Введение к работе
Актуальное п. темы. Наиболее популярным классом лекарственных средств, который повсеместно используется в качестве анальгетика первой линии, являются неетероидпые противовоспалительные препараты (НПВП). Их несомненными достоинствами является хорошо доказанная эффективность, простота использования и финансовая доступность (Clark J.D.. 2002: Насонов Е.Л.. 2000; Насонов и соавт. 2006). Однако применение НПВП ограничивает серьезная опасность развития классспецифических побочных эффектов, наиболее частым из которых является патология желудочно-кишечного тракта, характеризующаяся развитием эрозий, язи и опасных осложнений - кровотечения и перфорации (Сороц-кая В.П., 2005; Fries J et al, 2004; Singh G 1998; Lain L„ 2004.)
В настоящее время в большинстве стран мира растет заболеваемость сахарным диабетом (СД). По оценкам Всемирной организации здравоохранения, число больных с сахарным диабетом в мире в 2000г. составило 151млн. к 2010г. их будет 239 млн., а к 2025 - 300 млн., что позволяет говорить о «глобальной эпидемии» диабета (King Н. et al., 1998; Bloomgarden Z.T.. 2006). Это обусловливает повышенное внимание к СД специалистов в различных областях медицинской науки. В связи с увеличением продолжительности жизни больных вследствие появления эффективных сахароснижающпх препаратов сосудистые поражения, которые прежде просто не успевали развиться у больного, стали одной из характерных черт современного течения сахарного диабета. Если патология сердца, сосудистого русла, почек при СД изучена достаточно полно, то гастроэнтерологический аспект диабета освещен в литературе недостаточно, хотя частота патологии желудка у больных диабетом выше по сравнению с общей популяцией. Так. в группе больных СД I и 2 типа частота встречаемости гастродуоденальных язв составляет 9,1%. (Геллер Л.И. 1975). Тогда как их распространенность среди населения России, не страдающего диабетом, составляет от 1.5 до 5,5%. (Федорченко Ю.Л. 2003).
Терапия диабетической гастропатии в настоящее время направлена исключительно на уменьшение диспепсии и носит симптоматический характер. Для более эффективной борьбы с патологией желудочно-кишечного тракта при сахарном диабете требуется дальнейшее изучение особенностей его патогенеза, а также новых подходов к его терапии (Калинин А.П., 1997). Имеющиеся в литера iy ре указания на важную роль процессов перекиеного окисления липидов в развитии диабетической полинейропатии при СД (Ефимов А.С, 1985; Санина О.Л.. 1986; Кондратьев Я.Ю., 1998: Волчегорский И.А., 2003: Levine R.T.. 1990: Strokov [.А.. 2003) обосновывают важное место антиоксидантов в комплексном лечении диабета, как средств, способствующих снижению окислительного стресса при данном патологическом процессе (Brovvnlee М. 2001).
Работа является разделом комплексной программы исследований ГОУВ-ПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» «Оптимиэа-
ция фармакологической терапии соматической и психической патологии» (номер государственной регистрации темы 01.2.00704781).
Цель работы: сравнительное исследование антиульцерогенной эффективности деанола ацеглумата и мекспдола. а также их комбинированного применения с омепразолом. мизопростолом и ранитидином в условиях индуцирования язвенного поражения желудочно-кишечного тракта введением индометацина на фоне аллоксанового диабета в эксперименте.
В ходе выполнения работы решались следующие задачи:
-
Изучение антиульцерогенного действия деанола ацеглумата (50 мг/кг. 100 мг/кг, 250 мг/кг) при язвенном поражении желудочно-кишечного тракта, вызванном введением индометацина животным без метаболических нарушений и на фоне аллоксанового диабета в эксперименте.
-
Изучение антиульцерогенного действия мексидола (5 мг/кг. 10 мг/кг, 25 мг/кг) при язвенном поражении желудочно-кишечного тракта, вызванном введением индометацина животным без метаболических нарушений и на фоне аллоксанового диабета.
-
Сравнительное исследование влияния деанола ацеглумата (100 мг/кг) и мексидола (10 мг/кг) на антиульцерогенную активность омепразола. мизопростола и ранитидина в условиях моделирования язвенного поражения желудочно-кишечного тракта введением индометацина на фоне аллоксанового диабета и у животных без метаболических нарушений.
-
Изучение влияния деанола ацеглумата и мексидола на некоторые биохимические показатели и процессы перекисного окисления липидов крови и тканей при введении индометацина на фоне аллоксанового диабета.
