Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 . Исследование анальгетических эффектов семакса в различных экспериментальных моделях 64
1.1. Изучение эффектов семакса в тесте "отдергивание хвоста" 64
1.2. Изучение анальгетнческого действия семакса в тесте "горячая пластина" 64
1.3. Изучение эффектов семакса в тесте "сдавливания задней лапы" 71
1.4. Изучение анальгетнческого действия семакса в тесте "корчи" 71
Обсуждение результатов 74
Глава 2 . Исследование влияния АКТЦ4-10 на болевую чувствительность животных в различных экспериментальных моделях 79
2.1. Изучение анальгетнческого действия АКТГ(4-10) в тесте "горячая пластина" 79
2.2. Изучение анальгетнческого действия АКТГ(4-10) в тесте "сдавливания задней лапы" 79
2.3. Изучение анальгетнческого действия АКТГ(4-10) в тесте "корчи" Обсуждение результатов 82
Глава 3. Зависимость анальгетической активности синтетических меланокортинов от структуры 86
Обсуждение результатов 96
Глава 4. Исследование эффектов семакса на фоне фармакологически вызванных изменений состояния различных медиаторных систем мозга 98
4.1. Изучение анальгетнческого действия семакса на фоне предварительного введения ципрогептадина 98
4.2. Изучение анальгетического действия семакса на фоне блокады рецепторов дофамина 100
4.2.1. Влияние галоперидола на проявление анальгетических эффектов семакса 100
4.2.2. Влияние клебоприда на проявление анальгетических эффектов семакса 100
4.3. Изучение анальгетнческого действия семакса на фоне блокады опиоидных рецепторов налоксоном 103
4.3.1. Влияние налоксона (1 мг/кг) на проявление анальгетических эффектов семакса 103
4.3.2 . Влияние налоксона (5 мг/кг) на проявление анальгетических эффектов семакса 103
4.4. Влияние семакса на анальгезию, вызванную введением морфина 106
4.4.1. Исследование влияния семакса на анальгезию, вызванную введением морфина в тесте "отдергивания хвоста" 106
4.4.2. Исследование влияния семакса на анальгезию, вызванную введением морфина в тесте "сдавливания задней лапы" 106
Обсуждение результатов 109
Глава 5 . Влияние семакса на стресс-вызванную анальгезию 114
5.1. Изучение влияния семакса на развитие стресс-вызванной анальгезии у мышей 114
5.2. Влияние семакса на развитие стресс-вызванной анальгезии у крыс 116
5.2.1. Влияние предварительного введения семакса на развитие анальгезии, вызванной методом принудительного плавания 116
5.2.2. Влияние семакса на развитие стресс-вызванной анальгезии при введении пептида после окончания стрессирутощего воздействия 121
5.2.2.1. Влияние семакса на развитие анальгезии, вызванной принудительным плаванием 121
5.2.2.2. Влияние семакса на развитие анальгезии, вызванной иммобилизацией животных 121
5.2.2.3. Влияние семакса на развитие анальгезии, вызванной электро-болевым раздражением 125
Обсуждение результатов 126
Заключение 129
Выводы 136
Список литературы 137
Приложение 161
- Изучение анальгетнческого действия семакса в тесте "горячая пластина"
- Изучение анальгетнческого действия АКТГ(4-10) в тесте "сдавливания задней лапы"
- . Влияние налоксона (5 мг/кг) на проявление анальгетических эффектов семакса
- Влияние предварительного введения семакса на развитие анальгезии, вызванной методом принудительного плавания
Введение к работе
Одним из активно исследуемых классов эндогенных пептидных регуляторов являются АКТГ/МСГ-подобные пептиды, объединяемые в настоящее время термином меланокортины. Исследования эффектов меланокортинов, проводившиеся на протяжении последних 40 лет, показали, что спектр физиологической активности этих пептидов очень широк. Многочисленные эксперименты, проводившиеся как в нашей стране, так и за рубежом, показали, что меланокортины, помимо известного гормонального действия, улучшают обучение и внимание; влияют на мотивационные процессы; ускоряют регенерацию в нервно-мышечной системе; оказывают протекторное действие при повреждениях в ЦНС; воздействуют на развитие нервной системы; моделируют половое поведение; оказывают противовоспалительное и жаропонижающее действие; взаимодействуют с опиоиднои системой; влияют на болевую чувствительность и сердечно-сосудистую систему; вызывают снижение потребления пищи и веса тела; влияют на функционирование экзокринных желез. Использование коротких фрагментов природных гормонов позволило отделить эндокринные свойства исходных молекул от их экстрагормонального действия. Доказательство широкого спектра физиологической активности меланокортинов, открытие семейства меланокортиновых рецепторов и разработка синтетических агонистов и антагонистов этих рецепторов предоставили новые возможности для исследования веществ, потенциально применимых в клинике при различных патологиях.
