Содержание к диссертации
Введение 6
Глава 1. Обзор литературы И
1.1. Роль антител в гуморальном иммунном ответе И
-
Образование антител В-лимфоцитами И
-
Эффекторные функции антител 15
1.2. Иммуноглобулины: структура и функция 16
1.2.1. Общий план строения иммуноглобулинов 16
-
Гетерогенность и вариабельность антител 21
-
Специфичность и аффинность антител 24
1.3. Характеристика антигенов 27
1.3.1. Специфичность и иммуногенность антигена 27
1.3.2. Бактериальные антигены и их роль в развитии анти
бактериального иммунитета 29
-
Свойства антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий в норме и при патологии 38
-
Некоторые методы оценки функциональной активности антител... 40
-
Определение константы ассоциации по Скэтчарду 41
-
Определение динамических констант 42
-
Определение относительной аффинности антител 44
Глава 2. Материалы и методы исследования 46
-
Характеристика обследованных групп населения 46
-
Реактивы и расходные материалы 47
-
Оборудование 48
-
Методы исследования 48
2.4.1. Определение основных классов иммуноглобулинов
сыворотки крови 48
-
Определение титров IgG-антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий 49
-
Определение относительной аффинности IgG-антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий 51
-
Определение константы диссоциации IgG-антител к общей антигенной детерминанте всех бактерий 52
2.5. Статистическая обработка результатов 54
Глава 3. Результаты и обсуждение 55
3.1. Определение функциональной активности анти
тел 55
-
Определение относительной аффинности антител 55
-
Определение константы диссоциации антител 56
3.1.3. Сравнение показателей аффинности антител, полученных
разными методами 59
3.1.4. Заключение 60
3.2. Количественная характеристика исследованных показателей гумо
рального иммунитета у обследованных групп населения 61
-
Практически здоровые лица 61
-
Престарелые 63
-
Кардиохирургические больные 69
-
Больные хроническим рецидивирующим фурункулезом 75
-
Больные активным туберкулезом легких 81
-
Заключение 86
Выводы 88
Список литературы 89
Введение к работе
*. Актуальность темы диссертации
Одной из важнейших задач клинической иммунологии является всесторон няя оценка иммунного статуса. Она включает в себя следующий комплекс ос новных тестов: оценка фагоцитоза, гуморального иммунитета и системы ком племента, иммунофенотипирование лимфоцитов, функциональная активность лимфоцитов и оценка интерферонового статуса [Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., 1992]. Одним из основных методов оценки гуморального иммунитета является количественное определение основных классов иммуноглобулинов - IgG, IgA и IgM. Иммуноглобулины выполняют важные функции по защите организма от чужеродных веществ антигенной природы [Boyden S.V., 1966, Jeffries R. etal., 1990]. Однако выполнение этих функций зависит не только от количественных, но и от качественных характеристик антител, важнейшей из которых является аффинность. I Изменение аффинности (и авидности) антител может быть причиной ряда патологических процессов, проявляющихся как развитием иммунокомплексной патологии, так и снижением резистентности к инфекционным агентам [Kasp Е. et al., 1992, Layward L., Soothill I.F., 1971]. Важную роль играет аффинность антител при аутоиммунных нарушениях [Fazekas G. et al., 1996, Czarnocka В. et al., 1997, Narula J., 1996]. Уровень аффинности антител свидетельствует о давности инфицирования: при первичном иммунном ответе вырабатываются антитела низкой аффинности, при повторном инфицировании и при длительном стаже заболевания - высокоаффинные антитела [Hashido М. et al., 1997, Lazzarotto Т. et al., 1997, Narita M. et al., 1996]. В эксперименте отмечено снижение аффинности IgG-антител с возрастом [Song Н. et al., 1997].
Уровень и аффинность антител к бактериальным антигенам являются важ ными показателями резистентности организма к развитию и течению инфекцион- * ных заболеваний [Peterson R.K. et al., 1978, Verbrugh H.A. et al., 1980]. Нами был ' I выбран показатель, отражающий состояние гуморального иммунитета к антиге- нам, свойственным большинству бактерий, выступающих в качестве этиологического фактора. Известно, что в крови человека имеются антитела к огромному числу антигенов микробного происхождения, в том числе и к компоненту кле- точной стенки бактерий - глюкозаминилмурамилдипептиду (ГМДП), который является составной частью пептидогликана и, таким образом, общей антигенной * детерминантной (ОАД) всех бактерий. Анти-ОАД антитела играют исключи- тельно важную роль в развитии естественного антибактериального иммунитета, обладая способностью активировать комплемент и осуществлять опсонизацию микробов [Пинегин Б.В. и соавт., 1995, Кулаков А.В. и соавт., 2001].
В настоящее время эффективность антибактериальной терапии находится на пределе возможного: подробно разработаны методы индивидуального подбора антибиотиков, способы их применения и контроль за эффективностью лечения. Тем не менее многие проблемы лечения инфекции не решены. Это связано не только с тем, что одновременно с совершенствованием антибиотиков возникают резистентные к ним штаммы микроорганизмов, но и главным образом с тем, что в подавлении жизнедеятельности микроорганизмов эти препараты играют вспо могательную роль [Giamarellou Н., 1999]. Сегодня важнейшим звеном в защите организма от инфекции считают его собственные иммунные механизмы, поэтому ^ изучение антибактериального иммунитета необходимо для выяснения степени его нарушения и причинно-следственной роли в развитии иммунодефицита r" [Abbas et al., 1994].