Научная пошипи работы. Выявлен достоверный гастро- и энтеропро-текторный эффект у деанола ацеглумата и мексидола при моделировании поражения желудочно-кишечного тракта ипдометацином в условиях аллоксанового диабета.
Отмечено повышение ульнерогенного действия индометацина в условиях аллоксанового диабета и снижение эффективности базовых аитиульцерогенны., препаратов - омепразола и мизопростола. Показано повышение гастропротек-торной и энтеропротекторной активности омепразола при его комбинированном введении с деанола анеглуматом и мексидолом на ([юне язвенного поражения желудочно-кишечного тракта, индуцированного иидометацином, при аллокса-новом диабете.
Установлено отсутствие влияния дополнительного применения деанола ацеглумата или мексидола в условиях аллоксанового диабета на антиульцерогенную активность мизопростола при моделировании язвенного поражения желудочно-кишечного тракта введением индометацина в отличие от животных без метаболических нарушений.
Выявлено повышение антиульцерогенного эффекта ранитидина при его комбинированном применении с деанола ацеглуматом или мексидолом. по срав-
нению с монотераиией ранитидином на фоне язвенного поражения желудочно-кишечного тракта индометацином в условиях аллоксанового диабета. Основные положения, выносимые на защиту:
-
Деапола ацеглумат и мексидол оказывают аптиульцерогенное действие в условиях индуцирования язвенного поражения желудочно-кишечного тракта индометацином на фоне аллоксанового диабета и не приводят к росту маркеров цитолитического синдрома.
-
Гастро- и энтеропротекторное действие деапола ацеглумата более выражено по сравнению с мексидолом в изученных дозах на фоне эрозивио-язвенного поражения желудочно-кишечного тракта индометацином при аллок-сановом диабете в отличие от животных без метаболических нарушений.
-
Эффект базовых антиульцерогенных препаратов омепразола и мизо-простола снижается в условиях язвенного поражения желудочно-кишечного тракта на фоне аллоксанового диабета.
-
Дополнительное применение деанола ацеглумата и мексидола повышает гастро- и энтеропротекторный эффект омепразола и ранитидина и не влияет на эффект мизопростола при моделировании язвенного поражения желудочно-кишечного тракта введением индометаципа на фоне аллоксанового диабета.
Практическая ценность:
Полученные данные являются экспериментальным обоснованием целесообразности комбинирования стандартных средств антиульцерогенной терапии язвенного поражения желудочно-кишечного тракта, индуцированного нестероидными противовоспалительными средствами на фоне диабета, с деанола ацег-луматом и мексидолом.
Апробация работы. Результаты проведенного исследования и основные положения диссертации доложены на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти проф. Я.В. Костина (Саранск, 2005); на межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 40-летию медицинского факультета Мордовского государственного универсиїега имени Н.П.Огарева (Саранск, 2007); на XIV национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва. 2007); на XVI Российском симпозиуме по хирургической эндокринологии «Современные аспекты хирургической эндокринологии» (Саранск, 2007); на Юбилейной российской научной конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения СП. Боткина (Санкт-Петербург, 2007); на VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Озон в биологии и медицине» (Нижний Новгород, 2007); на научно-практической конференции ГОУВПО «Красноярская государственная медицинская академия им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Федерального агентства по здравоохранению и социальном) развитию» «Актуальные вопросы современной хирургии» (Красноярск, 2008).
По теме диссертации опубликовано 9 работ, том числе 2 работы в изданиях, рекомендованных ВАК, подана заявка на изобретение.
Структура и обье.м работы
Диссертация изложена на 196 страницах текста компьютерного набора, вклк, чает в себя обзор литературы, материалы и методы исследования, пять глав результатов собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические рекомендации и список использованной литературы, представленный 172 источниками, втом числе 44 зарубежными, приложение. Работа иллюстрирована 45 таблицами. 32 рисунками.
В качестве объектов исследования были выбраны следующие лекарственные препараты:
Индометацин - 1-(пара-Хлорбепзоил)-5-метокеи-2-метилиндод-3-уксус-иая кислота - относится к производным индолуксусной кислоты. Является одним из наиболее активных нестероидных противовоспалительных препаратов, ингибитор биосинтеза простагландинов. Форма выпуска таблетки по 25 мг производства SOPHARMA AD.