Препятствием для использования природных меланокортинов в клинике является низкая биодоступность этих пептидов при системном введении. Для создания лекарственных препаратов на основе АКТГ-подобных пептидов необходимо было разработать их стабилизированные аналоги, лишенные гормональных эффектов. Многими исследователями были предприняты попытки создания высокоэффективных аналогов фрагментов АКТГ путем различных модификаций первичной структуры молекулы. В ходе этих экспериментов были разработаны аналоги природных меланокортинов, лишенные гормональных эффектов и обладающие выраженной биологической активностью и высокой устойчивостью к действию протеаз.
7 В результате многолетних исследований был разработан аналог АКТГ(4-10) пролонгированного действия - семакс. Исследования активности этого пептида в экспериментах на животных показали, что он улучшает память и внимание, обладает антигипоксическим и антигеморрагическим эффектами, способствует уменьшению тяжести клинических и нейрофизиологических проявлений экспериментального ишемическиго инсульта. Клинические исследования показали высокую эффективность семакса при лечении интеллектуально-мнестических расстройств различного генеза, а также при профилактике и лечении постнаркозных мнестических нарушений. Введение семакса оказывает выраженное позитивное действие при лечении инсульта. На сегодняшний день этот пептид является единственным широко используемым в клинике лекарственным неиротропным препаратом, разработанным на основе фрагментов АКТГ. Однако, несмотря на то, что семакс уже более 10 лет используется в клинической практике, исследования эффектов этого пептида, направленные на определение спектра физиологической активности препарата и на выяснение механизмов его нейротропного действия, продолжаются.
Многочисленные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что меланокоротины участвуют в регуляции болевой чувствительности, однако механизмы ноцицептивного действия этих пептидов до настоящего времени не выяснены. В ходе клинических исследований семакса было отмечено аиальгетическое действие этого препарата при ряде болевых синдромов. Однако изучения влияния семакса па болевую чувствительность в экспериментах на животных не проводилось. Представленная работа посвящена изучению влияния семакса на болевую чувствительность животных в различных экспериментальных моделях, определению зависимости анальгетического действия пептида от структуры, а также исследованию возможных механизмов антиноцицептивных эффектов этого препарата. Кроме того, задачей данного исследования явилась оценка взаимодействия семакса с опиоидной системой организма. Полученные результаты будут способствовать определению спектра физиологической активности семакса, выяснению механизмов его действия и расширению клинического применения лекарственного препарата семакс.
Изучение анальгетнческого действия семакса в тесте "горячая пластина"
При исследовании влияния семакса на болевую чувствительность крыс в тесте "горячая пластина" пептид вводили в дозах 0.5 и 0.05 мг/кг. Известно, что при многократном помещении животного на "горячую пластину" у крыс нарушается адекватная поведенческая реакция на данный болевой раздражитель. Поэтому в каждой серии экспериментов животных тестировали не более 6-й раз - 3 раза измеряли исходную и 3 раза приобретенную болевую чувствительность. Для изучения длительности эффектов пептида проводилось три серии экспериментов, в которых величину приобретенной болевой чувствительности регистрировали через различные интервалы времени после инъекции пептида
Влияние семакса на болевую чувствительность крыс в тесте "отдергивание хвоста". На графике представлены относительные изменения болевой чувствительности: по оси абсцисс - время после введения пептида, по оси ординат — величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В группах по 20-22 крысы. В первой серии опытов измерения приобретенной болевой чувствительности проводили через 15, 30 и 45 минут после введения веществ. В опыте использовано 26 крыс. Результаты представлены на рис. 7. Достоверное увеличение болевого порога относительно контроля зарегистрировано в группе крыс с введением семакса в дозе 0.05 мг/кг через 30-45 мин после введения пептида (F(I.16)=6.04; р 0.05); в группе животных с введением семакса в дозе 0.5 мг/кг-через 15-45 мин после инъекции (F(1.16)=47.28;p 0.0001).
