Содержание к диссертации
1. Введение 5
2. Обзор литературы 9
2.1. Иммунный ответ на опухоли 9
2.2. Мембранные антигены клеток иммунной системы 16
2.2.1, Мембранный антиген CD38 18
2.2.2. Мембранный антиген CD50 22
2.3. Растворимые формы дифференцировочных антигенов 23
2.3.1. Растворимая форма антигена CD50 26
2.3.2. Растворимая форма антигена CD38 32
2.4. Опухолевые антигены 35
3. Материал и методы исследования 39
3.1. Определение растворимой формы антигена CD50 40
3.2. Определение растворимой формы антигена CD38 41
3.3. Реакция непрямой иммунофлуоресценции 42
3.4. Иммуноферментный метод определения РЭА 44
3.5. Иммуноферментный метод определения MUC-1 антигена 44
3.6. Статистическая обработка результатов 45
4. Собственные результаты и их обсуждение 46
4.1. Сывороточный уровень растворимых антигенов CD50 и CD38 при опухолях различной этиологии 46
4.2. Сывороточный уровень растворимого антигена CD38 при карциноме молочной железы 49
4.3. Сывороточный уровень растворимого антигена CD50 при карциноме молочной железы 63
4.4. Исследование относительного содержания CD38+ и CD50+ моно-нуклеарных клеток периферической крови
4.5. Анализ взаимосвязи между мембранной, сывороточной экспрессией молекул CD38, CD50 и уровнем опухолеспецифических белков при раке молочной железы 91
5. Заключение 96
6. Выводы , 101
7. Список литературы 1
Введение к работе
Важную роль в поддержании гомеостаза играет иммунная система. Физиологические основы сохранения внутреннего постоянства организма, в том числе и защита от неопластических процессов, базируются на эффективной и многосторонней работе молекулярных и клеточных механизмов иммунных реакций. Межклеточные контакты являются необходимым звеном реализации адекватного иммунного ответа как на инфекционные агенты, так и на злокачественно трансформированные клетки.
Молекулярной основой формирования межклеточных контактов являются белки адгезии. Если мембранные белки непосредственно участвуют в образовании межклеточных контактов, то их растворимые формы, появляющиеся в результате шеддинга или альтернативного сплайсинга мРНК, являются потенциальными иммунорегуляторнымн молекулами. Физиологическая роль ряда растворимых форм молекул адгезии при неопластических процессах во многом не исследована. Не изучена возможность участия растворимых форм мембранных антигенов CD38 и CD50 (ICAM-3) в регуляции иммунного ответа на такие широко распространенные солидные опухоли, как рак молочной железы, рак легкого, рак желудка. lie исследована возможная связь между сывороточным уровнем растворимых форм CD38 антигена, CD50 антигена и особенностями опухолевого процесса. Не установлены взаимоотношения между сывороточным содержанием данных белков и широко известных опухолевых маркеров: раково-эмбриональиого антигена (РЭА) и раково-ассоциированного антигена MUC-1. Важным в практическом отношении является разработка новых подходов к прогнозированию течения неопластических процессов, основанных на изучении функциональной роли растворимых форм мембранных антигенов адгезии.
Научный консультант: докт. мед. наук. А.В.Алясова
Цель: изучить роль растворимых форм мембранных антигенов CD38 и CD50 в механизмах регуляции противоопухолевого иммунитета.
Задачи:
1. Определить сывороточный уровень растворимых CD38 и CD50 антигенов при неопластических процессах на примере рака молочной железы, рака легкого, рака желудка.
2. Выявить характер изменения сывороточного содержания антигенов CD38 и CD50 в зависимости от особенностей неоиластического процесса при карциноме молочной железы.
3. Провести сравнительное изучение сывороточного уровня вышеуказанных антигенов и относительного содержания CD38 и С050-положительных мо-нонуклеарных клеток периферической крови при раке молочной железы.
4. Дать сравнительную оценку сывороточного содержания антигенов CD38, CD50, РЭА и MUC-1 антигена с целью определения возможности их совместного участия в механизмах модуляции иммунного ответа на опухоль.
Hayчная новизна работы.
Обнаружено повышение сывороточного содержания растворимых CD38 и CD50 антигенов на разных стадиях карциномы молочной железы. Их сывороточное содержание меняется в зависимости от: локализации очагов метастази-ровония, количества центров роста, гистологической формы опухоли, размеров первичного очага, морфологических изменений в опухоли и тканях молочной железы. Выявлено, что при карциноме молочной железы повышение сывороточного уровня растворимого антигена CD38 ассоциировано с увеличением относительного содержания С038-положительных мононуклеарных клеток периферической крови. Продемонстрировано, что изменение относительного содержания СО50-положительных мононуклеарных клеток периферической крови и сывороточного уровня растворимого антигена ІСАМ-3 имеет сложный характер. Высказано предположение, что это, вероятно, связано с индуцибельным и конститутивным типом мембранной экспрессии, соответственно, CD38 и CD50 антигенов и их шеддингом с поверхности клетки. Обнаружена корреляционная связь между сывороточным уровнем растворимых антигенов CD38, CD50 и раково-ассоциированным антигеном адгезии MUC-1, свидетельствую 7 щая о возможном совместном участии трех указанных протеинов в регуляции процессов клеточной адгезии при карциноме молочной железы. Представлена модель участия растворимого CD38 антигена в регуляции иммунофизиологиче-ских механизмов ответа на солидные опухоли.
Научно-практическая значимость.
Обнаружена нормализация сывороточного уровня растворимого CD38 антигена в ответ на успешную цитостатическую полихимиотерапию, что позволило сделать заключение о мониторинговой значимости определения сывороточного уровня растворимого антигена CD38 при терапии карциномы молочной железы. Полученные данные расширяют представления о путях регуляции физиологических механизмов иммунного ответа организма на рост малигнизи-р о ванных клеток.
Основные положения, выносимые на защит}7:
1. При развитии опухолей происходит изменение сывороточного содержания растворимых форм мембранных антигенов CD38 и CD50.
2. Увеличение относительного содержания CD38+ мононуклеарных клеток периферической крови при карциноме молочной железы сопровождается повышением уровня растворимого CD38 антигена.
Апробация работы.
Основные результаты представлены на 5 Всероссийском съезде онкологов (Казань, 2000), на IV Съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2001), на VI Ежегодной Российской онкологической конференции (Москва, 2002), на 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМП (Курск, 2002), на I, II, III Всероссийских научно-практических конференциях с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2002, 2003, 2004). Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста, содержит 5 таблиц, 19 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, пяти глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы. Список литературы содержит 53 отечественных и 73 иностранных источников.