Одной из существенных проблем современной хирургии является развитие послеоперационных гнойно-септических осложнений. Лабораторная диагностика (прогнозирование) осложнений обычно не проводится из-за отсутствия информативных диагностических критериев и методик, позволяющих определить вероятность развития инфекционных осложнений в период подготовки к операции. С этой точки зрения представляется перспективной возможность прогнозирования инфекционных осложнений в хирургии с помощью исследования уровня и аффинности анти-ОАД антител.
В связи с этим, целью работы явилось изучение количественных и качественных характеристик антител к общей антигенной детерминанте (ОАД) всех бактерий в норме и при некоторых иммунопатологических состояниях. і . < (
Задачи исследования
1. Определение уровня основных классов иммуноглобулинов и IgG-антител к N-ацетилглюкзаминилмурамил дипептиду, являющимся общей антигенной детерминантой всех бактерий (ОАД) в сыворотке периферической крови у следующих групп больных по сравнению со здоровыми донорами: у пожилых людей с проявлениями иммунологической недостаточности и без таковых; у кардиохирургических больных с неосложненным послеоперационным периодом и с послеоперационными гнойно-септическими осложнениями. у больных рецидивирующим хроническим фурункулезом; у больных активным туберкулезом легких.
Отработка методики определения относительной аффинности анти-ОАД антител и оценка достоверности метода в сравнении с классической оценкой аффинности по константе диссоциации комплекса антиген-антитело.
Определение относительной аффинности анти-ОАД антител перечисленных групп больных в сравнении с группой здоровых доноров.
Определение связи изучаемых показателей с клиническими проявлениями вторичной иммунной недостаточности, а также оценка их диагностической и прогностической значимости.
Научная новизна
В работе впервые продемонстрировано, что уровень и особенно аффинность анти-ОАД антител являются объективными лабораторными критериями, характеризующими состояние антибактериального гуморального иммунитета при вторичных иммунодефицитных состояниях.
Показано, что у пожилых людей аффинность анти-ОАД антител снижена, уровень анти-ОАД антител имеет тенденцию к снижению, однако «созревание» аффинности антител не нарушено, что обуславливает вероятность физиологического снижения исследуемых параметров с возрастом.
Показано, что аффинность анти-ОАД антител является прогностически значимым критерием развития гнойно-септических послеоперационных осложнений у кардиохирургических больных.
Обнаружено снижение относительной аффинности анти-ОАД антител у больных хроническим рецидивирующим фурункулезом, что может являться одной из основных причин развития этого заболевания.
Анализ гуморального антибактериального иммунитета больных активным туберкулезом легких выявил снижение как уровня, так и аффинности анти-ОАД антител, сопровождающееся выраженным нарушением процесса «созревания» аффинности антител.
Практическая значимость работы
Метод оценки относительной аффинности анти-ОАД антител разработан в варианте, пригодном для использования в рутинных исследованиях, набраны нормативные показатели. Высокая степень корреляции с классическим способом определения аффинности по константе диссоциации комплекса антиген-антитело свидетельствует о высокой информативности предложенной методики.
На примере некоторых вторичных иммунодефицитных состояний показана возможность углубленного исследования гуморального антибактериального иммунитета и диагностики нарушенного звена иммунитета.
У больных хроническим рецидивирующим фурункулезом и активным туберкулезом легких, а также у пожилых людей аффинность анти-ОАД антител значительно снижена по сравнению со здоровыми донорами. Снижение аффинности анти-ОАД антител при наличии клинических проявлений хронического инфекционного процесса может являться показанием к иммунокоррегирующей терапии.
Предлагаемый метод оценки уровня и аффинности анти-АОД антител можно использовать для оценки гуморального иммунитета у кардиохирургических больных с целью прогнозирования риска развития послеоперационных гнойно-септических осложнений.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Модифицированный метод оценки относительной аффинности после элюции антител тиоционатом натрия в иммуноферментном анализе достоверно отражает средний уровень аффинности в сравнении с классическим методом, ос- нованным на определении константы диссоциации комплекса антиген-антитело.
Эффективность антибактериального гуморального иммунитета зависит не только от уровня антител, но и от их аффинности.
У пожилых людей уровень и аффинность анти-ОАД антител снижены, но процесс «созревания» аффинности не нарушен, что может свидетельствовать о физиологическом снижении этих параметров с возрастом.
Относительная аффинность антител к общей антигенной детерминанте (ОАД) всех бактерий является объективными прогностическими критерием при оценке вероятности развития послеоперационных инфекционных осложнений у кардиохирургических больных.
Изменения в иммунном статусе больных хроническим рецидивирующим фурункулезом, заключающиеся в снижении аффинности анти-ОАД антител, может быть одной из причин рецидивирования гнойно-воспалительного процесса.
У больных активным туберкулезом легких уровень и аффинность анти-ОАД антител значительно снижены, ярко выражен дисбаланс в процессах выработки и «созревания» аффинности анти-ОАД антител.
