Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1 Современное представление о биологических ритмах 11
1.2 Эпифиз и организация биологических ритмов 14
1.3 Роль биологически активных веществ эпифиза в жизнедеятельности организма 20
1.3.1 Гормон эпифиза мелатонин 20
1.3.2 Роль пептидов эпифиза в регуляции гомеостаза 27
1.4 Пространственно-временная организация
органов иммунной системы 31
ГЛАВА 2. Материал и методы 38
ГЛАВА 3. Результаты собственного исследования 50
3.1 Динамика структурно-временной организации трахеобронхиальных лимфатических узлов интактных животных 50
3.1.1 Герминативный центр лимфатического фолликула 50
3.1.2 Корона лимфатического фолликула 56
3.1.3 Паракортикальная зона 58
3.1.4 Мякотные тяжи 59
3.2 Динамика структурно-временной организации трахеобронхиальных лимфатических узлов эпифизэктомированных животных 62
3.2.1 Герминативный центр лимфатического фолликула 62
3.2.2 Корона лимфатического фолликула 66
3.2.3 Паракортикальная зона 67
3.2.4 Мякотные тяжи 69
3.3 Динамика структурно-временной организации трахеобронхиальных лимфатических узлов эпифизэктомированных животных после введения эпиталамина 72
3.3.1 Герминативный центр лимфатического фолликула 72
3.3.2 Корона лимфатического фолликула 76
3.3.3 Паракортикальная зона 78
3.3.4 Мякотные тяжи 80
3.4 Динамика структурно-временной организации трахеобронхиальных лимфатических узлов эпифизэктомированных животных после введения мелатонина 83
3.4.1 Герминативный центр лимфатического фолликула 83
3.4.2 Корона лимфатического фолликула 88
3.4.3 Паракортикальная зона 89
3.4.4 Мякотные тяжи 91
3.5 Влияние эпифизэктомии и введения эпиталамина или мелатонина на величину площади лимфоидной ткани трахеобронхиальных лимфатических узлов 95
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 100
Выводы 114
Список литературы 116
Приложения 132
- Эпифиз и организация биологических ритмов
- Герминативный центр лимфатического фолликула
- Герминативный центр лимфатического фолликула
- Влияние эпифизэктомии и введения эпиталамина или мелатонина на величину площади лимфоидной ткани трахеобронхиальных лимфатических узлов
Введение к работе
Актуальность работы. Важнейшая особенность иммунной системы - ее высокая динамичность, обусловленная непрерывностью протекания процессов пролиферации, дифференцировки, миграции, кооперации и апоптоза лимфоцитов. Физиологические процессы в иммунной системе достаточно автономны, но, тем не менее, модулируются влияниями нервной и эндокринной систем, а также факторами внешней среды и параметрами внутреннего метаболизма. Динамичность иммунной системы предполагает необходимость ее изучения в пространственно-временном аспекте (Ляшко О.Г., 1986; Смирнова Т.С., Ермолина Л.В., 1988; Бородин Ю.И. и др., 1992; Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2002). На это указывают, в частности, литературные данные о циркадных вариациях содержания различных клеточных типов в лимфоидных органах и крови экспериментальных животных и человека, пролиферации лимфоцитов, уровня гуморального иммунного ответа, а также суточные вариации продукции цито-кинов-интерлейкинов, интерферона и фактора некроза опухоли (Анохин Ю.Н., Ярилин А.А., 1980; Бородин Ю.И. и др., 1992; Литвиненко Г.И. и др., 2000; Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2002; Cardinali D.P. et al., 1997; Castrillon P. et al., 2000).
Структурно-временная организация иммунной системы представляет собой систему биоритмов с определенными взаимоотношениями как внутри иммунной системы, так и на уровне межсистемных взаимосвязей с нервной, эндокринной и другими системами (Reiter R.J., 1983; Suzuki S. et al., 1997; Conti A., Maestroni G.J., 1998; Bulian D., Pierpaoli W., 2000).
