Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1.Устойчивость возбудителей инфекционных болезней птиц к физико — химическим факторам 10
1.2. Четвертичные аммониевые соединения и пенообразующие дезинфицирующие препараты на их основе 26
Собственные исследования
2. Материал и методы исследования 36
2.1. Штаммы микроорганизмов, питательные среды, взрослые куры 36
2.2. Определение бактерицидных свойств препарата «Глуфар» 37
2.3. Изучение дезинфицирующих свойств препарата «Глуфар» 38
2.4. Изучение токсикологических показателей препарата «Глуфар» 39
2.5. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса и яиц кур 42
2.6. Изучение коррозионных и пенообразующих свойств препарата «Глуфар» 44
2.7. Электронно-микроскопические исследования микроорганизмов под воздействием препарата «Глуфар» 47
2.8. Статистическая обработка результатов исследований 48
3. Результаты исследований 50
3.1. Первичный отбор пенообразующих бактерицидных препаратов 50
3.2. Физико-химическая характеристика препарата «Глуфар» 52
3.3. Бактерицидные свойства «Глуфар» 55
3.4. Дезинфицирующие свойства препарата «Глуфар» 59
3.5. Токсикологические показатели препарата «Глуфар» 61
3.6. Коррозионные и пенообразующие свойства препарата «Глуфар» 66
3.7. Электронно-микроскопическое изучение ультраструктуры микроорганизмов после воздействия препарата «Глуфар» 73
3.8. Ветеринарно-санитарная оценка мяса и яиц кур 79
3.9.Производственные испытания препарата «Глуфар» в условиях птицефабрики 84
4.0бсуждение 91
5. Выводы 104
6. Практические предложения 105
7. Список литературы 107
8. Приложения 130
- Четвертичные аммониевые соединения и пенообразующие дезинфицирующие препараты на их основе
- Изучение дезинфицирующих свойств препарата «Глуфар»
- Статистическая обработка результатов исследований
- Электронно-микроскопическое изучение ультраструктуры микроорганизмов после воздействия препарата «Глуфар»
Введение к работе
Актуальность темы. Перевод птицеводства на промышленную технологию в некоторой степени осложнили проблему по охране здоровья птицы. Чрезвычайно высокая концентрация птиц на ограниченной территории при интенсивных методах содержания увеличивает вероятность очень быстрого распространения инфекции, приводит к изменению форм проявления известных инфекций и возникновению новых заболеваний, которые имеют чаще общую симптоматику поражения респираторных путей и желудочно-кишечного тракта, приобретая характер смешанных бактериально-вирусных и грибковых инфекций, отличающихся от классических форм проявления (Кот А.П., 1989). В связи с этим санация производственных зон, залов для содержания и выращивания птицы, оборудования и подсобных помещений является важной составной частью общего технологического процесса функционирования любого птицеводческого хозяйства, что непосредственно связано с состоянием здоровья птицы и ее продуктивностью. В практику промышленного птицеводства прочно вошел термин «биологическая усталость» птичников, обозначающий обильное обсеменение поверхностей помещений и оборудования различными микроорганизмами к концу технологического цикла выращивания птицы, что требует в последующем тщательной санации производственных помещений к следующему циклу.
Под санацией помещений и территорий вокруг них следует понимать профилактические или вынужденные мероприятия, включающие в себя дезинфекцию, дезинвазию, дезинсекцию, дератизацию и дезодорацию объектов. В связи с этим, в комплексе ветеринарно-санитарных мероприятий, проводимых в птицеводческих хозяйствах, по предупреждению и ликвидации инфекционных болезней птиц важное место занимает дезинфекция, которой достигается уничтожение условно патогенных микроорганизмов и возбудителей различных болезней во внешней среде. В
6 настоящее время разработаны и широко применяются в птицеводстве эффективные методы дезинфекции. Однако каждый из них наряду с высокой эффективностью не лишен определенных недостатков. Это связано с тем, что птицеводческие помещения оснащены оборудованием сложной конфигурации (клеточные батареи, транспортеры и т.д.), при обработке которые под действием химических соединений, используемых в качестве дезинфектанта, коррозируют и быстро приходят в негодность. Исходя из этого, разработка новых форм применяемых дезинфектантов, устраняющих недостатки существующих методов, является актуальной задачей ветеринарной практики.
