Введение к работе
Актуальность тени. Выяснение мзяенкзыоз зоеншшоеения и развитая опухолевого процесса рассматривается кап вагнойая задача созрзиетйіі экспериментальное и клинической патология. В евгзи о отим морфологическая исследования гсаспозтипгекнх клатск иглрзз-лвны на поиск новых цитологических критзехез, отрагаяязп: тэ прэ-обрзаовьния, которцз происходят при малйппсзіг"». Наряду с тагами извзстнеми проявлениям элскачзствзкноя трслсформаїдкі кап увеличение ядарно-цитоплзвиатичесяого соотнесения я доасиденса-ция хроматина, дннзыика структурных наугаеихн їг/клоглпрнс-го сл-парата таккз ко^зт слувить основой для разработки изрфзлзгпчзс-кж: узтодоз опрэдоленяя эталез опухолевой прогрзесип (ІІ.А.Бшссза,
1973? Н.Н.ІІЛМЗЄВ И др., IS30; K.Sne-tana et al. . ІШ.; O.A.
Иконникова и др., 1939). Перспективность кэучзяяя мер$с5унвшіена-
лышх оссбеннсстэй нуклоояяриого аппарата при голеЗдастсзах п
настоящее время стала очевидной в связи с е5наруггняс:і гасояеа
частоты вовлечения ядрнзкоеврївуяпдх хромосом з хреиосемзагэ пэ-
рэстройки, опрэдвлякзк» элокачэствгннуо трансформист ггасаеэта-
ЧЄСКИХ ПЛОТОК ( Р.СвЪапШаз et al. , IS23, S. Fukuhara et al.
I9S3, E.Fleishman et al. , I39J.
Уксэгикыэ яспакты з ебеза патефпанологичзскей проблема пспо-ка цитологических ларкэров иалигшіаашп: прз гзаебластезах пзслу-гяяи прздпоенлкзн настоящей работы.
Для оцїнхн способности лкифоцнтоа периферическая srpssa я активной транскрипции и пролифэравдга а 1970 году K.Saatena и егэ сотрудниками был разработан и эяспертентально обоснован нуклзе-лярный тост ( K.Smetana , H.Busch , І970І который в посдеду-сэдэ 20 лзт широко испольаовалоя з снкологачоских, геттеяогпчэ-ских, кммунсиорфолзгических иселодосгняях.
Классический нуклзолярный тост K.Smetana , еснезакшЭ !!Э сезтооптичзскси определенна числа а структура ядрнгэк, иапбодоэ информативен в тех случаях, когда изучаеїшз клетки находятся в покоящейся состоянии ( % )і либо активно функцяснпрувцем состоянии (периоды g1 , s и G2 кнторфазы). В связи с отпа сраи.штояьно простой н удобный для экспериментальных кселвдэва-кий и клинической практики куяяэелярякй тзет K.Smetana но уда-ется применить для регистрация ивгяизнзя з ядріпязх на pmsix этапах порэхода клэток ::э g0 з стпднэ ff1 , кяеточнгго шила, когда доотоверного нсизнсиня покз?атзлзй нукловяяркого тзета
на ьбнаруЕлваотся.
Отчетливо выракэннся зависимость ыагду активацией транскрипционной активности к преобразованиями ультраструктура ядрьзка иа ранках этапах периода GA отраузна в ряда ряб от отечественных И ВарубОН-ШЯ ИССЛедОваТЄДСЙ ( I. Raska et ai. , IS33; О.В.За-ЦЭПЙНа Іі Др. 1985; В.Ы.|!айНТО{;фЭЛЬ, ISS6; D. Kernandes- Verdun
et al. , IK55). Иногкэ ядрьакезыз маркеры в настояло время ис-псяьвувтея в качества цитояогичосюп: тестов для оценки урезня
фуНХЦКЄНаЛЬ1!Ои ЙКТИЕНОСТИ КЛ8Т(5К / K.Smetbna , IS39/. 3 связи
с бтка представлялось перспективам более детально изучить прост-раисгвениуа ергепкэацко поряфзрлйчей области ядршке. и исследовать иарфефункцзенсльиыэ особенности реорганизации оеолоядріїіко-бой вены на всах этапах прерзшшкатквного поркода клеточного цикла.
Цель исследования
Разработать морфологические» критерии, етреггхгсла рэорганн-вацяэ нуклзолкрног аппарата гкіспбіїячаскїи: клеток в дкнемике клеточного цикла к оценить возможность их использования для диагностических к прогностических целей при геиобластозах в ЭКСПерИ-иОНТв К КЯЕКИЕО.
