Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Исследование роли гена орнитинаминотрансферазы в развитии и стрессоустойчивости растений Герасимова, Софья Викторовна

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Герасимова, Софья Викторовна. Исследование роли гена орнитинаминотрансферазы в развитии и стрессоустойчивости растений : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.02.07 / Герасимова Софья Викторовна; [Место защиты: Ин-т цитологии и генетики СО РАН].- Новосибирск, 2011.- 110 с.: ил. РГБ ОД, 61 12-3/517

Введение к работе

Актуальность проблемы. Адаптация растений к неблагоприятным условиям окружающей среды требует реализации сложных генетических программ, в которых задействована скоординированная экспрессия больших генных ансамблей, исследование которых необходимо для понимания молекулярных механизмов стрессоустоичивости. В частности, в ответ на стресс изменяется уровень экспрессии генов, контролирующих метаболизм некоторых аминокислот (Martinelli et al, 2007). К их числу относится ген дельта-орнитинаминотрансферазы (ОАТ, ЕС 2.6.1.13), кодирующий фермент, катализирующий перенос дельта-аминогруппы орнитина на альфа-кетоглутарат с образованием пирролин-5-карбоксилата (П5К) и глутамата (Stranska et al, 2008). Эта реакция является частью системы взаимопревращений таких аминокислот, как аргинин, орнитин, глутамат и пролин. Метаболизм этих аминокислот связан с фиксацией, запасанием и ремобилизацией азота, формированием и прорастанием семян, устойчивостью к различным абиотическим стрессам, регуляцией процессов развития (Funck et al., 2008; Canas et al., 2008; Mattioli et al., 2009). Согласно литературным данным, ген ОАТ принимает участие в ответе на стресс, однако его конкретная биологическая роль остается неясной и является предметом обсуждения (Stranska et al., 2008). Долгое время считалось, что ОАТ участвует в синтезе пролина при стрессе (Roosens et al., 1998, 2002), однако ряд исследователей опровергают это утверждение и постулируют, что ген ОАТ регулирует деградацию орнитина и связан с системой рециркуляции азота (Funck et al., 2008). Отдельные данные указывают на участие гена ОАТ в ряде других жизненно-важных клеточных процессов (Boon et al., 1999; Slocum, 2005; Page et al., 2010). Потенциально, OAT может являться важным регулятором клеточного метаболизма, поскольку реакция, катализируемая этим ферментом, связывает несколько биохимических систем: цикл мочевины, цикл накопления и деградации пролина и путь биосинтеза полиаминов. Транскрипционная регуляция этого гена не изучена, а его роль в процессах развития и ответе на стресс не определена. Изучение транскрипционной регуляции гена ОАТ и его роли в развитии и стрессоустоичивости необходимо для расширения современных представлений о регуляции клеточного метаболизма, а также для разработки новых способов получения устойчивых форм растений.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы является исследование роли гена дельта-орнитинаминотрансферазы (ОАТ) в развитии и стрессоустоичивости растений.

Были поставлены следующие задачи:

  1. Разработка и создание генетических конструкций для повышения и снижения экспрессии гена ОАТ в трансгенных растениях и получение трансгенных растений Nicotiana tabacum, несущих эти конструкции.

  2. Оценка содержания свободного пролина в тканях трансгенных растений с измененной экспрессией гена ОАТ в нормальных условиях и в. условиях солевого стресса

  3. Анализ солеустойчивости трансгенных растений с измененной экспрессией гена ОАТ.

  4. Разработка и создание репортерной генетической конструкции для изучения транскрипционной активности промотора гена ОАТ. Получение трансгенных растений табака, несущих эту конструкцию. Анализ экспрессии репортерной конструкции в трансгенных растениях Nicotiana tabacum на разных стадиях развития.

  5. Оценка уровня экспрессии гена ОАТ Nicotiana tabacum в разных тканях и органах на разных стадиях развития растений.

Научная новизна. Создана новая генетическая модель для изучения функций и транскрипционной регуляции гена ОАТ, которая включает в себя генетические конструкции для повышения и снижения экспрессии гена ОАТ, а также репортерную конструкцию для изучения транскрипционной активности промотора гена ОАТ. Впервые показано, что растения с увеличенным уровнем экспрессии гена ОАТ обладают в нормальных условиях большей корневой массой, чем контрольные растения. Впервые показано, что введение антисмыслового супрессора гена ОАТ не влияет на рост растений в нормальных условиях, но существенно снижает формирование корней в условиях солевого стресса. Показано, что изменение уровня экспрессии гена ОАТ не влияет на содержание свободного пролина ни в норме, ни при солевом стрессе. Впервые показано, что активность промотора гена ОАТ и повышенный уровень мРНК ОАТ в норме ассоциированы с зонами инициации роста.

Полученные результаты не подтверждают существующую гипотезу об участии ОАТ в накоплении пролина при стрессе, однако позволяют выдвинуть альтернативную гипотезу о его участии в поддержании ростовых процессов в норме и при стрессе.

Практическая ценность. Показано, что искусственное повышение экспрессии гена ОАТ в трансгенных растениях усиливает их ростовые характеристики и повышает солеустойчивость. Создана генетическая конструкция, эффективно повышающая экспрессию гена ОАТ в трансгенных растениях, которая может быть использована для трансформации разных видов растений. Создана репортерная генетическая конструкция, которая может быть использована для анализа транскрипционной активности гена ОАТ.

Положения, выносимые на защиту.

  1. Индуцированное трансгенезом увеличение экспрессии гена ОАТ в растениях табака приводит к повышенному формированию корней в норме и позволяет преодолеть ингибирующее действие солевого стресса на рост побегов.

  2. Повышенная транскрипционная активность гена ОАТ характерна для зон роста растений.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на Международной научной школе-конференции молодых ученых «Генетика и селекция растений, основанная на современных генетических знаниях и технологиях» (Москва, 2008 г.); на отчетной конференции программы фундаментальных исследований РАН «Биоразнообразие и динамика генофондов» (Москва, 2008 г.), на 13-й международной пущинской школе-конференции молодых ученых (Пущино, 2009 г.), на Германо - Российском биотехнологическом форуме (Новосибирск, 2009 г.), на международной конференции «Plant Genetics, Genomics, and Biotechnology» (Новосибирск, 2010 г.), на Всероссийском симпозиуме «Растение и стресс» (Москва, 2010 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатных работы в рецензируемых журналах.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на ПО страницах машинописного текста, содержит 6 таблиц и 22 рисунка. Библиографический указатель содержит 135 источников.

Похожие диссертации на Исследование роли гена орнитинаминотрансферазы в развитии и стрессоустойчивости растений