В последние годы интенсивный поиск дезинфицирующих средств ведётся среди соединений, относящихся к классу катионных и амфолитных поверхностно-активных веществ (ПАВ), галоидактивных соединений, производных перекиси водорода, альдегидов, фенолов и других (Вахрушева.Д.В., 2002; Аржаков В.Н. и сотр., 2003; Николаенко В.П., 2003; Лазовская А.Л. и сотр., 2003). При этом исследования по изысканию дезинфицирующих средств проводятся по двум направлениям - синтез новых веществ и разработка композиций на основе выпускаемых промышленностью антимикробных препаратов. Последнее направление представляет для многих исследователей и разработчиков наибольший интерес, так как наличие ПАВ в дезинфицирующем средстве снижает агрессивность последних, а пенообразующий эффект обеспечивает более продолжительный контакт с поверхностями (Попов Н.И., 2002).
Исходя из этого, целью наших исследований явилось разработать пенообразующее дезинфицирующее средство для промышленного птицеводства и испытать его в лабораторных и производственных условиях.
Для выполнения цели исследования были выдвинуты следующие задачи:
1. Провести скрининг препаратов из класса четвертичных аммониевых соединений, обладающих бактерицидностью и свойствами ПАВ; разработать
на их основе композиционное дезинфицирующее средство;
Изучить бактерицидные свойства композиции;
Изучить коррозионные и пенообразующие свойства композиции;
Изучить токсикологические свойства композиции;
Изучить дезинфицирующие свойства предлагаемой композиции в лабораторных и производственных условиях.
Научная новизна работы. На основе скрининга препаратов из класса четвертичных аммониевых соединений отобран ряд препаратов, обладающих бактерицидными свойствами (Патент Российской Федерации на изобретение № 2223261 «М,К-диметил-К-бензил-Ы-[алкоксиполи(этиленокси)кабонил -метил] аммоний хлориды, обладающие бактерицидной активностью, и способ их получения»). На основе глутарового альдегида и препарата N-[изононилфеноксиполи(этиленокси)карбонилметил] аммоний хлорид, являющегося бактерицидом - пенообразователем разработано новое дезинфицирующее средство "Глуфар" для дезинфекции в промышленном птицеводстве. Показана возможность применения атомно - силового микроскопа для изучения ультраструктуры микроорганизмов, при воздействии дезинфицирующих средств, и подтверждения бактерицидного действия последних. Установлена высокая эффективность применения препарата "Глуфар" при проведении дезинфекционных мероприятий в промышленном птицеводстве.
Практическая ценность работы. Предложен пенообразующий препарат "Глуфар" для влажной дезинфекции в промышленном птицеводстве. "Временный технологический регламент на производство опытных партий препарата Глуфар А/В", утверждён директором Института органической и физической химии им. А.Е. Арбузова Казанского научного центра РАН, директором Всероссийского научно - исследовательского ветеринарного института и согласован начальником главного управления
ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан. "Методика проведения производственных испытаний по оценке эффективности влажной дезинфекции птичников пенообразующими препаратами "Натамин" и Тлуфар" при содержании маточного поголовья кур бройлерного и яичного направлений", утверждена Генеральным директором СПО "Татптицепром"; "Методика проведения производственных испытаний по оценке эффективности дезинфекции "Глуфаром", утверждена начальником Главного управления ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан.
На основе результатов изучения дезинфицирующих свойств пенообра-зующего дезинфектанта "Глуфар" разработано "Временное наставление по применению пенообразующего препарата "Глуфар" для дезинфекции в птицеводстве", утвержденное директором ВНИВИ 21 марта 2001 г.
Препарат "Глуфар" внедрен в практическое птицеводство Республики Татарстан в качестве дезинфицирующего средства.
На защиту выносятся следующие вопросы:
1. Препарат с пенообразующими свойствами "Глуфар" для влажной дезинфекции птичников в промышленном птицеводстве.
2. Коррозионные и пенообразующие свойств препарата "Глуфар".
3.Дезинфицирующая активность препарата "Глуфар" в лабораторно-производственных условиях.
4. Влияния препарата "Глуфар" на организм кур после проведения влажной дезинфекции птичников.