Во второй серии опытов измерения приобретенной болевой чувствительности проводили через 30, 45 и 60 мин после введения веществ. В опыте использовано 57 крыс. Достоверное увеличение болевого порога относительно контроля зарегистрировано в группе крыс с введением семакса в дозе 0.05 мг/кг через 30-60 мин после введения препарата (F(1.59)=4.80; р 0.05); в группе животных с введением семакса в дозе 0.5 мг/кг болевой порог превышал контрольные значения на всем протяжении эксперимента (F(1.56)=4.14;p 0.05) (рис. 8).
В третьей серии экспериментов регистрацию приобретенной болевой чувствительности проводили через 75, 90 и 105 мин после инъекции (рис. 9). В опыте использовано 65 крыс. В группе крыс, получавших инъекцию семакса в дозе 0.5 мг/кг, наблюдалось значимое увеличение болевого порога по сравнению с контролем через 75 мин после инъекции. В группе животных, получавших меньшую дозу семакса, значимых отличий от контроля отмечено не было.
При анализе результатов, полученных в тесте "горячая пластина", все животные были объединены в одну группу. Суммарные результаты экспериментов представлены на рис. 10. В группе крыс, которым семакс вводили в дозе 0.05 мг/кг, достоверное снижение болевой чувствительности по сравнению с контролем отмечено через 30 (р 0.05), 45 (р 0.01) и 60 (р 0.05) мин после инъекции. Введение семакса в дозе 0.5 мг/кг приводит к достоверному увеличению времени реакции относительно контроля через 15 (р 0.05), 30 (рО.01), 45 (рО.01), 60 (р 0.05) и 75 (р 0.05) минут после инъекции пептида. Таким образом, введение семакса в обеих использованных дозах вызывает понижение болевой чувствительности животных в тесте "горячая пластина". Эффект большей дозы пептида более выражен и развивается раньше.
Влияние семакса на болевую чувствительность белых крыс в тесте "горячая пластина" (тестирование через 15, 30 и 45 мин после инъекции). А-введение семакса в дозе 0.5 мг/кг, Б- в дозе 0.05 мг/кг. На графике, по оси абсцисс - время после введения пептида, по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В каждой группе по 8-10 животных. Достоверные отличия опыта от контроля контроль -о— семакс 0.05 мг/кг —о— семакс 0.5 Рис. 8. Влияние семакса на болевую чувствительность белых крыс в тесте "горячая пластина" (тестирование через 30, 45 и 60 мин после инъекции). А-введение семакса в дозе 0.5 мг/кг, Б - в дозе 0.05 мг/кг. На графике: по оси абсцисс - время после введения пептида, по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В каждой группе 18-20 животных. Достоверные отличия опыта от контроля отмечены Влияние семакса на болевую чувствительность белых крыс в тесте "горячая пластина" (тестирование через 75, 90 и 105 мин после инъекции). А-введение семакса в дозе 0.5 мг/кг, Б- в дозе 0.05 мг/кг. На графике: по оси абсцисс - время после введения пептида, по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В каждой группе по 10-15 животных. Достоверные отличия опыта от контроля отмечены (р 0.05).