В обеспечении фотопериодического контроля суточных и сезонных биоритмов различных функций организма важная роль принадлежит эпифизу (Слепушкин В.Д., Пашинский В.Г., 1982; Арав В.И. и др., 1996; Сле-сарев СМ. и др., 2002; Pierpaoli W., Regelson W., 1994). В настоящее время внимание исследователей привлекает роль эпифиза и продуцируемых им
биологически активных веществ в регуляции суточных и сезонных биологических ритмов репродуктивной и иммунной систем, антистрессовой и антиоксидантной защите (Анисимов В.Н. и др., 2000; Хавинсон В.Х. и др., 2002; Арав В.И. и др., 2003).
Эпифиз продуцирует гормон мелатонин и комплекс биологически активных олигопептидов. К настоящему времени более обстоятельно изучена физиологическая роль первого. Биологически активные пептиды эпифиза привлекли внимание исследователей лишь в последнее время. Эпи-физарный контроль циркадианного ритма выработки гормонов периферическими железами может обеспечиваться через непосредственную активацию мелатониновых рецепторов в железах, и опосредованно, путем первичной модуляции функции гипоталамических центров (Хелимский A.M., 1969; Анисимов В.Н. и др., 1995, 2000).
В недостаточно изученных в целом механизмах эпифизарной регуляции функций иммунной системы сохраняют актуальность вопросы взаимодействия мелатонина и пептидных продуктов эпифиза как между собой, так и с другими регуляторными звеньями, опосредующими их действие. Особый научный интерес представляет влияние биологически активных веществ эпифиза на процессы пролиферации, дифференцировки и миграции клеток лимфоидного ряда.
Нельзя не отметить и то обстоятельство, что результаты изучения суточной динамики циркадианной ритмики функций органов иммунной системы отличаются противоречивостью. Во многом это обусловлено тем, что длительность большинства экспериментов не превышала одного периода ритма, а выбор доз и времени введения биологически активных веществ эпифиза существенно различался. Противоречивость данных о суточной динамике обуславливалась, вероятно, также разной продолжительностью темнового и светового периодов, и сдвигами времени их смены. Объективизация изучения эпифизарной регуляции циркадианных ритмов требует
унифицирования условий проведения экспериментов и исследования циркадианной динамики на протяжении не менее двух периодов ритма.
Одной из областей использования биологически активных веществ эпифиза является коррекция нарушений иммунной системы, для осуществления которой используются как мелатонин, так и безмелатониновый экстракт олигопептидов эпифиза (Хавинсон В.Х. и др., 2001; Fornas О. et al., 2000; Labunets I.F., 2002). Положительные результаты экспериментальных работ служат основанием для использования биологически активных веществ эпифиза в клинике.
Таким образом, непосредственное участие эпифиза в формировании циркадианной ритмичности функций органов иммунной системы, с одной стороны, и очевидная ограниченность представлений о путях его влияния, с другой, указывают на актуальность изучения эпифизарных механизмов регуляции пространственно-временной организации органов иммунной системы.
Цель и задачи исследования. С учетом изложенного целью настоящей работы явилось установление роли эпифиза в структурно-временной организации трахеобронхиальных лимфатических узлов белых крыс.
Достижение цели основывалось на решении следующих задач:
1) изучить суточную динамику митотического индекса (МИ) клеток герминативного центра лимфатического фолликула и содержание клеток различных типов в герминативном центре и короне лимфатического фолликула, паракортикальной зоне, а также мякотных тяжах лимфатических узлов у интактных животных;
2) изучить суточную динамику МИ клеток герминативного центра лимфатического фолликула и содержание клеток различных типов в герминативном центре и короне лимфатического фолликула, паракорти
кальной зоне и мякотных тяжах лимфатических узлов у эпифизэкто-мированных животных;
3) исследовать влияние введения эпифизэктомированным белым крысам олигопептидов эпифиза на суточную динамику МИ клеток герминативного центра, а также содержание клеток различных типов в герминативном центре и короне лимфатического фолликула, паракорти- кальной зоне и мякотных тяжах лимфатических узлов;
4) исследовать влияние введения мелатонина эпифизэктомированным белым крысам на суточную динамику МИ клеток герминативного центра, а также содержание клеток различных типов в герминативном центре и короне лимфатического фолликула, паракортикальной зоне и мякотных тяжах лимфатических узлов;
5) изучить влияние эпифизэктомии и последующего введения мелатонина и олигопептидов эпифиза на площадь структурных компонентов лимфатических узлов.