Апробация. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях учёного совета ВНИВИ в виде ежегодных отчётов (2000 -2003);
Международной конференции ветеринарных фармакологов и токсикологов, посвященной 125-летию Н.А.Сошественского, Казань, 2001; Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные
проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях», Барнаул, 2001; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях», Воронеж, 2002; Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса, Казань, 2003;
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ, в том числе Патент РФ на изобретение.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений.
Работа содержит таблиц 15, рисунков 14, диаграмм 3. Список литературы включает 228 источников, из них 66 иностранных.
Четвертичные аммониевые соединения и пенообразующие дезинфицирующие препараты на их основе
Начало изучению четвертичных аммониевых соединений (ЧАС) положил немецкий химик Hofman W., который в 1851 году синтезировал про 27
стейшую четвертично-аммониевую соль - йодистый тетраметиламмоний (Денисенко В.П., 1972). Все соединения, относящиеся к классу ЧАС можно разделить на моночетвертичные и бисчетвертичные, с общей формулой для моночетвертичных аммониевых соединений:
По данным Денисенко В.П. (1975), биологические и физико -химические свойства бисчетвертичных аммониевых соединений находятся в определенной зависимости от длины углеродной цепочки гидрофобного радикала, расстояния между четвертичными атомами азота и от наличия сложно-эфирной группы в гидрофобном радикале. Соединения с меньшим расстоянием (п=2) и величиной гидрофобного радикала R = СюН2\ обладают наибольшей поверхностной активностью, у них лучшая смачивающая способность. Кроме того, с уменьшением расстояния между четвертичными атомами азота увеличивается адсорбционная способность бисчетвертичных аммониевых солей на гидрофильных и гидрофобных поверхностях. В больших концентрациях данные соли обладают солюбилизирующей и эмульгирующей способностью, что представляет интерес для приготовления композиционных дезинфицирующих средств.
Интенсивный поиск таких дезинфектантов ведется среди соединений класса поверхностно активных веществ в сочетании с общеизвестными средствами, применяемыми для дезинфекции. Предпосылками для разработки таких комбинаций послужили обнаружение у поверхностно-активных соединений качеств, характерных для биоцидов. Так, например катионные ПАВ - производные бисчетвертич-ного аммония обладают антибактериальными, противогрибковыми и противовирусными свойствами (Писько Г.Т. и сотр., 1980; Миляновский А.Г. и сотр., 1995; Иванова Е.Б., 2000). Кроме того, представители данного класса соединений обладают эмульгирующей, солюбилизирующей и пенообразую-щей способностями (Данилевский В.М., 1985), что представляет интерес для создания дезинфектантов с моющими свойствами.
Катионые поверхностно-активные вещества последнее время находят все более широкое применение. Они обладают широким спектром антимикробного действия и сравнительно малотоксичны (Панкратова Г.П., 1984). Поверхностное натяжение на границе раствора и бактериальной клетки способствует проникновению ПАВ сквозь оболочку клетки, что вызывает физические изменения ее коллоидов (Миляновский А.Г. и сотр., 1995).
Досанов К.Ш. и сотр. (1987) указывают, что поверхностная активность - есть пенное свойство антисептика, позволяющее ему проникнуть сквозь оболочку микроорганизма и вступить в контакт с ее белками. Скопинская СМ. (1984) высказывает мнение, что на первом этапе бактерицидного действия происходит адсорбция ЧАС микробной клеткой. В результате — повышается проницаемость клеточной мембраны и, в конечном счете, происходит ее разрыв и высвобождение клеточного содержимого.
Гуздь О.В. (1980) так же предполагает, что ведущим звеном взаимодействия ПАВ с микроорганизмами является их способность концентрироваться на границе раздела двух фаз (вода-липид) и связываться с активными центрами цитоплазматической мембраны. Чернявская М.А. и сотр. (1984) связывают летальное действие катионных ПАВ с общей денатурацией жизненно важных протеинов и аутолизом. Разрушение оболочки открывает свободный доступ вещества к цитоплазме и цитоплаз-матическим включениям. Однако необходимо отметить, что не все представители ПАВ отвечают требованиям, предъявляемых к дезинфектан-там. По данным Петрова А.Д. и сотр. (1960) пенообразующая способность и антимикробная активность ПАВ зависят от вида катиона. У ка-тионных и анионных ПАВ с увеличением разветвленного гидрофобного радикала вышеперечисленные свойства снижаются. Анионные ПАВ обладают более высокими пенообразующими и антимикробными свойствами по сравнению с неионогенными соединениями.
