Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Формирование коллекции природных микромицетов и выявление штаммов с антибактериальными и москитоцидными свойствами Юскевич Виктория Викторовна

Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Юскевич Виктория Викторовна. Формирование коллекции природных микромицетов и выявление штаммов с антибактериальными и москитоцидными свойствами: автореферат дис. ... кандидата биологических наук: 03.02.03, 03.01.06 / Юскевич Виктория Викторовна;[Место защиты: Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии - Федеральное бюджетное учреждение науки], 2013

Введение к работе

Актуальность проблемы. Микроскопические грибы привлекают всё более пристальное внимание биотехнологов. Они продуцируют биологически активные вещества (БАВ) различной химической природы и специфики действия (антибиотики, ферменты, липиды, алкалоиды и другие метаболиты), нашедшие применение в сельском хозяйстве (Коломбет, 2007), медицине (Holliday, Cleaver, 2008) и пищевой промышленности (Сас- сон, 1987). Доля метаболитов грибов составляет более 50% от всех открываемых биологически активных природных соединений (Бибикова, Катлинский, 2008). Число известных видов грибов увеличивается с каждым годом (Hibbett, 2011) и, вероятно, достигает 1,5 миллионов видов (Hawksworth, 2001). Однако большинство видов микроскопических грибов остаётся ещё слабо изученным и невостребованным потенциалом.

Коллекции чистых культур являются важнейшими средствами для сохранения микробиологических ресурсов и поиска высокоэффективных штаммов грибов - антагонистов, перспективных для создания новых биопрепаратов. В ГНЦ ПМБ сформирована рабочая коллекция мицелиальных грибов. Коллекция создана на основе изолятов из погибших насекомых и образцов почв, собранных в ходе экспедиций в заповедники разных регионов России и СНГ. Целью этих экспедиций являлось создание коллекции культур энтомопатогенных и почвенных грибов из разных природно-климатических зон для последующего их изучения как возможных продуцентов биологически активных веществ. Значительная часть коллекции грибных культур состоит из представителей родов, использующихся в биотехнологической промышленности (при производстве средств защиты растений, антибактериальных препаратов, ферментов и т. д.). Представители рода Cordyceps являются богатыми источниками биологически активных веществ и издавна применяются в традиционной китайской медицине (Holliday, Cleaver, 2008). Экстракты, выделенные из культуры этого гриба, проявляют антиоксидантные, иммуномодулирующие, гипогликемические, гипотензивные, сосудорасширяющие и противораковые свойства, препятствуют процессам старения (Бабицкая и др., 2009).

При проведении научно-исследовательских работ в ГНЦ ПМБ выявлен ряд грибов, обладающих активностью против патогенных микроорганизмов, таких как Staphylococcus aureus, Serratia marcescens, Pseudomonas fluorescens, Bacillus cereus и Candida albicans, а также особо опасных патогенов Bacillus anthracis и Francisella tularensis. Кроме того, выявлен ряд штаммов и их метаболитов, активных в отношении личинок кровососущих комаров, которые могут быть использованы для производства инсектицидов нового поколения, не содержащих живых культур. В коллекции содержится также большое количество условно - патогенных грибов, которые могут быть использованы в качестве тест-культур для поиска продуцентов новых противогрибных препаратов.

Главной задачей любой микробиологической коллекции является поддержание и сохранение биологического материала в условиях, обеспечивающих неизменность основных свойств штаммов. Штаммы некоторых видов грибов, заложенные на хранение традиционными методами, не удается сохранить даже на протяжении одного-двух лет. Необходима дополнительная работа по оптимизации защитных сред и режимов заклад-

ки на хранение, а также по выбору питательных сред и стадий развития гриба, обеспечивающих наибольшую стабильность в процессе хранения.

Одним из перспективных для длительного хранения мицелиальных культур можно считать метод контактно-сорбционного обезвоживания (КСО). В ГНЦ ПМБ разработан метод КСО с применением ионообменной смолы для бактериальных штаммов (Пат. SU 1831498 А3, 1991). Экспериментально показано, что данный метод применим и для большинства видов мицелиальных грибов. Метод не является энергоемким, не требует сложного технологического и лабораторного оборудования и может быть использован даже в полевых условиях.

Цель исследования - формирование коллекции природных микромицетов, изучение биологических свойств коллекционных культур и отбор штаммов, перспективных для разработки новых бактерицидных, фунгицидных или москитоцидных препаратов.

Задачи исследования:

  1. Сформировать коллекцию мицелиальных грибов. Идентифицировать выделенные культуры.

  2. Усовершенствовать состав питательной среды для выделения и культивирования мицелиальных грибов.

  3. Определить стадии развития грибов, оптимальные для закладки их на длительное хранение.

  4. Адаптировать метод контактно-сорбционного обезвоживания для длительного хранения мицелиальных грибов разных таксономических групп.

  5. Провести исследование коллекции микромицетов на наличие продуцентов биологически активных веществ, перспективных для разработки новых бактерицидных, фунги- цидных и москитоцидных препаратов.

Научная новизна:

Создана коллекция паспортизованных штаммов мицелиальных грибов, являющаяся основой для разработки новых антибактериальных и москитоцидных препаратов.

Показано, что метод контактно-сорбционного обезвоживания обеспечивает длительное хранение (не менее 5 лет) мицелиальных грибов разных таксономических групп без утраты их свойств.

Впервые установлено, что грибы Calcarisporium arbuscula Preuss, Clonostachys candelabrum (Bonord.) Schroers и их метаболиты обладают москитоцидными свойствами.