Научная новизна. В работе впервые проведено комплексное изучение дифференцированного воздействия мелатонина и комплекса биологически активных пептидов эпифиза на ритмичность процессов пролиферации, дифференцировки и миграции клеток лимфоидного ряда. Впервые установлена ведущая роль эпифиза в формировании циркадианного ритма пролиферации, дифференцировки и миграции клеток в периферических органах лимфоидного кроветворения, в осуществлении которой принимает участие как гормон эпифиза мелатонин, так и его биологически активные олигопептиды.
Научно-практическая значимость работы. Результаты работы расширяют и углубляют представление о временной организации органов лимфоидного кроветворения. Установленное в ходе диссертационного ис
следования участие пептидов эпифиза в формировании циркадианного ритма пролиферации, дифференцировки и миграции клеток лимфоидного ряда обосновывает необходимость специального изучения механизмов взаимодействия мелатонина и пептидов эпифиза в регуляции циркадиан-ных ритмов различных функций организма. Полученные результаты могут послужить основанием для разработки методик совместного использования мелатонина и пептидов эпифиза в коррекции структурно-функциональных нарушений органов иммунной системы.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Эпифизэктомия обуславливает исчезновение циркадианных ритмов МИ клеток герминативного центра лимфатического фолликула и динамики содержания клеток лимфоидного ряда в герминативном центре и короне лимфатического фолликула, паракортикальной зоне и мякотных тяжах лимфатических узлов, а также приводит к гипертрофии лимфоидной ткани.
2. Биологически активные пептиды эпифиза, вводимые эпифизэктоми-рованным животным, восстанавливают циркадианную ритмичность суточной динамики МИ и содержания клеток различных типов во всех зонах лимфатических узлов, а также устраняют гипертрофию лимфоидной ткани.
3. Введение эпифизэктомированным животным мелатонина обуславливает восстановление циркадианных ритмов суточной динамики МИ и содержания клеток различных типов во всех зонах лимфатических узлов, а также нормализует степень развития лимфоидной ткани.
Апробация работы. Основные положения и результаты исследования представлены на 7-ой Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2003), на II Всероссийской на
учно- практической конференции молодых ученых и студентов по медицине (Тула 2003), на V Международной конференции «Математическое моделирование физических, экономических, технических, социальных систем и процессов» (Ульяновск, 2003), на Международной научно- практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», (Ульяновск, 2003), на Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях» (Оренбург, 2003), на региональной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современного здравоохранения и экологии» (Ульяновск, 2003), на научной конференции «Актуальные проблемы физиологии человека и животных» (Ульяновск, 2004), на V общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004), на XIX съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 131 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственного исследования и их обсуждения, выводов. Список литературы содержит 224 работы, в том числе 114 отечественных и ПО иностранных. Работа иллюстрирована 33 рисунками (фотографии, графики), 5 таблицами и 16 приложениями.