Зг/ччи исследования:
-
Изучить особенности формирования пвринукязолярной зоны в иедзльша: клеточных системах со сті-мудированной пролифзрацкзй и разрубатать тест, позволкзчнй регистрировать ранние отопи порзхо-Д5 кдаткн кз стадии G0 в G^
-
Виявить есобенности накопления и распрзделения нукяеоляр-иого лнпкдноге когшензнта в модельных клеточных систолах и разработать тести, повволдкзие рзгкетрировать прохождение клаткой ота-псб прэрепдккатквного периода.
-
Изучить действие актннеынцкна Д на структурнуа организаций иукяеэлярнего аппарата.
-
С псиоцьв нуклаолярного теста с новши дополнительными Ератернлзя исследовать геиопоэтичоскио клетки периферической кргвк, костного ыозга, тимуса, лимфоузлов и селезенки у беспородных мшэн ш с динамике спонтанного лимфолейкоза у щами линии АКР.
Б. Изучить пространственную реорганизации нуклоолярного аппарата гембпезтнчоских клеток периферической крови при геиоблас-тезах у чэдевока в динамике клеточного цикла и сопоставить обна-
руглшшэ изігзнення о особенностями иуклзздярного шшарата з культурах СГА-стимулиросашпас лимфоцитов.
6. Исслздезать структуру пваулякня ліафсадншс ялзтэк пзрп-фзрнчзскоа крови у эдорозшс доноров я бегьннх-ХДЛ о пско^в нук-леолярнюс царкэроз к оценить прогиостачгскув значимость нуклзздя-. ршк каркэров при определении характера течения ХЛЛ.
Научная новизна.
Впзршэ с псаоїдьа различншс катодоз еззтовоя п гатглиецзт-ной микроскопии в «одзльннх клеточных системах со отпиуляргззи-ноя прслифзрацнзй выявлена и изучена особая область ядра - йпз-ринуялеолярная зона". Показано, что пврянухлзсдярлая з сна - рэ-ально суцзстзувцая диняинчвекая структура интэрфявнего ядра, о учзтсм строения которой разработан нсзиа критерий нухязоляриего тзста - ЧЗНЗ-тзст".
На ОСНОВО ЦИТОХНШІЧЗСХИХ МЗТОДОЗ КССЛЗДОЗЗЯИЯ Я ЛгйГЛНЗСШ-
тного анализа получены свидетельства зависимости нанояяоння яя-пидного компонента в ядретхе и окодолдріпшозой зона ядра от стадий газточного цикла. На основашпга получениях экспвркыанта-льишс данных разработаны тесты, с поис^ьв которнх сциетавтся доля клеток, садзрЕвда дипидный ксетскэкт в граница пэрзнуядэо-лярной зоны ядра (ЛКГПНЗ-тоетИн в тэло ядрьяжа (НЖ-теет)?
Ногиз деполнитольннэ критерии нуклеоляриого таста, етрзко-г,ие динамику нуклзояярного аппарата в прэрзплнкатяЕНва пэрзед клеточного цикла, использованы а комплекса с показателями гзуклэ-олярного теста K.Smetena и тагаы показателей, как числа
Ag А/ЗОН. ПрЭДЛОЕЗНО ВЗЭСТИ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОЗйКИОГО В рабОТЭ KGSS-ЛЭКСа ЫЗТОДОВ НОЗНЯ ТЗрЛШ - "нуКЛЗОЛярЯЗя ТЗОТ-СЯСТС5іаи.
С помо^ьи нуклзолярноя тест-системы вп»рюгэ изучзиа дкнгаз-ка лиифспроикфэрзтивного процзсса при спснтакноа язазфогейкезэ у ще9й линии АКР, а такгэ пря таких гзыобяаотсзах чзявзока каа хроничаскнй яшфолойкоз, хроничзсхая ынзлеззйкоз, квяотордо варз-анты острого лейкоза.
Показано, что ноаыз нухдволярннэ маркзры могут бить ися&яь-зованы а качестве прогностических критериев для определения характера развития гзиебластозов.
* - ЛНГПНЗ - аббревиатура терцина "липндмна всшенент гргнявд
перннуклеолярноя eOHH* 2 - НЖ - аббревиатура термина"нукяеелррицЯ якпздниа кєішкізнт"
Универсальность фгнкгсна "порниукяаолкрная sci:,. ;-b"i?.t ^zz~ ыоеность ебиерусгния саках структур как радпсльж;; тг;;'-: -л ;;;;-ца паркнукяэолкрнс-й зе;ш при пгучсжш; гирохогь сії»:с\л:с b::;:..jr;r-чоских объектов псаооляэт нспольоовать нови'; нуклс-о.-^.тг.:.;.' :-^т.-_.-ры в качестве дополнитолышх кратвризв нуклеоляраого !,\.-::z. к.с.-є~
tana.