Изучение анальгетнческого действия АКТГ(4-10) в тесте "сдавливания задней лапы"
При изучении влияния АКТГ(4-10) на болевую чувствительность крыс в тесте "сдавливание задней лапы" величину болевого порога регистрировали в течение 135 мин после введения пептида. В эксперименте использовали 67 белых нелинейных крыс. Результаты опыта представлены на рис. 14. Было показано, что инъекция АКТГ(4-10) в дозе 0.5 мг/кг приводит к достоверному увеличению болевого порога в данном тесте с 15 по 60 мин после введения (F(l.35)=5.84; р 0.03) относительно контрольных значений. При снижении дозы препарата до 0.05 мг/кг анальгетическое действие пептида исчезает (с 30 по 60 мин после введения F(1.37)=0.27; р 0.60)
Влияние АКТГ(4-10) на болевую чувствительность белых крыс в тесте "горячая пластина". А- введение АКТГ(4-10) в дозе 0.5 мг/кг, Б- в дозе 0.05 мг/кг. На графике, по оси абсцисс - время после введения пептида, по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В каждой группе по 20 животных.. Влияние АКТГ(4-10) на болевую чувствительность крыс в тесте "сдавливание задней лапы". А- введение АКТГ(4-10) в дозе 0.5 мг/кг, Б- в дозе 0.05 мг/кг. На графике: по оси абсцисс - время после введения пептида, по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В каждой группе по 20-23 животных. Достоверные отличия опыта от контроля отмечены (р 0.05). 2. 3. Изучение анальгетического действия АКТП4-10) в тесте "корчи".
При изучении влияния АКТГ(4-10) на болевую чувствительность мышей количество корчей, вызванных введением уксусной кислоты, регистрировали с 40 по 60 мин после введения пептида. В опыте использовано 28 нелинейных мышей. Исследование влияния АКТГ(4-10) на болевую чувствительность мышей показало, что инъекция пептида в дозе 0.5 мг/кг приводит к достоверному снижению числа корчей относительно коїггрольньїх значений (р 0.05) в течение всего времени регистрации (рис. 15). В группе мышей, получавших пептид в дозе 0.05 мг/кг, также наблюдалось снижение числа корчей, однако это отличие не достигало уровня достоверности.
Влияние периферического введения фрагментов АКТГ на болевую чувствительность животных изучено недостаточно. Известно, что при таком способе введения природные фрагменты довольно быстро деградируют, однако их эффекты в коротком интервале времени могут быть зарегистрированы. Так например, показано, что периферическое введение а-МСГ в дозе 1 мг/кг приводит к незначительному снижению болевой чувствительности [Yehuda, 1987]. Эффекты лишенных гормональной активности коротких фрагментов природных МК при периферическом введении не исследованы. Во второй части нашей работы мы провели исследование влияния АКТГ(4-Ю) на болевую чувствительность животных при периферическом введении пептида и сопоставление его эффектов с анальгетическими эффектами семакса.
На основании полученных нами данных можно заключить, что фрагмент АКТГ(4-10) при внутрибрюшинном введении в дозе 0.5 мг/кг вызывает снижение болевой чувствительности животных в различных экспериментальных моделях. При этом зарегистрированное изменение болевого порога в тестах "сдавливание задней лапы" и "горячая пластина" не превышает 6,5-7,5 % от максимально возможного эффекта. Снижение дозы АКТГ(4-10) до 0.05 мг/кг приводит к исчезновению анальгетического действия препарата. Семакс при внутрибрюшинном введении сохраняет анальгетическую активность в интервале доз от 0.015 до 0.5 мг/кг. Изменение болевого порога, зарегистрированное при
Влияние АКТГ(4-10) на болевую чувствительность мышей в тесте "корчи". На рисунке представлено среднее количество корчей, зарегистрированное: А - с 40 по 50 и с 50 по 60 мин; Б - суммарное количество корчей с 40 по 60 мин после инъекции пептида. В группах по 8-10 животных. Достоверные отличия опыта от контроля отмечены (р 0.05). \ ПептидТест \- АКЩ4-10) Семакс 0.05 мг/кг 0.5 мг/кг 0.05 мг/кг 0.5 мг/кг Тест "горячая пластина" — — + + Тест"сдавливание задней лапы" — + + + Тест"корчи" — + + + Табл. 3. Влияние АКТГ(4-10) и семакса на болевую чувствительность животных. введении пептида в дозе 0.5 мг/кг в тестах "сдавливание задней лапы" и "горячая I