Для ветеринарной практики особый интерес представляют катионные ПАВ. К ним относятся четвертичные аммониевые соединения (ЧАС), которые все более прочно входят в дезинфекционную практику и являются объектом для исследований дезинфекционистов.
Поиск все более прогрессивных и эффективных дезинфицирующих средств привело исследователей к созданию совершенно новых по своему составу и свойствам дезинфектантов, которые основываются на комбинировании химических соединений, относящиеся к различным классам, а именно к ПАВ и органическими и неорганическим соединениям, ранее используемых в качестве дезинфектантов. Угрюмовой B.C. и сотр. (1996) было разработано новое дезинфицирующее средство из класса функционально замещённых ЧАС - Ф-761. Исследованиями авторов показана малая токсичность, высокая активность препарата в отношении сальмонелл. Угрюмов О.В. и сотр. (1996) сообщают, что замена в ЧАС аниона хлора на анионы замещённых бензойных кислот позволяет получить соединение с более высокой активностью, чем исходные хлориды. Гатиатуллиным И.Г. (2002) было разработано принципиально новое дезинфицирующее средство для обеззараживания птичников на основе едкого натра и препарата Ф-761 (препарат "Натамин"), обладающее бактерицидными свойствами, превышающими таковые едкого натра в несколько раз. Исследования во данной области позволили сделать заключение, которое имеет неоценимое значение для дезинфекции в целом. При этом было убедительно показано это синергидное действие активных компонентов, способствует повышению бактерицидных свойств.
Изучение дезинфицирующих свойств препарата «Глуфар»
Дезинфицирующие свойства препарата «Глуфар» изучали с применением тест-объектов с последующим посевом на элективные питательные среды. В качестве тест-объектов использовали различные тест-поверхности размером 10x10 из материалов, применяемых в птицеводстве (дерево, нержавеющая сталь, оцинкованное железо, кафель).
Для контаминации тест-объектов использовали свежеприготовленную взвесь микроорганизмов E.coli, Si.aureus и Salmonella pullorum-gallina-rum, содержащую 500 тыс. микробных тел в 1 мл соответственно. Полученной взвесью инфицировали тест-объекты, которую наносили в смеси со стерильной «биологической защитой». Инфицированные таким образом тест-объекты подсушивали в течение 30 минут, после чего наносили соответствующие растворы препарата. По истечении срока экспозиции (30 минут, 1 и 2 часа) проводили нейтрализацию тест-объектов общепринятыми методами (Поляков А.А., 1975). Контрольные тест-объекты обрабатывали стерильной дистиллированной водой в тех же условиях. После экспозиции и нейтрализации с тест-объектов путем смыва и соскоба брали пробы, которые с целью удаления дезинфектанта и нейтрализата центрифугировали трехкратно при 5-6 тыс. об/мин, в течение 20-30 минут. Надосадочную жидкость сливали, а осадок высевали на элективные питательные среды и культивировали в термостате при температуре 37С в течение 7-10 суток. Оценку качества дезинфекции тест-объектов проводили по наличию или отсутствию роста микроорганизмов. Достоверность эксперимента констатировали при получении не менее трех совпадающих результатов.
В производственных условиях исследования проводились согласно «Методикг проведения производственных испытаний по оценке влажной дезинфекции птичников пенообразующими препаратами «Глуфар» и «Натамин» при содержании маточного поголовья кур бройлерного и яичного направлений».