Эпифиз и организация биологических ритмов
Эпифиз представляет собой вырост крыши III желудочка мозга, покрытой соединительнотканной капсулой, от которой внутрь отходят тяжи, разделяющие орган на дольки. Последние содержат пинеалоциты и гли-альные клетки. Среди пинеалоцитов различают более крупные светлые и мелкие темные клетки. Особенностью сосудов эпифиза является, по-видимому, отсутствие тесных контактов между эндотелиальными клетками, в силу чего гематоэнцефалический барьер в этом органе оказывается несостоятельным. Большинство нервов эпифиза представлено волокнами верхних шейных симпатических ганглиев (Касмамбетова Ш.К., 1991). Активность эпифиза зависит от периодичности освещения. При освещенности синтетические и секреторные процессы в нем ингибируются, а в темноте усиливаются. Световые импульсы воспринимаются рецепторами сетчатки и поступают в верхние шейные симпатические ганглии, дающие начало нервам шишковидной железы. Холинергическая регуляция активности эпифиза подтверждается присутствием в этом органе ацетилхолинэ-стеразы. Зачаток эпифиза у эмбриона человека появляется на 6-7-й недели беременности, первые признаки функционирования обнаружены на 3-м месяце беременности. В период новорожденное и раннего детства секреторная активность эпифиза нарастает, а в возрасте 10-40 лет достигает максимального выражения, после чего наступает ее спад (Чазов Е.И., Иса-ченков В.А., 1974; Хелимский A.M., 1969; Семичева Т.В., Гарибашвили А.Ю., 2000).
Эпифиз продуцирует биологически активные вещества двух биохимических типов - биогенные амины (мелатонин и серотонин) и регулятор-ные пептиды (нейротензин, ВИП, субстанция Р, аргинин-вазотоцин и др.). В эпифизе в течение суток изменяется соотношение гормонально-активных веществ: днем преобладает серотонин, ночью - мелатонин (Хелимский A.M., 1969). Содержание норадреналина в эпифизе также характеризуется циркадианной ритмичностью с акрофазой в конце темнового периода. Акрофаза количества одного из пептидов эпифиза аргинин-вазотоцина приходится на дневное время суток (Arendt J., 1995; Isobe У. et al., 1995). Циркадианный ритм продукции эпифизом биологически активных веществ «задается» супрахиазматическими ядрами гипоталамуса (СХЯ). Это функциональное взаимодействие убедительно доказано в серии морфологических и физиологических исследований (Zhou X.J. et al., 2000; Imundo J. et al., 2001). Главным афферентным входом в эпифиз служит симпатический нерв. Получая информацию о режиме освещения от сетчатки по нервному пути (зрительный нерв, ретиногипоталамический тракт, супрахиазматические ядра, паравентрикулярные ядра, верхняя часть грудного отдела бокового столба спинного мозга, верхний шейный узел), эпифиз преобразует нервный сигнал в эндокринный (Гордон Д.С. и др., 1982; Reiter R.J., 1983). В последние годы показано существование обратного контроля эпифиза за работой пейсмекерного механизма СХЯ. В частности, в СХЯ найдена высокая плотность мелатониновых рецепторов, число и аффинность которых обнаруживают четкий циркадианный ритм, фазы которого соответствуют фазам деятельности эпифиза (Владимиров СВ., 1984; Арушанян Э.Б., 1991; Замощина Т.А., Саратиков А.С., 2000). Полосатое тело и некоторые другие образования головного мозга, обладающие вторичными осцилляторными свойствами, формируют с пейсмекером СХЯ замкнутые функциональные блоки, которые обеспечивают оптимизацию программы временной организации. Посредством мелатонина эпифиз способен «вмешиваться» в работу стриатума и других образований мозга, выполняющих роль как первичных, так и вторичных осцилляторов (Castillo J.L., et al., 1992). По мнению ряда авторов (Арушанян Э.Б., Батурин В.А., Арушанян А.Э., 1991) роль эпифиза в организации циркадианного перио-дизма заключается, с одной стороны, в формировании более четкого рисунка поведенческих ритмов на протяжении суток, с другой - в удлинении периода колебаний.