Деамола ацеглумат - М-ацетил-Ь-глютамат 2 (диметиамино) этанола -создан специалистами Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ (ГУП ВНЦ Ба\В). Препарат по своей химической структуре близок к естественным метаболитам мозга (ГАМК. глутамииовая кислота), обладает церебропротективными свойствами с отчетливым ноотропным. антиастеническим, антидепрессивным, гепатопротективным. психостимулирующим и психогармонизирующим действием. Деанола ацеглумат оказывает положительное влияние при невротических состояниях у лиц пожилого и старческого возраста, развившихся на фоне органической недостаточности головного мозга, при алкогольно-абстинентном синдроме, при астении (Александровский Ю.А. с соавт.. 2004: Попов Ю.В., 2006). Обладает антиульцероген-ным действием (Кияйкина О.VI.. 2009). В эксперименте использовался 20% раствор деанола ацеглумата. производство ВНЦ БАВ.
Мексндол - (2-этил-6-метил-3-гидрокеипиридина сукцинат) - относится к гетероароматическим антиокеидантам-аналогам соединений группы витамине; В(6). Имеет широкий спектр фармакологической активности: является ингибитором свободнорадикальных процессов, мембранопротектором, обладающим антигипоксическим. стресспротективным, ноотропным. противосудорожным и анксиолитически.м действием, резистентность организма к воздействию различных повреждающих факторов, к кислородозависимы.м патологическим состояниям (шок. гипоксия и ишемия, нарушения мозгового кровообращения, интоксикация алкоголем и антипсихотическими средствами (нейролептиками)), улучшает микроциркуляцию и реологические свойства крови, уменьшает агрегацию тромбоцитов. Оказывает антиульцерогенное действие (Ямашкина Е.И.. 2005; Гришкина О.П., 2006). Форма выпуска таблетки 125 мг, производство ООО «НПК «Фармасофт»», г. Москва.
Омепразол - (5-метокси-2-[[(4-метокси-3.5-диметил-2-пиридил)-метил сульфинил] бензимидазол|), ингибитор Н+"К+"АТФазы - лекарственное средство, обладающее противоязвенным эффектом. Уменьшает повреждающее действие кислотно-пептичеекого фактора -основного фактора агрессии в патогенезе эрозивно-язвенного поражения слизистой оболочки верхних отделов ЖКТ (Дроздов В.Н., 2005). Форма выпуска: капсулы по 20 мг омепразола производства Dr. REDDY's Laboratories, Индия. Препарат вводился в дозе 37мг/кг, рассчитанной с учетом межвидового переноса доз 2% от LDW (37мг/кг) (Гришкина О.П., 2006).
Мизопростол - метиловый эфир (11альфа,13Е)-(+)-11,16-дигидрокси-16-метил-9-оксопрост-13-ен-1-овой кислоты, синтетический аналог простагландина Е|. Специфический патогенетический антагонист ульцерогенного влияния НПВП на слизистую оболочку ЖКТ (Насонов Е.Л., Каратеев А.Е.. 2003). Обладает антисекреторной активностью, стимулирует секрецию бикарбоната и слизи, оказывает цито-протекторное действие. Форма выпуска: таблетки по 200 мкг мизопростола. Производство SEARLE, США. В работе использован внутрижелудочно в дозе 2% (0,09 мг/кг) от LD5(>.
Раїїіітіідіін - ї\-2-5-(Диметила\шно) метил фурфурил-тио-этил-М'-метил-2-нитро-1,1- тиленднамин. Противоязвенное средство, относится к группе бло-каторов гистаминовых Ні-рецепторов, размещённых в париетальных клетках слизистой оболочки желудка. Подавляет базальную и стимулированную гиста-мином, пентагастрииом и пищей продукцию соляной кислоты, снижает продукцию пепсина. Форма выпуска -таблетки по 150 мг производства SOPHARMA AD.
Индукция язвенных дефектов в слизистой оболочке желудка и кишечника осуществлялась путем 5-дневного курсового введения индометацина в дозе 5 мг/кт внутрижелудочно зондовым способом после двух часов без пищи и воды (Зорькина А.В. с соавт., 2004).
В работе омепразол, мизопростол и ранитидин вводились в дозах 37мг/кт; 0,09 мг/кг, 25 мг/кг, условно составляющих 2% от LDsotKy^eBa Т.А., 2005; Гришкина О.П., 2006) при пероральном введении. Деанола ацеглумат вводился в дозах 50 мг/кг, 100 мг/кг, 250 мг/кг, условно принятых как \%, 2% и 5% от LD5». Мек-сидол вводился в дозах 5 мг/кг, 10 мг/кг, 25 мг/кг, условно принятых как 1%, 2% и 5% от LD^i. Исследуемые препараты вводились внутрижелудочно зондовым способом за 60 минут до введения индометацина один раз в день в течение 5 дней. При исследовании антиульцерогенного эффекта комбинированного введения препаратов омепразол, мизопростол и ранитидин вводились за 60 минут, а деанола ацеглумат и мексидол - за 30 минут до введения индометацина.