Препарат применяли в концентрации 3% из расчета 1л/м экспозиция составляла 2 часа. При применении препарата учитывали технологический цикл проведения ветеринарно-санитарных мероприятий, принятых на птицефабриках. При проведении влажной дезинфекции препаратом «Глуфар» наряду с контролем влажной дезинфекции проведена оценка санации воздушной среды птичников при влажной дезинфекции методом седиментации; при этом учитывали общую бактериальную и грибковую обсемененность. 2.4. Изучение токсикологических показателей препарата «Глуфар» Токсикологические исследования «Глуфар» проводили в следующей последовательности: 1. Оценка параметров острой токсичности; 2. Изучение местно-раздражающего действия и действия на слизистые оболочки глаз; 3. Кожно-резорбтивное действие; 4. Изучение влияния препарата «Глуфар» на клинический статус, гематологические и биохимические показатели крови взрослых кур;
Острую оральную токсичность изучали на белых мышах, массой 18-22г. Вещество вводили непосредственно в желудок из такого расчета, чтобы объем вводимой жидкости не превышал 0,5 мл. Дозы исчисляли в мг действующего вещества на кг массы. Перед введением препарата животных не кормили в течение 3-4 часов и такое же время выдерживали после введения препарата. Опыты ставили в два этапа: предварительный и окончательный. На предварительном этапе между дозами брали широкие интервалы и каждую дозу вводили не более чем 5 животным, последовательно повышая и понижая дозы, в зависимости от того, погибали или оставались животные живыми. Дозы препаратов для окончательных опытов подбирали таким образом, чтобы низкая доза не вызывала гибель животных, высшая доза обеспечивала 100%-ную гибель и между ними должно быть не менее 5 промежуточных доз, вызывающих гибель больше или меньше 50% животных. Каждую дозу испытывали не менее чем на 10 животных. Опыты повторяли трехкратно. Наблюдения за животными вели в течение 14 дней, отмечая сроки появления клинических признаков отравления, его характер, сроки гибели животных и их выздоровления. Величину LD5o вычисляли по методу Кербера. Полученные величины LD5o при введении в желудок классифицировали по 4 классам токсичности в соответствии с ГОСТом 12.1.00776. Оценку местно-раздражающего действия проводили согласно методическим указаниям «Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно-допустимых уровней загрязнения кожи» (1980) в однократных и повторных (10-12 аппликаций) опытах. В экспериментах использовали 2 вида животных (кролики, белые крысы).
Для изучения раздражающего действия на кожу животных отбирали со светлой кожей. Время экспозиции составляло 4 часа. Препарат наносили в нативном виде из расчета 20 мг/см площади выстриженного участка. Площадь участка аппликаций для кроликов составляла 8 х 9 см, для крыс — 3 х 4 см. Реакцию кожи регистрировали по отношению экспозиции через 20 часов и затем в течение 14 дней после воздействия по сравнению с симметричными контрольными участками кожи того же животного.
Отмечали функционально-морфологические изменения кожи (эритема, отек, трещины, изъязвления, сухость, шелушение и др.) Выраженность эритемы определяли визуально или с помощью колориметрической линейки. Классификацию эритемы проводили в баллах. Величину отека определяли путем измерения кожной складки (мм).
Изучение местного действия препарата на слизистую оболочку глаза проводили однократно на кроликах. В один глаз вносили препарат в количестве 1-2 капли, другой глаз служил контролем. Регистрация изменений слизистой оболочки глаза, склеры, роговицы проводили визуально сразу после воздействия, через час и ежедневно в течение 14 дней. Отмечали выраженность гиперемии и отека слизистой оболочки, инъекцию сосудов клеры, состояние роговицы, количество и качество выделений из глаз.
Статистическая обработка результатов исследований
Цифровой материал был обработан статистически по методу вариационной статистики с учетом достоверности по формулам с применением показателя достоверности Р, устанавливаемого по таблице Стьюдента. Среднее арифметическое вычисляли по формуле: На основе этого вычисляли величину среднего квадратического отклонения 5(сигма) по формуле: 5 = J , где A — отклонение каждого результата анализа от М; п — число анализов; — сумма; Если п равняется или меньше 10 - вычитание единицы является обязательным. По 8ип вычисляли среднюю квадратичную ошибку (ш) по формуле: т = ± —т= Из значения "М" и m определяли критерий достоверности разности чисел (t) по формуле: На основании величины « t » и числа наблюдений (п) по таблице определяли критерий достоверности (Р). При сравнении показателей двух рядов (групп) применяли значение п=Пі+П2-2. Если Р 0,05 - изменения несущественны и недостоверны. Бактериологические исследования проводили совместно с кандидатом ветеринарных наук, доцентом Юсуповой Г.Р.; электронно-микроскопические - К.В.Н., доцентом Матвеевой ЕЛ. и доктором технических наук Бухараевым А.А.; изучение физико-химических, коррозионных и пенообразующих свойств - совместно с кандидагом химических наук, с.н.с. Угрюмовым О.В. и аспирантом ВНИВИ Шишко А.А.; ветеринарно-санитарную оценку мяса и яйца - в Испытательном Центре ВНИВИ - старшим научным сотрудником, к.в.н. Габдрауповой Х.С. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Первичный отбор пенообразующіїх бактерицидных препаратов
Первичному испытанию на бактерицидную активность были подвергнуты ряд синтезированных препаратов, относящихся к группе четвертичных аммониевых соединении и композиций на их основе, обладающих антикоррозионными и пенообразующими свойствами. Для данных исследований были использованы тест-микробы: Escherichia coli, Staphylococcus aureus и Salmonella pulloruin-gallinarum. Перечень препаратов, использованных для первичного отбора, представлен в таблице 1.