Согласно так называемой мультиосциляторной модели организации биологических ритмов (Мур-Ид М, Салзмен Ф.; Питендрих К., 1984; Замощина Т.А., Саратиков А.С., 2000). В различных органах и тканях организма существует система автономных осцилляторов (или пейсмекеров), способных поддерживать колебания без периодических внешних воздействий. Эти осцилляторы условно обозначены авторами как «X» и «Y». Ритмы наступления быстрого сна, температуры тела, содержания кортизо-ла в плазме крови, диуреза, экскрекции калия и натрия с мочой контролируются, по- видимому, «X»- осциллятором, локализация которого не определена. Возможно, что функцию последнего выполняют супраоптическое или паравентрикулярные ядра гипоталамуса (Ozaki N. et al.,1993), либо терморегуляционный центр (Kubota М., 1991), либо эпифиз (Underwood Н., 1990). «Y»- осциллятор ответственен за формирование циркадных ритмов наступления медленной фазы сна, локомоторной активности, секреции гормона роста и экскреции кальция с мочой. Предполагают, что «Y»- осциллятором у млекопитающих являются СХЯ переднего гипоталамуса, на импульсную активность нейронов-пейсмекеров которых, оказывает модулирующее влияние моноаминэргические структуры ствола мозга - серото-нинсодержащие ядра шва и норадреналинсодержащее голубое пятно, что позволяет отнести указанные стволовые образования к определенной системе циркадного таймера.
В СХЯ источником ритма служат пейсмекерные клетки, принадлежащие к нейронам безымпульсного типа, в которых периодически возникают деполяризация и гиперполяризация, не сопровождающиеся потенциалами действия (Шеперд Г., 1987). Повреждение СХЯ нивелирует у белых крыс не только циркадианную эстральную цикличность и ритмическую секрецию надпочечниками кортикостероидов, но и суточный режим двигательной активности, питьевой режим (Арушанян Э.Б., Попов А.В., 1994; Moore R., Klein D.C, 1974; Rusak В., Groos G., 1982), циркадианный ритм серотонин-Ы-ацетилтранферазы и концентрации мелатонина в эпифизе (Moore R., Klein D. 1974; Дедов И.И., Дедов В.И., 1992). С помощью меченой 14С 2-дезоксиглюкозы доказано существование в СХЯ циркади-анного ритма метаболической активности (Schwartz W. et al., 1980) Примечательно, что подобный ритм отсутствовал в других областях мозга (Inouye S.T., Kawamura Н., 1979).
Герминативный центр лимфатического фолликула
В корковом и мозговом веществе преобладают ответственные за гуморальный иммунитет В-лимфоциты, а в паракортикальной зоне - Т- лимфоциты, обеспечивающие клеточный иммунитет. В паракортикальной (тимусзависимой) зоне присутствуют посткапиллярные венулы, где происходит хоминг (попадание в паренхиму лимфатического узла) лимфоцитов (Анохин Ю.Н., Ярилин А. А., 1980).
Строму лимфатического узла образуют ретикулярные клетки (рети-кулоциты). Паренхиму узла составляют элементы лимфопоэтического ряда: малые и средние лимфоциты, большие лимфоциты (лимфобласты согласно МГН), плазмобласты и плазмоциты. Среди этих клеток встречаются свободные макрофаги (гистиоциты), немногочисленные нейтрофилы (ней-трофилоциты по МГН), эозинофилы (ацидофилоциты), тучные клетки (лаброциты).
Следует отметить, что не все исследователи ставят знак равенства между большим лимфоцитом и лимфобластом. Так, считается, что существует три формы лимфоцитов - большой, средний, малый. Последний трансформируется в иммунобласт, который может дифференцироваться в эффекторные клетки двух различных типов: плазмоцит и иммунный Т-лимфоцит. При этом на светооптическом уровне лимфо- и плазмобласты почти не различимы (Сапин М.Р., и др., 1978; Робинсон М.В., 1994).
Считаем уместным остановиться на характеристике основных клеточных элементов, которые можно дифференцировать на светооптическом уровне при соответствующей фиксации и окраске.
Малый лимфоцит на срезе имеет диаметр до 4 мкм (белая крыса) или же до 6 мкм (человек). Его едва видимая цитоплазма представлена узким ободком, а ядро отличается плотным глыбчатым хроматином.
