили количественные характеристики лимфоидных узелков (общее количество лимфоидных узелков, количество лимфоидных узелков с центрами и без центров размножения) белой пульпы на срезах селезенки мышей в норме (табл. 9)
Морфогенез тимуса мышей после введения им терапевтических доз полиоксидония
Мы установили, что у животных экспериментальной группы весовые характеристики тимуса не зависят от массы тела животных (табл. 25). По нашим данным, после введения полиоксидония подопытным мышам масса тимуса на 4-е сутки составила 0,056±0,002 граммов с колебаниями массы органа в диапазоне от 0,052 гр. до 0,062 гр., что практически совпадало с контрольным весом.
В дальнейшем масса тимуса у экспериментальных животных увеличивалась, и на 7-е сутки после начала опытов величина этого показателя достоверно была выше показателя контрольной группы (Р 0,05). Масса органа в этот период у экспериментальных животных, в среднем, составила 0,058+0,001 грамма (от 0,055 до 0,061гр.), масса тимуса у мышей контрольной группы была, в среднем, 0,054+0,004 грамма (от 0,046 до 0,065гр.).
На 14-е сутки исследования масса тимуса у экспериментальных животных снова уменьшалась и составила, в среднем, 0,054+0,004 грамма (от 0,048 до 0,067гр.). В дальнейшем масса тимуса у подопытных животных после введения полиоксидония продолжала снижается (табл. 25). Минимальной масса тимуса оказалась (у подопытных животных) на 20-е сутки, когда она равнялась, в среднем 0,039+0,002 грамма (от 0,036 до 0,044 гр.). У мышей контрольной группы в этот период величина этого показателя была 0,057±0,002 (от 0,051 до 0,063гр.). К периоду окончания экспериментов (30 сутки) масса тимуса у подопытных мышей снова повышалась и составила, в среднем, 0,065+0,001 граммов, с размахом крайних значений от 0,056 до 0,075 граммов.
Для более достоверной характеристики изменений массы тимуса в определенных временных рамках, мы изучили коэффициент массы органа у мышей, после введения им терапевтических доз полиоксидония (рис. 20).
Коэффициент массы тимуса на 4-е сутки у экспериментальных животных составлял 0,29+0,010, тогда как удельный вес органа животных контрольной группы равнялся 0,28+0,015. К концу первой недели опытов коэффициент массы тимуса у экспериментальных животных увеличивался до 0,31 ±0,013 (в контроле- 0,28+0,030). В последующие сроки исследований (14 сутки) величина этого показателя у подопытных животных снова понижалась и составила 0,28±0,015 (в контроле- 0,25+0,010).
К 20-м суткам исследований коэффициент массы тимуса у животных экспериментальной группы продолжал снижаться и составил 0,20+0,004, что достоверно ниже величины аналогичного показателя (0,28±0,011), чем у животных контрольной группы (Р 0,05). Максимальных значений коэффициент массы тимуса достиг на 30-е сутки, когда этот показатель снова увеличился и составил 0,32+0,017 (рис. 20).
Таким образом, нами установлено, что при введении мышам полиоксидония в терапевтических дозах изменения массы тимуса не зависит от изменений массы тела животных. Кроме того, нами доказано, что под воздействием полиоксидония происходит волнообразное изменение массы тимуса, которое выражается то в ее увеличении (на 7 и 30 сутки), и в ее понижении (на 4,14 и 20 сутки) по ходу экспериментов (рис. 20).
Мы установили характер и последовательность изменений структуры тимуса мыши после введения им терапевтических доз полиоксидония. По нашим данным, уже в первые четверо суток после начала опытов увеличивается площадь, занимаемая корковым веществом тимуса (табл. 26).Так, на 4-е сутки исследований корковое вещество тимуса на срезах органа подопытных мышей составляло, в среднем, 65,5+1,8% (от 60,2% до 68,5%) от общей площади органа, тогда как у контрольных животных этот показатель составил 62,1+1,9% (от 59% до 68,7%). К концу первой недели исследований площадь, занимаемая корковым веществом на срезах тимуса у экспериментальных животных, незначительно снижалась до 64,7+0,8% (в контроле- 61,6+2,0%). Максимальных значений величина этого показателя достигла на 14-е сутки после начала экспериментов (рис. 21). В этот отрезок времени коркрвое вещество тимуса у подопытных животных занимало 68,6±1,3% (от 65,9 до 71,8%) от общей площади срезов органа, что достоверно больше величины аналогичных показателей (61,7±1,3%), выявленных у животных контрольных групп (Р 0,05).
