Введение к работе
"''; ;''::''''
"" '" '"' Актуальность проблемы. По данным отечественных и зарубежных
%4«Л
С':Г;—исследователей в последнее время наблюдается рост заболеваний органов пищеварения,, по некоторым данным более 50& взрослого трудоспособного населения развитых стран страдают хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Среди населения нашей страны доля болезней органов пищеварения в структуре общей смертности составляет 15$.
Многие хронические заболевания верхнего отдела пищеварительного тракта в последнее время рассматривают как предопухолевые, вследствие высокого риска последующей трансформации в рак ( А. Cameron і 1985 ). В Казахстане рак пищевода остается важной медико-социальной проблемой: удельный вес лиц» страдающих этим заболеванием, составляет 25,6 среди мужчин и 14,4 среди женщин на 100 тыс. населения.
Не вызывает сомнений наличие четкой взаимосвязи меаду развитием опухоли и нарушениями функций иммунной системы. Однако, выработка эффективного противоопухолевого иммунитета возможна при достаточно точной идентификации опухолевых поверхностных антигенов, что крайне затруднено вследствие высокой мобильности и способности опухолевых клеток к изменению антигенов.
Весьма важным представляется изучение функций клеток фагоцитарного ряда, обладающих неспецифической цитотокснчностью, одним из проявлений которой является выброс кислородных радикалов, получивший название "респираторный взрыв" ( РВ >.
Вопрос обеспеченности больных хроническими я онкологическныи заболеваниями пищеварительного тракта кислородной раднкало-зависн--ыой цитотоксичностыо на сегодняшний день остается практически неизученным, а работы, посвященные исследовании роля кислородного цп-
- г -
тоякза в онкогенеэе, единичны п противоречивы ( А. мигало, 1968; Fukuzumi Kazuo , І988; JB. Rotstain , 1987; R.Zimmerman , 1988 ). Остаются недостаточно изученными многие молекулярные механизмы генерации активных форм кислорода.
Целью работы явилось выяснение нолекулярно-клеточиых механизмов генерация активных форм кислорода, их роли в реализации противоопухолевой цитотоксичности фагоцитов крови человека, а также изучение количественно-функциональных параметров фагоцитов у больных с патологией верхнего отдела пищеварительного тракта.
Основные задачи исследования.
1. Изучить кинетику и дать сравнительную оценку кинетических
параметров генерации активных форм кислорода полиморфноядерными
( ПМЯ ) клетками, стимулированными кальциевым ионофороы A-23I87, форболмиристатацетагом ( ?Ш ), опсонизированным зимозаном ( 0Z ), тафтцином - веществами, различными путями стимулирующими активацию фагоцитов и образование кислородных радикалов.'
-
Оценить эффективность блокирования респираторного взрыва ПМЯ-клеток ловушками кислорода и другими агентами ( SOD, азид натрия, цитохалазин В, оуабаин ) при дифференцированном использовании указанных стимуляторов люминол-зависимой хемилюминесценции ( ЛЗХІ ) для выяснения роли отдельных кислородных радикалов в формировании кинетики ЛЗХЛ, а также роли молекулярных, химических структур клетки в осуществлении функции респираторного взрыва.
-
Оценить.цитотоксичность ШН-хлеток, стимулированных опухолевыми клетками К-562. Изучить возможность модификации цитотоксичности с использованием указанных стимуляторов респираторного взрыва ( A-23I87, РЫА, Oz, тафтцин ), изучить возможность блокирования цитотоксичности с помощью ловушек кислорода и ингибиторов РВ ( sod, азнд натрия, цитохалазин В ) для выяснения роли кисло-
родных радикалов в реализации цптотоксического действия фагоцитов.
4. Выявить характер изменений распределения СДПЬ, СДІ4 антигенов на поверхности клеток, фагоцитарной активности и окислительного метаболизма ШЯ-клеток у больных с хроническими воспалительными заболеваниями желудочно-кишечного тракта и раком пищевода.