пластина", составило 12-23 % от максимально возможного эффекта. Сопоставление анальгетических эффектов семакса и его природного прототипа АКТГ(4-10) (табл. 3) свидетельствует о том, что замена трех аминокислотных остатков в АКТГ(4-10) на последовательность Pro-Gly-Pro приводит к увеличению анальгетической активности пептида при периферическом введении. Известно, что природные меланокортины характеризуются низкой биодоступностью при системном введении. Например, длительность нейротропного действия фрагмента АКТГ(4-10) при вігутрибрюшинном введении не превышает 30-60 мин [Ашмарин и др., 1997]. Гептапептид семакс является аналогом АКТГ(4-10), обладающим ь пролонгированным нейротропным действием. Длительность ноотропных эффектов семакса составляет 20-24 часа [Ashmarin et al., 1995]. Следует подчеркнуть, что хотя продолжительность ноотропного действия семакса значительно превышает продолжительность ноотропных эффектов его природного прототипа АКТГ(4-10), влияние на память и обучение эти пептиды оказывают в одинаковых дозах [Ashmarin et al., 1995]. При воздействии на болевую чувствительность длительность эффектов АКТГ(4-10) и семакса ) сопоставима, однако эффективность семакса значительно превышает эффективность природного пептида. Таким образом, на основании данных литературы и полученных нами результатов можно заключить, что замена в последовательности природного фрагмента АКТГ(4-10) трех С-концевых аминокислотных остатков на последовательность Pro-Gly-Pro приводит к пролонгированию его ноотропных эффектов и увеличивает эффективность анальгетического действия. Можно предположить, что в основе повышенной активности семакса лежит увеличение его устойчивости к действию протеаз [Potaman et al., 1991A] и, как следствие, возрастание его биодоступности при периферических способах введения.
LINK3 . Влияние налоксона (5 мг/кг) на проявление анальгетических эффектов семакса LINK3 Исследование влияния налоксона на болевую чувствительность крыс показало, что, введение блокатора в дозе 1 мг/кг (рис. 25) не вызывает изменения болевого порога животных относительно контрольных значений (F(1.38)=0.04; р 0.84). Введение семакса (0.5 мг/кг) приводило к значимому повышению болевого порога в течение всего времени регистрации (F(1.39)=4.16; р 0.05). В группе с совместным введением препаратов отмечалось достоверное снижение болевой чувствительности по сравнению с контролем с 30 по 75 мин (F(1.36)=5.07; р 0.03). При этом через 15 мин после введения пептида величина болевого порога в этой группе животных была достоверно ниже, чем в группе крыс, получавших только семакс (р 0.05). Следовательно, предварительное введение налоксона в дозе 1 мг/кг незначительно замедляет развитие анальгетического эффекта семакса.
Результаты исследования влияния блокады опиоидных рецепторов налоксоном в дозе 5 мг/кг представлены на рис. 26. Введение блокатора в этой дозе не влияло на болевую чувствительность животных (F(1.37)=0.35; р 0.56). Введение семакса (0.5 мг/кг) приводило к повышению порога болевой чувствительности относительно контроля через 15-120 мин после инъекции (F(1.37)=8.31; р 0.007). В группе с совместным введением препаратов увеличение порога болевой чувствительности относительно контрольных значений наблюдалось только с 45 по 120 мин (F(1.36)=4.33; р 0.04). При этом в этой группе крыс с 15 по 45 мин болевая чувствительность была выше, чем в группе животных, получавших инъекцию пептида (F(1.37)=4.98; р 0.03). Следовательно, предварительное введение налоксона в дозе 5 мг/кг, также как и в дозе 1 мг/кг, замедляет развитие анальгетического эффекта семакса, при этом эффект блокатора более выражен.Влияние семакса, налоксона (1 мг/кг) и их совместного введения на болевую чувствительность крыс в тесте "сдавливание задней лапы". На графике представлены относительные изменения болевой чувствительности: по оси абсцисс - время после введения пептида; по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В группах по 20 животных. Достоверные отличия от контроля отмечены (р 0.05). Достоверные отличия группы с введением семакса от группы с совместным введением препаратов -#.