К средним лимфоцитам (по МГН) относят клетки, имеющие на срезах диаметр около 8 мкм у человека и 4,7мкм у белой крысы. Эти клетки, особенно при локализации в лимфатических фолликулах, называются по-иному: малая клетка фолликулярных центров с расщепленным ядром, гер-миноцит, центроцит, пролимфоцит (Белянин В.Л., Цыплаков Д.Э.,1999). Цитоплазма среднего лимфоцита представлена узким, плохо различимым ободком. Его ядро характеризуется неправильным иногда расщепленным контуром. Хроматин ядра средних лимфоцитов является по сути переходным между грубодисперсным и тонкодисперсным. В ядре часто обнаруживаются беспорядочно расположенные ядрышки.
Большой лимфоцит на срезах имеет диаметр около 11 мкм. Особенностью этой категории клеток является то, что название «большой лимфоцит» объединяет по внешним признакам разные клеточные элементы лим-фоцитарного ряда, имеющие различное происхождение и претерпевающие в дальнейшем различные трансформации. Своими размерами и внешним видом большой лимфоцит практически не отличается от иммунобласта. Последний имеет диаметр 11-14 мкм у человека и 6,5-7,5 мкм у белой крысы, четко очерченную циронинофильную цитоплазму, а также структуру ядра с характерным центральным расположением ядрышка.
Приближающиеся по размеру к среднему лимфоциту плазмобласты также с трудом идентифицируются на препаратах. Они отличаются базо-фильной цитоплазмой и мелким ядрышком ядра.
Плазмоцит представляет собой клетку с эксцентрически расположенным округлым ядром разнообразной формы: округлой, овальной, неправильной. Хроматин ядра глыбчатый, преимущественно радиально расположенный. Цитоплазма характеризуется базофильностью или пирони-нофильностью (при окраске по Браше), а также большим диаметром, широким ободком с нередко округлым перинуклеарным просветлением. Диаметр плазмоцита составляет около 7-8 мкм у человека и 5,4-6,2 мкм у белой крысы.
К клеткам паренхимы лимфатического ядра относят также гистиоциты и макрофаги, включенные в систему мононуклеарных фагоцитов, которые являются производными моноцитов, продуцируемых костным мозгом. Морфологическими признаками макрофагов на гистологических препаратах является наличие округлого или овального ядра с нежным хроматином и трудно различимым ядрышком, а также оптически почти пустой широкой цитоплазмы нередко с включениями в ней фагоцитированных фрагментов базофильного ядерного материала. Гистиоциты и макрофаги обнаруживаются в лимфатическом узле повсеместно, локализуясь преимущественно в лимфатическом фолликуле и синусах. По морфологическим признакам гистиоциты и макрофаги с трудом отличаются на препаратах от клеток стромы, в частности от ретикулоцитов.
Из-за большого внешнего сходства между собой трудно идентифицировать на препаратах клетки стромы лимфатического узла вследствие их. Наряду с фибробластами к последним относят ретикулярные клетки, объединяющие четыре типа клеток: «ординарные фагоциты», дендритные, интердигитирующие и фибробластические ретикулярные клетки, которые формируют ретикулиновые волокна (Белянин В.Л., Цыплаков Д.Э.,1999).
Герминативный центр лимфатического фолликула
Исследования, выполненные в течение последних лет выявили широкий спектр высокой биологической активности низкомолекулярного пептидного препарата эпифиза эпиталамина в отношении нейроэндок-ринной, иммунной и репродуктивной систем (Анисимов В.Н. и др., 1993; Зимина О.А. и др., 2000; Хавинсон В.Х. и др., 2001). Тем не менее, продолжает оставаться недостаточно изученным влияние эпиталамина на процессы пролиферации, дифференцировки и миграции клеток лимфоидного ряда в периферических органах иммунной системы.
Введение комплекса пептидов эпифиза (эпиталамина) эпифизэкто-мированным животным ежедневно с 24 по 41 день после эпифизэктомии привело к формированию выраженного циркадианного ритма динамики МИ и содержания иммунобластов, малых и средних лимфоцитов в ГЦ лимфатического фолликула (приложения 9-12, рис.20, 21).