Морфогенез белой пульпы селезенки мышей после введения им иммунизирующих доз вакцины гриппол
Результаты анализа изменений массы тела экспериментальных животных показали, что после введения им иммунизирующих доз вакцины гриппол отмечается небольшое снижение их массы к 4-м и 14-м суткам исследования. Так, если масса тела животных контрольной группы на 4-е сутки, в среднем, была 19,9+0,3 грамм (от 19,0 до 20,9 гр.), то у животных опытной группы масса тела оказалась равной, 17,2±0,5 грамма (от 16,4 до 18,9гр.). К 14-м суткам масса тела животных опытной группы составила 18,1 ±0,6 грамма (от 16,5 до 19,3 гр.), тогда как величина этого показателя животных контрольной группы была равна 19,5±0,3 грамма (от 18,9 до 20,5 гр.). В остальных сроках исследования масса тела животных, как экспериментальных, так и контрольных групп, была примерно одинаковой (табл. 31).
Мы установили, что масса селезенки у животных экспериментальной группы всегда превалировала над весом органа животных контрольных групп (табл. 31). По нашим данным, сразу после введения иммунизирующих доз вакцины гриппол отмечалось повышение массы селезенки, которая на 4-е сутки составила 0,100+0,008 граммов с колебаниями массы органа в диапазоне от 0,084 до 0,116 граммов. У мышей контрольной группы в это время масса органа, в среднем составила 0,089±0,003 граммов (от 0,084 до 0,099 гр.).
На 7-е сутки исследований масса селезенки подопытных мышей немного снижалась и составила 0,092±0,01 грамм (в контроле- 0,084±0,006 гр.), на 14-е сутки этот показатель был равен 0,098+0,01 грамм (в контроле-0,091+0,003).
Достоверно значимых величин масса селезенки экспериментальных животных достигла на 20-е и 30-е сутки исследований (Р 0,05). Так, масса органа на 20-е сутки у подопытных мышей была равна 0,134±0,01 грамма (от 0,110 до 0,162 гр.), величина этого показателя у животных контрольной группы составила 0,089+0,002 грамм (от 0,082 до 0,094 гр.). На 30-е сутки исследования масса селезенки у экспериментальных мышей была равна 0,144±0,03 грамма (от 0,086 до 0,220 гр.), масса органа у животных контрольной группы составила 0,087±0,03 грамма (от 0,080 до 0,220 гр.).
Для более точного выявления весовых характеристик селезенки животных, которым вводились вакцинирующие дозы гриппола, мы использовали показатели коэффициентов массы органа по отношению к массе тела (рис. 29). При этом показатель массы органа делился на показатель массы тела животного, полученную разницу в дальнейшем умножали на сто. Мы использовали коэффициенты массы органов в нашей работе потому, что они более точно в количественном отношении отражают динамику весовых показателей органов и позволяют достоверно судить об их изменениях по ходу экспериментов (рис. 29).
Коэффициент массы селезенки на 4-е сутки опытов у экспериментальных животных составил 0,59+0,06, тогда как удельный вес органа животных контрольной группы равнялся 0,45±0,019. К концу первой недели исследований коэффициент массы селезенки у экспериментальных групп животных снижался и составил 0,46+0,07 (в контроле- 0,43+0,017). На 14-е сутки величина этого показателя немного возрастала- 0,55+0,09 (в контроле-0,46+0,017).
Достоверно значимых величин коэффициенты массы селезенки достигли к 20-м и 30-м суткам исследований (Р 0,05). Так, на 20-е сутки коэффициент массы органа подопытных мышей, в среднем составил 0,66±0,05 (в контроле-0,44±0,015). Максимальным этот показатель оказался на 30-е сутки исследований, когда он был равен 0,71+0,13 (в контроле- 0,42+0,012).
Таким образом, нами установлено, что при введении мышам иммунизирующих доз вакцины гриппол отмечается небольшое снижение массы тела животных на 4-е и 14-е сутки экспериментов. Кроме того, нами доказано, что после иммунизации мышей вакциной гриппол происходит постепенное возрастание массы селезенки, максимального веса которая достигает к 30-м суткам исследований (рис. 29).
Мы установили характер и последовательность изменений структуры, возникающих в белой пульпе селезенки мыши после введения им иммунизирующих доз вакцины гриппол. По нашим наблюдениям, уже на 4-е сутки после введения гриппола увеличивается площадь, занимаемая белой пульпой селезенки. Так, в этот период площадь, занимаемая белой пульпой на срезах селезенки, в среднем составила 42,7±1,9% (от 37,8% до 47,0%), тогда как в контрольной группе величина этого показателя равнялась 41,6±1,9%, с размахом крайних значений от 37,2% до 46,1% от общей площади паренхимы органа (табл. 32). В последующих сроках экспериментов площадь, занимаемая белой пульпой селезенки у подопытных животных, постепенно увеличивалась (рис. 30). Максимальной величины этот показатель достиг на 14-е сутки исследований. В этот период площадь, занимаемая белой пульпой на срезах селезенки, колеблется от 45,5% до 52,8% (в среднем- 49,1±1,5%), что достоверно больше средних величин (41,7+1,5%) аналогичного показателя контрольной группы (Р 0,05).