Влияние семакса, налоксона (5 мг/кг) и их совместного введения на болевую чувствительность крыс в тесте "сдавливание задней лапы". На графике представлены относительные изменения болевой чувствительности: по оси абсцисс - время после введения пептида; по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В группах по 20 животных. Достоверные отличия от контроля отмечены (р 0.05), (рО.01). Достоверные отличия группы с введением семакса от группы с совместным введением препаратов
Результаты изучения влияния семакса (0.5 мг/кг), морфина (5 мг/кг) и их совместного введения на болевую чувствительность крыс в тесте "отдергивание хвоста" представлены на рис. 27. Введение семакса в этом тесте не вызывало изменений порога болевой чувствительности (F(1.15)=0.43; р 0.52). В группе животных, получавших инъекцию морфина (F(1.20)=5.34; р 0.03), и в группе с совместным введением препаратом (F(l, 17)=13.59; р 0.002) отмечался значимый анальгетический эффект с 30 по 120 мин после введения семакса относительно контрольной группы. Достоверных отличий между группами с введение морфина и совместным введением препаратов отмечено не было (F(1.19)=0.09; р 0.77). Т.е. семакс в тесте "отдергивание хвоста" не проявляет собственных анальгетических эффектов и не влияет па анальгезию, вызванную введением морфина.
Целью данной части нашего исследования явилось выяснение механизмов анальгетического действия семакса. Для этого влияние семакса на болевую чувствительность животных изучалось на фоне блокады опиоидных, серотониновых и дофаминовых рецепторов. Изучение эффектов семакса на фоне действия ципрогептадина в тесте "сдавливание задней лапы" показало, что предварительное введение этого препарата препятствовало анальгетическому действию семакса. Ципрогептадин является блокатором серотониновых (5НТ2), гистаминовых (HI) и мускариновых (Ml, 2 и 3) рецепторов [Hartfield et al., 2003], При этом сродство к гистаминовым рецепторам не очень высокое и для их блокады необходимы большие дозы препарата, чем использовались в наших экспериментах - 5-10 мг/кг [Nascimento et al., 2005]. Известно, что холшіергическая система участвует в регуляции болевой чувствительности. Показано, что агонисты мускариновых рецепторов, также как и ингибиторы ацетил хол и нэстеразы обладают анальгетической активностью [Duttaroy et al., 2002]. Однако ранее было показано, что введение семакса повышает активность ацетилхолинэстеразы [Алексидзе и др., 1983] и, следовательно, аиальгетические эффекты семакса не могут быть опосредованы этой медиаторной системой. Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что отсутствие анальгетических эффектов семакса на фоне действия ципрогептадина связано с блокадой серотониновых рецепторов, а влияние семакса на болевую чувствительность опосредуется серотонинергической системой мозга. О взаимодействии семакса с этой медиаторной системой свидетельствуют также результаты, полученные в Институте Фармакологии РАМН. У крыс линии Спрег-Доули было показано увеличение уровня 5-ОИУК в стриатуме через 1-4 ч после в/б введения семакса в дозах 0.15 и 0.6 мг/кг, при этом в гипоталамусе содержание метаболита серотонина не изменялось. У мышей линии С57В1/6 повышение содержания 5-ОИУК наблюдалось как в гипоталамусе через 30 и 120 мин, так и в стриатуме через 120 мин после инъекции пептида [Еремин и др., 2004а]. Повышение содержания метаболита серотонина после введения семакса свидетельствует об активации серотонинергической системы и ускорении оборота серотонина в
Влияние предварительного введения семакса на развитие анальгезии, вызванной методом принудительного плавания
В эксперименте было показано, что принудительное плавание в течение 5 мин (температура воды 28С) вызывает повышение порога болевой чувствительности крыс. Предварительное введение семакса в дозе 0.5 мг/кг (рис. 30А) приводит к значимому снижению порога болевой чувствительности относительно контрольной группы стрессированных животных с 30 по 120 мин (F(l.34)=9.18; р 0.005). Предварительное введение семакса в дозе 0.05 мг/кг (рис. ЗОБ) также приводит к снижению порога болевой чувствительности относительно контрольных значений (F(I,35)=7.94; р 0.008). Снижение болевой чувствительности относительно контрольных значений не зависело от дозы препарата (F(l.35)=0.14; р 0.71). Предварительная блокада опиоидных рецепторов налоксоном в дозе 1 мг/кг снижает анальгезию, вызванную принудительным плавание с 30 по 90 мин (F(1.34)=4.47; р 0.04). Следовательно, полученная в выбранных условиях эксперимента стресс-выз ванная анальгезия содержала опиоидный компонент и частично снималась введением семакса в обеих дозах.