Эксперименты выполнены на 332 белых нелинейных крысах обоего пола массой 200-250 г. (табл. 1, табл. 2). Контрольную группу №1 составили 14 животных. Летальность в контрольной группе составила 1% (I животное из 14). Интактную группу составили 10 животных.
Таблица 1.
Структура эксперимента ^_^
Во второй серии опытов развитие диабета достигалось однократным внутрибрюшинным введением аллоксана в дозе 135 мг/кг (И.А. Волчегорекий, 1997) (табл. 2). Через 15 дней животным моделировалось ульцерогенное поражение желудочно-кишечного тракта индометацином по вышеописанной методике. Введение исследуемых препаратов проводилось аналогично первой серии опытов. В контрольную группу №2 были включены 10 животных, летальность составила 20% (2 животных из 10) В опытных группах летальность отсутствовала.
Животные содержались в стандартных условиях вивария МГУ им. Н.П.Огарёва. Экспериментальные исследования проводились в соответствии с требованиями нормативных правовых актов, регламентритующих проведение исследований безопасности и эффективности фармако.ші иячееких веществ в Российской Федерации (Федерального закона «О лекарственных средствах» №86-ФЗ от 22.06.1998. Приказа МЗ РФ «Об утверждении правил лабораторной практики» №267 от 19.06.2003) и международными правилами правовых и этических норм использования животных.
Таблица 2. Структура эксперимента на фоне моделирования аллоксанового диабета
Выведение животных из эксперимента осуществлялось под общим обезболиванием (тиопентал натрия в дозе 50 мг/кг внутриорюшинно). После дека-питации забиралась кровь для биохимических методов исследования. При вскрытии оценивалась картина слизистой оболочки желудка и кишечника (количество и площадь язвенных дефектов, наличие признаков кровотечения, перфораций). При проведении оценки язвенного поражения слизистой оболочки желудка использовали клинико-эндоекопическую характеристику (Чернехов-ская Н.Е. с соавт., 2006).
Для гистологического исследования забирали материал из стенки желуд-
ка. тонкого и толстого кишечника. Кусочки ткани фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Окраску парафиновых срезов осуществ ляли гематоксилином и эозином. При микроскопическом исследовании свето-оптическим способом срезы подвергали микрофотосъёмке.
У интактных животных и животных опытных групп в плазме крови определялась активность аспарагиновой (ACT) и аланиновой (АЛТ) аминотрансфе-раз методом Райт.мана-Френкеля (Reitmaii S.. Frankel S., 1957), активность лак-татдегидрогеназы (ЛДГ) оптимизированным кинетическим методом с использованием набора реактивов LDH "E-D", содержание общего билирубина унифицированным методом Ендрассика-Грофа, с использованием набора реактивов серии "Витал-Европа", содержание глюкозы определяли портативным экспресс-измерителем концентрации глюкозы в крови ПКГ-02-«Сателлит» и электрохимическими полосками однократного применения ПКГЭ-02.
В плазме, эритроцитах и гомогенатах тканей печени, желудка, тонкого и толстого кишечника определяли активность каталазы (Королюк М.А., 1988), уровень малонового диальдегида (МДА) при спонтанном и железоиндуциро-ванном окислении (РеМДА) (Конюхова С.Г., 1989) с последующим расчетом резерва липидов для перекисного окисления [РЛПО=(Ее-МДА-МДА)/МДА) усл. ея.| (Кузьменко Д.И., Лаптев Б.И., 1999), отражающего относительную величину антиокислительной активности среды.
Статистическую обработку результатов экспериментальных исследовании проводили на персональном компьютере IBM PC / Pentium с использованием пакета прикладных программ Excel 7.0 и Biostat 4.03. Результаты представлены в виде средней арифметической и ошибки её среднеквадратичного отклонения (М±т), или в виде процента от численности анализируемой группы. Для оценки достоверности различий независимых переменных между группами использовали критерий Стьюдента и х~- В случае ненормального распределения для оценки достоверности различий между независимыми переменными использовался непараметрический критерий Крускала-Уоллиса. Различия считались достоверными при уровне значимости р<0,05.