ПНЗ-тест ыознзт бить кспельъован для регистрация переходного состояния нуклеолярного аппарата к активному фуихцйонпрозгьпв» когда изучаемые клетки находятся в начальном періоде еггуш-і 5t и когда ецо не начались процессы формирования активных морфотк-поо ядршка и когда площадь ядра и состояние хроматина остается неизменными.
С помощью НЛК-тоста опрадэляэтея доля клеток, находящихся в эаверзаащэй стадии периода ол или в S-периода клеточного цикла. Тост ыогзт быть использован для поучения сктавнопрол:;^-;:-:-руацях популяций как при гсиобласї-озах, так і:,пр: услокіи доргбе-тіш,для исследования других опухоловізс прзцзеее:; или роге:ісг,;іц;.:-..
Предлогзнный способ систематизации оксп^ркмгнтальных дслі.иг с помоцью составления диаграмм по двум нукдьолпрш.^ караер^ы позволяет получить дополнительную информацию о неправлопин лицфопра-лифэрэтивиого процесса при хроническом лимфолейхозе.
Нп асциту выносятся следующие основина полатаний диссортаїглз
-
Пергшуклеолярная вона ядра форлірустся как пространство, окружавцэв ядризко в первдг часы после воздействия пролкфсратнЕ-ного стихула, на ранних этапах прерзпликативного периода клеточного цикла,
-
Ядрызки и элементы перинуклеолярной зони в модельных клеточных системах со стимулированной пролиферацией содержат ли-пихный компонент в определенные сроки посла воздействия пролифе-ративного стимула; граница перинуклеолярной зоны - на ранних этапах прврапликативного периода, ядрыако и радиальные тяги - на еаверааюцих этапах пререпликативного и в синтетическом периоде клеточного цикла.
-
Формирование перинуклеолярной зоны ядра и процесс накопления лкпидного компонента блокируется при одновременном воздействии фитогемаглютинина и ингибитора синтеза FHK актиномицина Д.
-
Охолоядрышковая область ядер ФГА-стимулированных лимфоцитов претерпевает рзорганизации в динамике блаеттрансформации.
Аналогичныз морфофункциокальнко особенности харавтарязуэт нуклэ-олярный аппарат гоиопсэтических клеток периферической кровя больных хроническим диыфолэйкозсн, хронически миэлолойкезои, оогргі лойксзса, а такта лиифоиднкэ клетки князя линяй АКР пря раовятая спонтанного лимфолойкоза.
5. Использование новых дололннтедьянх кртзрагэ нуплзолярай-го тоста позволяет прогностичэскя ецснять напразяэкаэ дісіфеярадя-фэративного процесса при хроническом лчкфагэйхезв у человека.
Внедрение результатов исследования.
Результаты диссортацоонной работы рзкемэндозкш к крпелво-ванив для изучения регенераторных процзссов. Допеянитэгънпэ крз-тврии нуклеолярного тоста позволили более достоверно ецедива» структурно-фуикционалышо изменения ядзр гепатецнтов з ранга» сроки посла частичной гэпатэктсмнн (акт внедрения в ЦШИэ НПШ от 23.01.86).
Рекомендован тест "перинуклэолярная зона ядра" в качества морфологического маркера прн изучении первичного и вторячнэга иммунного ответа. Внедр-энио тоста значительно повысило достоверность нуклеолярного тоста в иммунологических исследованиях (акт внедрения в ШЙУе СО АШ СССР от 10.09.85).
Результаты исследования, касающиеся изучения популяция сгь фоидных клеток при хронической лиифолеикезе, рзяомеидозаны к использования в клинической практике как имевшее прогностачоскеэ значение для опрэделения характера течения веболовання (акт внедрения от 20.09.SO).
Апробация материалов диссартвцки.
Наторкали диссертация додогзны на Всеосазнса екмпезнукэ по иммунологии воспроизведения. Москва, ІГЗІ; на Всесовзнсм симпозиуме "Ядерные белки и экспрессия генома", Киев, 1983; на Всэссаэ-ноы сгеаде кед циноких генетикові Киев, 1934; иа Всесоазнея ска-позиуые "Липиды биологических мембран", Пугдано, 1984; на Мплэй-ной сессии НГЫИ, 1985; заседаниях проблемних секисеий НОТїШИ "Структурные основы гомоостаза", 1985; "йязиологнческне а патофизиологические основы гшеостаза", 1986; пленуме патсфизнологвз Механизмы патологических реакций", Темень, 1937.
Объем и структура диссертации.