Среднее значение МИ клеток герминативного центра составило 24,41 ±2,76%о И достоверно не отличалось от уровня пролиферативной активности клеток интактных животных (табл.1). Сглаженная кривая суточной динамики МИ имела вид синусоиды, профили которой сохранялись в течение каждых суток эксперимента (рис. 19а). Активная фаза циркадиан-ного ритма суточной динамики МИ приходилась на светлое время суток (9ч.-18ч.), при амплитуде колебаний 15,44%о (табл.3).
Значение МИ в светлое время суток (35,74±2,65%о) достоверно превышало значение МИ в темное время суток (18,06±1,04%о, Р 0,05, табл.2, рис.196). Количество иммунобластов у опытных животных составило 194,39±19,57, что достоверно не отличалось от количества иммунобластов у интактных животных (Р 0,05, табл.1). Сглаженная кривая суточной динамики содержания иммунобластов имела вид синусоиды, профили которой сохранялись в течение каждых суток (приложение 9). Активная фаза циркадианного ритма количества иммунобластов длилась первые сутки с 8:00ч. до 19:00ч., вторые сутки - с 5:00ч. до 18:00ч. Максимум количества иммунобластов отмечался в утреннее время (9:00ч.), а минимум - в темное время суток (24:00ч., табл.3, приложение 9). Амплитуда колебаний количества иммунобластов составила 116,68 (табл.3).
В светлое время суток количество иммунобластов (259,27±21,4) было достоверно выше такового в темное время (126,16±14,5, Р 0,05, рис.22, табл.2). Результаты спектрального анализа выявили существование циркадианного ритма суточной динамики иммунобластов с периодом 21ч. и ультрадианного ритма с периодом 8ч. (приложение 9).
Среднее количество малых и средних лимфоцитов составило соответственно 147,44±7,49 и 203,91±12,14 (табл.1). Достоверные различия в содержании клеток этих типов у интактных и опытных животных отсутствовали (Р 0,05, табл.1). Сглаженные кривые суточной динамики количества малых и средних лимфоцитов имели вид синусоид с повторяющимися профилями (приложение 9). Активная фаза циркадианного ритма малых лимфоцитов длилась в течение первых суток с 18:00ч. до 2:00ч., а вторые сутки - с 17:00ч. до 22:00ч. В то время как активная фаза циркадианного ритма средних лимфоцитов длилась первые сутки с 19:00ч. до 2:00ч., вторые - с 20:00ч. до 24:00ч. (табл.3, приложение 9). Максимум содержания малых и средних лимфоцитов в ГЦ лимфатического фолликула отмечался в 21:00ч. (приложение 9). Амплитуда колебаний составила для малых лимфоцитов 45,62, для средних - 67,12 (табл.3). Количество малых лимфоцитов (159,49±13,1) так же, как и средних лимфоцитов (224,54±24,73) в темное время суток достоверно превышало их количество в светлое время суток (Р 0,05, рис.22, табл.3). В светлое время суток количество малых лимфоцитов составило 126,2±5,4, а количество средних лимфоцитов - 173,5±7,86 (рис.22, табл.2).
Результаты спектрального анализа позволили выявить существование циркадианного ритма динамики содержания малых и средних лимфоцитов с периодом 24-25 ч. (приложение 9).
Активные фазы динамики МИ и количества иммунобластов не соответствуют во времени активным фазам динамики содержания малых и средних лимфоцитов. В циркадианной динамике МИ и количества иммунобластов активная фаза приходится на светлое время суток, в то время как активная фаза динамики количества малых и средних лимфоцитов отличается в темное время суток (рис.22, табл.3). Сходная динамика наблюдалась у интактных животных.