о. Оценить прогностическое значение исследования количественно-функциональных параметров фагоцитарной системы при воспалительной и опухолевой патологии указанной локализации.
Научная новизна работы.
Впервые проведено комплексное изучение механизмов проявления функции окислительного метаболизма фагоцитами крови с использованием различных стимулирующих я блокирующих клетку агентов.
Впервые исследовано модифицирующее действие стимулирующих окислительный метаболизм агентов на проявление цитолиткческого эффекта ШЯ-клегок по отношении к модельной опухолевой линии К-562^ Исследована кислородная радикаяо-зависимая природа цитолиза. Показано , что внутриклеточный стимулятор - РМА - триады увеличивал цитотоксичность ШЯ-клетоя, гінесенив в систему 30D полностью отменяло литический эффект.
Впервые комплексно изучена картина количественно-функционального состояния фагоцктаркой имыуяноВ системы при воспалятеяьных я онкологической патологиях пищеварительного тракта человека. Установлено, что -у больных раяом пищевода отмечаема угнетение окислительного метаболизма фагоцитов крови, сниаениа количества моноцитов, экопрессирувщчх СДІ4. поверхностный антиген, что приводит к истощения защитных механизмов гомеостаза.
Практическая ценность работы.
Анализ особенностей различных заболеваний аерхяого отдела пи-
_ 4 -
щеваритеяыюго тракта, основанный на комплексной иммунологической оценке фагоцитарного звена, позволил определить ряд информативных параметров, которые ыогут иметь значение для дифференциальной оценки опухолевой и хронической воспалительной патологии верхнего отдела пищеварительного тракта..В качестве такого можно выделить угнетение окислительного метаболизма фагоцитов крови вне зависимости от видов стимуляции у больных раком пищевода.
Результаты проведенных исследований, свидетельствующие о прямом цитотоксическом действии фагоцитов на опухолевые клетки при воздействии форболмирцстатацетатом ( стимулятор фермента протеин- киназы С ), позволяют рекомендовать пременеьие лекарственных препаратов, активирующих данный фермент, после соответствующей апробации на экспериментальных моделях.
Основные положения, выносимые на защиту.
Общая способность ПШ-клеток к генерированию кислородных ме
таболитов зависит от целого ряда внутриклеточных и мембранных эле-
мантов фагоцитов. Быстрый, но непродолжительный во времени кисло
родный метаболизм амеет место э случае активации цитоплазматичес-
еих структур, sksotshhs мсмбранво-рсцептордах структур 'приводит
и замедленному, но максимальному уровню продукции кислородных ра
дикалов, ,1
Пояучзно доказательство прямого цитолнтического действия кислородных родшшш да опухолевые клетка К-562 при стимулировании ШШ-клеток форболмиркататедотатом.
Во всех кссяедовашшх, группах больных с хроническими воспа-тмоаышми заболеваниями, п раком пкщелода отмечается снодсшю параметров окясяатеяыюго иетаСозшзна фагоцитов по пуш их роцзптор-ной активаций. Кйеяоролдай метаболизм в ответ на внутриклеточный
активатор форболмиристатацета? снижен лишь у больных с онкологической патологией, что позволяя? говорить о снпкении потенциальных защитных сил организма, о чем свидетельствует также снижение абсолютного количества моноцитов периферической крови, выявленное цитофлюориметрическим анализом.
Публикации и апробация работы.
По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ. Материалы доложены на конференции молодых ученых по ваялым вопросим современной науки о питании ( Алма-Ата, 1990 ), на конференции аллергологов и иммунологов "Актуальные вопросы аллергологи?! и иммунологии в аридной зоне" ( Ашхабад, 1991 ), на совместном заседании отделов иммунологии и пищевой аллергии Щ РШ АМН СССР и инфекционной иммунологии и аллергология НИИЭМиБ МЗ КазССР ( Алма-Ата, 1991 ).
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 172 страницах машинописи, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, ловчащего 20 отечественных и 158 иностранных источников. Текст иллюстрирован 14 таблицами и I рисункои.