Эксперименты показали, что принудительное плавание в течение 10 мин (температура воды 28С) вызывает повышение порога болевой чувствительности во всех группах животных. В контрольной группе стрессированных животных использованное воздействие вызывает достоверное понижение болевой чувствительности относительно контрольной группы без стресса в течение 50 мин после окончания плавания (F( 1.47)=23.70; рО.00001) (рис. 31А, Б). Введение семакса в дозе 0.5 мг/кг приводило к выраженному ослаблению СВА. Изменения болевого порога в группе крыс, получавших семакс, превышали соответствующие показатели в контрольной группе без стресса (F(1.47)=4.01; р 0.05), однако эти величины были достоверно ниже, чем в контрольной группе со стрессом (F(l.54)=4.90; р 0.03) (рис. 31А). В группе животных, получавших семакс в дозе 0.05 мг/кг, также наблюдалось снижение болевой чувствительности относительно контроля (F(1.57)=\ .55; р 0.02) (рис. 31Б). При этом изменение болевого порога в группе с введением семакса с 20 по 50 мин после плавания было достоверно меньше, чем в группе стрессированного контроля (F(1.54)=7.25; р 0.01). Блокада опиоидных рецепторов налоксоном в дозе 1 мг/кг (рис. 32) приводила к ослаблению анальгезии, вызванной стрессом, по сравнению с контрольной группой стрессированных животных (F(l. 14)=4.66; р 0.05). Следовательно, предварительное введение как семакса в дозах 0.05 и 0.5 мг/кг, так и налоксона приводит к ослаблению анальгезии, вызванной принудительным плаванием в течение 10 мин.
Влияние семакса и налоксона на анальгезию, вызванную принудительным плаванием (5 мин). А - семакс в дозе 0.5 мг/кг, Б - семакс в дозе 0.05 мг/кг. Пептид вводили за 15 мин до начала стрессогенного воздействия. На графике представлены относительные изменения болевой чувствительности: по оси абсцисс - время после введения пептида; по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В группах по 18-19 животных. Достоверные отличия опыта от контроля отмечены (р 0.05), (р 0.01).
Влияние семакса на анальгезию, вызванную принудительным плаванием (10 мин). А - семакс в дозе 0.5 мг/кг, Б - семакс в дозе 0.05 мг/кг. Пептид вводили за 15 мин до начала стрессогенного воздействия. На графике представлены относительные изменения болевой чувствительности: по оси абсцисс - время после введения пептида; по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В группах по 25-30 животных. Достоверные отличия опыта от контроля отмечены (р 0.05), (рО.01), (р 0.005). Достоверные отличия между группами, подвергавшимися стрессогенному воздействию, - # (р 0.05).
Влияние налоксона (1 мг/кг) на анальгезию, вызванную принудительным плаванием (10 мин). Препарат вводили за 15 мин до начала стрессогенного воздействия. На графике представлены относительные изменения болевой чувствительности: по оси абсцисс - время после введения препарата; по оси ординат - величина болевого порога в процентах к максимально возможному эффекту. В группах по 11-14 животных. Достоверные отличия между группами, подвергавшимися стрессогенному воздействию - # (р 0.05).