Влияние эпифизэктомии и введения эпиталамина или мелатонина на величину площади лимфоидной ткани трахеобронхиальных лимфатических узлов
Введение как эпиталамина, так и мелатонина в нашем исследовании вызвали изменение уровня пролиферации и содержания клеток различных типов в лимфатическом фолликуле, паракортикальной зоне и мякотных тяжах лимфатического узла. В связи с этим возникла необходимость исследования размеров лимфоидной ткани после проведенных воздействий. С этой целью измеряли относительную площадь всех структурных компонентов лимфатического узла с помощью сетки Автандилова (%) и среднюю площадь ГЦ и короны лимфатического фолликула.
Площадь лимфатического фолликула у интактных животных составила 27975,37±935,14 мкм2, площадь ГЦ лимфатического фолликула -12812,07 ±885 мкм2, а площадь короны - 15163,3±532,29 мкм2. После эпифизэктомии произошло увеличение размеров как лимфатического фолликула в целом, так и его ГЦ и короны (Р 0,05, рис.33, табл.4). Площадь лимфатического фолликула эпифизэктомированных животных составила 34415,24± 1272,86 мкм2, площадь ГЦ лимфатического фолликула -16295,09±1056 мкм2, площадь короны - 18120,15± 812,66 мкм2. Увеличение площади лимфатического фолликула и его структурных компонентов происходило на фоне увеличения уровня пролиферации и содержания клеток различных типов в ГЦ и короне лимфатического фолликула (табл.1). Введение эпиталамина (мелатонина) эпифизэктомированным животным привело к восстановлению размеров лимфатического фолликула в целом, его ГЦ и короны до размеров лимфатического фолликула интактных животных (табл.4, рис.33). При этом наблюдалось снижение уровня пролиферации клеток ГЦ, а также содержания клеток различных типов в ГЦ и короне лимфатического фолликула по сравнению с эпифизэктомированными животными (Р 0,05, табл.1).
Невозможность определения абсолютных площадей паракортикаль-ной зоны, мякотных тяжей и синусов лимфатического узла обусловила необходимость использования морфометрической сетки Автандилова, которая дает возможность измерять относительные площади всех структурных компонентов лимфатического узла. Результаты измерения относительных площадей структурных компонентов лимфатического узла приведены в таблице 5. Капсула лимфатического узла занимала 2,74±0,05% от общей площади лимфатического узла, кортикальная зона - 17,44±0,85%, паракорти-кальная зона — 33,35±0,85%, мякотные тяжи - 21,37±0,42%, первичные фолликулы - 2,3±0,04%, фолликулы с ГЦ - 4,04±0,19%, синусы - 18,76± 0,2%. У интактных животных не обнаружена циркадианная динамика изменения площадей структурных компонентов лимфатического узла, так как акрофазы циркадианных ритмов клеток лимфоидного ряда в различных зонах лимфатического узла отмечались в разное время суток (табл.3).
После эпифизэктомии произошло увеличение на 2,01% площади фолликулов, имеющих ГЦ; на 3,79% площади паракортикальной зоны; на 1,89% площади мякотных тяжей. Эти изменения соответствуют увеличению пролиферативной активности клеток герминативного центра и количества клеток лимфоидного ряда (Р 0,05, табл. 1,5). У эпифизэктомиро-ванных животных достоверно уменьшилась по сравнению с интактными животными площадь капсулы лимфатического узла (на 1,03%), площадь кортикальной зоны (на 7,3%, табл.5). Площадь, занимаемая первичными фолликулами и синусами лимфатического узла, не имела достоверных различий по сравнению с таковыми контрольных животных (Р 0,05, табл.5).
После введения эпиталамина (мелатонина) эпифизэктомированным животным площадь структурных компонентов лимфатического узла воестановилась до размеров лимфоидной ткани у интактных животных (табл. 5). Это явилось следствием снижения уровня пролиферации клеток ГЦ и содержания клеток лимфоидного ряда после введения как эпиталамина, так и мелатонина эпифизэктомированным животным (табл.1).
Таким образом, эпифизэктомия обусловила увеличение размеров лимфоидной ткани лимфатического узла, а после введения эпиталамина (мелатонина) площадь структурных компонентов лимфатического узла эпифизэктомированных животных восстановилась до размеров лимфоидной ткани интактных животных.