Установлено, что 19 штаммов грибов, относящихся к классу Ascomycetes, обладают одновременно москитоцидными, бактерицидными и фунгицидными свойствами.

Практическая значимость:

В государственную коллекцию «ГКПМ - Оболенск» депонированы 38 штаммов мицелиальных грибов с высокой антагонистической или москитоцидной активностью.

Разработаны методические подходы для долгосрочного хранения мицелиальных грибов, включающие состав питательной среды, стадии развития грибной культуры и метод КСО.

148 культур грибов депонированы и включены в каталог центральной коллекции энтомопатогенных грибов Департамента сельского хозяйства США - ARSEF (международный уровень внедрения) .

Положения, выносимые на защиту:

    1. Созданная рабочая коллекция микромицетов, насчитывающая 1336 паспортизованных штаммов, является потенциальным источником для отбора штаммов - продуцентов биологически активных веществ.

    2. Метод контактно-сорбционного обезвоживания пригоден для длительного хранения мицелиальных грибов разных таксономических групп.

    3. Усовершенствованная питательная среда обеспечивает рост и спорообразование 320 видов микромицетов.

    4. Микромицеты, обладающие антагонистической активностью: 120 штаммов с фунгицидной активностью в отношении C. albicans, 202 штамма - антагониста S. aureus, S. marcescens или B. cereus; 105 штаммов - антагонистов B. anthracis, 95 штаммов - антагонистов F. tularensis и 182 штамма с москитоцидной активностью.

    Работа выполнена в отделе коллекционных культур ФБУН ГНЦПМБ в рамках отраслевой научно-исследовательской программы «Научные исследования и разработки с целью обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия и снижения инфекционной заболеваемости в Российской Федерации» (на 2011-2015 гг.): НИР 035 «Идентификация и изучение биологических, молекулярно-генетических, биохимических характеристик возбудителя туляремии, в том числе культур с атипичными свойствами», номер гос. регистрации 01201172652; НИР 042 «Совершенствование деятельности коллекции ФБУН ГНЦ ПМБ в соответствии с современными достижениями науки и технологии», номер гос. регистрации 01201172659; НИР 045 «Разработка и исследование новых дезинфектантов, антимикробных и инсектицидных препаратов», номер гос. регистрации 01201172662; в рамках ФЦП «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009 - 2014 годы)»: государственный контракт № 39-Д от 30.05.2012 «Разработка средств обеззараживания сибиреязвенных почвенных очагов с использованием новых композиций дезинфектантов и биологических препаратов», номер гос. регистрации 01201267512.

    Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена лично автором. Экспериментальные результаты, представленные в отдельных главах, получены совместно с сотрудниками ФБУН ГНЦ ПМБ: к.б.н. Л. И. Володиной, к.б.н. В. Е. Лиховидо- вым, Е. В. Быстровой, к.б.н. А. Н. Наумовым, Е. М. Асланян, Н. А. Коробовой, к.м.н. Л. И. Марининым, к.б.н. Н. А. Шишковой, д.б.н. В. М. Павловым, Г. М. Вахрамеевой, к.б.н. Е. И. Асташкиным, к.б.н. Д. М. Пачкуновым; а также к.б.н. А. В. Александровой (МГУ) и Б. А. Борисовым (ИПЭЭ РАН).

    Апробация работы. Материалы диссертации представлены на семи российских и международных конференциях: VII-й Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита государств «группы восьми» и санитарная охрана территорий государств-участников содружества независимых государств» (3-5 октября 2006 г., Оболенск, Московская обл.); Международной конференции «Горные экосистемы и их компоненты» (13-18 сентября 2007 г., Нальчик); Междисциплинарном Микологическом Форуме ( 23 апреля 2009 г., Москва); Международной конференции «Почвы и растительный мир горных территорий» (24-29 августа 2009г., Нальчик); Международной научно - практической конференции «Интегрированная защита растений: стратегия и тактика» (5-8 июля 2011 г., Минск); Международном научном симпозиуме «Защита растений: проблемы и перспективы» (29-31 октября 2012 г., Кишинёв); Третьем съезде микологов (12-15 октября 2012 г., Москва).

    План и аннотация диссертации обсуждены и одобрены на заседании Учёного совета ГНЦ ПМБ от 15 ноября 2007 г. (протокол № 8, приказ № 135 от 30.11.2007 г.) с изменениями, утверждёнными на заседании Учёного совета ГНЦ ПМБ от 19 ноября 2012 г. (протокол № 11). Результаты исследований доложены на заседании межлабораторного семинара ГНЦ ПМБ (протокол № 27 от 19 ноября 2012 г.).

    Публикации. Основное содержание работы отражено в 11 научных публикациях, в том числе в одной статье, опубликованной в рецензируемом журнале, рекомендованном ВАК.

    Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 205 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты и обсуждения, выводы и список литературы, включающий 101 работу отечественных и 123 работы зарубежных авторов, список сокращений и четыре приложения. Работа иллюстрирована 59 рисунками и 14 таблицами. Приложения состоят из списка видов микромицетов, хранящихся в коллекции (А); 38 справок о депонировании (Б); списка штаммов, депонированных в американскую коллекцию энтомопатогенных грибов - ARSEF (В) и списка публикаций по теме диссертации (Г).

    Похожие диссертации на Формирование коллекции природных микромицетов и выявление штаммов с антибактериальными и москитоцидными свойствами