Введение к работе
Актуальность темы. Аутоиммунные синдромы сопровождают ряд заболеваний репродуктивной системы С аутоиммунными синдромами связывают значительный процент случаев невынашивания беременности, бесплодия, других нарушений репродуктивной функции мужчин и женщин
Среди расстройств репродуктивной системы женщин важное место занимают нарушения функции яичников Чаще других заболеваний отмечают синдром преждевременного «истощения» яичника и синдром поликистозных яичников В ряду акушерских патологий значительный процент заболеваний женщин репродуктивного возраста составляет привычное невынашивание беременности [Плужникова с соавт, 2006] К проблеме бесплодных браков относятся также вопросы репродуктивного здоровья мужчин
Как известно, причиной бесплодия у женщин и мужчин нередко бывает аутоиммунное поражение гонад, которое встречается как самостоятельное заболевание [Потин с соавт, 2000, Айламазян Э К с соавт, 2002,], а также в форме аутоиммунного полиэндокринного синдрома [Ahonen Р et al, 1987, Betterle С, et al, 1996,] К аутоиммунным заболеваниям относят хронический эндометрит и эндометриоз [Анциферова Ю С, Сотникова НЮ с соавт, 2005] Среди нарушений половой и эндокринной сфер мужчин важное место занимает аутоиммунный орхит [Алиева ДА, 1995, Гладкова Н А с соавт, 2004]
Одним из наиболее распространенных методически простых, быстрых
и эффективных методов диагностики аутоиммунных заболеваний является
определение циркулирующих в периферической крови
органоспецифических аутоантител Для диагностики органоспецифичных аутоиммунных заболеваний успешно применяют иммуноферментные тест-системы для определения аутоантител к тиреоглобулину, тиреопероксидазе,
микросомальной фракции щитовидной железы, островковым клеткам поджелудочной железы, коллагену, эластину и т д [Тотолян А А с соавт, 2002]
Использование определения аутоантител как рутинного метода лабораторной диагностики в практике гинекологии и андрологии носит более ограниченный характер Это можно отчасти объяснить неполнотой данных об антигенности клеточных и тканевых структур репродуктивных органов [Monnier-Barbanno Р et al 2005] Отсутствие универсальных методов определения аутоантител приводит к большому расхождению данных, полученных в разных условиях, и затрудняет сравнительные исследования контингентов больных
Существует успешный опыт иммунодиагностики патологии репродукции В частности, в качестве метода диагностики аутоиммунного оофорита хорошо зарекомендовало себя определение аутоантител методом непрямой иммунофлюоресценции [Colls J et al, 1995], есть попытки применения иммуноферментного анализа с использованием гомогенатов тканей в качестве антигенов-мишеней [Luborsky J J , 2002]
Попытки выявить связь между наличием органоспецифических аутоантител и нарушениями фертильности согласно данным литературы многочисленны и неоднозначны В источниках литературы описан широкий спектр молекул и клеточных и тканевых фракций, которые использовались в качестве антигенов для связывания циркулирующих аутоантител, при этом разные авторы использовали в диагностике антитела, направленные к различным аутоантигенам [Monnier-Barbanno Р et al, 2005] Из данных литературы следует, что диагностика различных аутоиммунных заболеваний органов репродукции связана с обнаружением широкого спектра антигенов, к которым направлены специфические антитела
Все вышесказанное определило актуальность разработки количественных методов определения антител к антигенам яичника, тканей
эндометрия и тестикул для диагностики аутоиммунных заболеваний органов репродукции
Цель исследования: Разработать иммуноферментные методы для количественного определения органоспецифичных аутоантител к антигенам яичника, тканей эндометрия и тестикул и оценить диагностическую значимость метода в выявлении аутоиммунных заболеваний органов репродукции
Задачи исследования:
-
Определение антигенной активности фракций органов-мишеней и получение стандартизованных антигенов для иммуноферментного определения органоспецифичных аутоантител
-
Определение внутренних стандартов органоспецифичных антиовариальных, антиэндометриальных и антитестикулярных антител
-
Создание иммуноферментных диагностикумов на основе отобранных антигенов и откалиброванных антител
-
Проведение оценки качества разработанных иммуноферментных диагностикумов
-
Определение диагностической эффективности определения органоспецифичных аутоантител разработанным иммуноферментным методом при аутоиммунных заболеваниях органов репродукции
Основные положения, выносимые на защиту.
1 Предложенный способ фракционирования биологического материала, полученного из гонад и эндометрия, позволил разработать иммуноферментные диагностикумы для количественного определения органоспецифических антиовариальных, антиэндометриальных и антитестикулярных антител, которые представляют собой информативные методы лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний органов репродукции
-
Результаты количественного иммуноферментного определения антиовариальных, антиэндометриальных и антитестикулярных антител коррелирует с клиническими диагнозами и другими параметрами клинико-лабораторной диагностики
-
Выявление антиовариальных, антиэндометриальных и антитестикулярных антител в динамике является важным диагностическим критерием при мониторинге эффективности проводимой терапии
Научная новизна и теоретическая значимость исследования. В
результате использования новых методов получения антигенов разработаны иммунохимические диагностикумы для количественного определения антител к овариальному, эндометриальному и тестикулярному антигенам Использование разработанных иммунохимических тест-систем позволило уточнить патогенез нарушений фертильности у супружеских пар и повысить эффективность диагностики аутоиммунных заболеваний органов репродукции
Практическая значимость исследования. В результате исследования
разработаны иммуноферментные диагностикумы для количественного
определения органоспецифичных антиовариальных, антиэндометриальных
и антитестикулярных антител, которые применяются в диагностике
аутоиммунных заболеваний органов репродукции Применение
количественного иммуноферментного метода определения
органоспецифичных аутоантител к антигенам органов репродукции позволило определить нормальные уровни антител, свойственные фертильным женщинам и мужчинам Превышение установленных в работе пороговых уровней циркулирующих органоспецифических аутоантител является лабораторно-диагностическим свидетельством соответственно аутоиммунного оофорита, аутоиммунного орхита и аутоиммунных реакций при хроническом эндометрите и эндометриозе Результаты выявления
антиовариальных, антиэндометриальных и антитестикулярных антител используются в практической деятельности врачей, занимающихся патологией репродукции и позволяют повысить рождаемость
Апробация работы. Основные результаты исследования были представлены на 26-й научной сессии, посвященной 100-летию кафедры акушерства и гинекологии СПбГМУ им акад И П Павлова, 1999 г , на 4-й всероссийской конференции эндокринологов, 2001 г, на Научно-практической конференции, посвященной 70-летию НИЦ здоровья матери и ребенка, Ереван, 2001 г, на 6-й Всероссийской научной конференции «Дни иммунологии в Санкт-петербурге», 2002 г, на 5-м российском форуме «Мать и дитя», 2002 г, на 1-й междисциплинарной конференции по акушерству, гинекологии и неонатологии «Здоровая женщина - здоровый ребенок», 2006 г, на 2-й российской конференции «Иммунология репродукции теоретические и клинические аспекты»
Публикации по теме работы. По теме диссертации опубликовано 17 печатных работ, среди них статья в журнале по перечню ВАК Минобрнауки РФ, 4 методических пособия для врачей, авторское свидетельство и 2 патента на изобретения, 4 статьи и 5 тезисов докладов и статей
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы и приложения на 28 страницах Текст диссертации содержит 19 таблиц и 23 рисунка, приложение - 11 таблиц и 15 рисунков Список литературы включает 74 названия работ отечественных авторов и 191 название работ иностранных авторов