Из представленных в таблице 1 данных видно, что из числа исследованных препаратов (23) наибольшей бактерицидної! активностью обладали препараты 1632, 1629, 1672, 1629, 1М-[изононилфсноксиполи-(этиленокси)карбонилметил] аммоний хлорид, на которые получен Патент Российской Федерации на изобретение JVL 2223261 «К,їчГ-ди\іетпл-Ічі-бензил-Ы-[алкоксиполи(этиленокси)кабонилмстил] аммоний хлориды, обладающие бактерицидной активностью, и способ их получения», а также препарат «Глуфар»; при этом все препараты проявляли более выраженную антимикробную активность в отношении стафилококков. Наибольший интерес представляли препараты Ы-[изононилфеноксиполи (этиленокси)карбонилметил] аммоний хлорид и «Глуфар», когорые и были взяты нами для дальнейших экспериментов. Остальные же препараты, хотя и обладали бактерицидностью, не использовались нами в дальнейшем и могут служить объектом дальнейших исследований при условии разработки технологии промышленного синтеза.
Электронно-микроскопическое изучение ультраструктуры микроорганизмов после воздействия препарата «Глуфар»
Наиболее перспективным направлением поиска современных средств дезинфекции различных объектов ветеринарного надзора считается создание дезинфектантов на основе поверхностно-активных соединений, обладающих высокими бактерицидными свойствами и низкой токсичностью. В этой связи определённый интерес представляют электронно микроскопические исследования микроорганизма Salmonella pullorum-gallinarum при воздействии на него препарата «Глуфар» и его составляющих (глутарового альдегида и поверхностноактивного вещества - Ы-[изононилфеноксиполи(этиленокси)карбонилметил]аммоний хлорид) в сравнительном аспекте. Электронно-микроскопические исследования позволяют проследить на субмикроскопическом уровне механизм действия химических веществ на микробную клетку и изучить изменения её структуры.
Электронно-микроскопические исследования контрольных препаратов (до воздействия дезинфектантов) показали, что сальмонеллы имели типичную для грамотрицательных бактерий ультраструктуру. Они представляли палочки с закругленными краями, размеры которых колебались от 2 до 4 мк в длину и 0,2-0,8 мк в ширину и были представлены хорошо выраженными поверхностными структурами. Клеточная стенка толщиной до 130 А0 состояла из трехслойной извилистой мембраны и подлежащего слоя низкой электронно-оптической плотности с неравномерной толщиной. За клеточной стенкой следовала трехслойная цитоплазматическая мембрана толщиной до 80 А0, которая плотно прилегала к гранулярной цитоплазме, заполненной рибосомами и полисомами. Тонкофибриллярный нуклеоид располагался в центральной части клетки (рис. 1).
Рис. 1 Ультраструктура Salmonella pullorum-gallinarum. (контроль) х 15тыс. КС - клеточная стенка; ЦПМ - цитоплазматическая мембрана; ЦП — цитоплазма; П — пространство, отделяющее клеточную стенку от ЦПМ Клетки Salm.pul.-gal. после воздействия 0,3%-ного раствора глутарового альдегида в течение 15 минут претерпевали изменения поверхностных структур. При этом наблюдается разрыв клеточной стенки, отдельные участки выглядели размытыми, просматривалось незначительное отхождение клеточной стенки от протопласта. Цитоплазма сохраняла свою электронную плотность, уплотняясь к переферии в виде тяжей (рис 2) Рис. 2 Ультраструктура Salmonella pullorum-gallinarum после воздействия
0,3% глутарового альдегида (контроль) х 15тыс. РКС - разрыв клеточной стенки; ОКС - отхождение клеточной стенки от протопласта; Т - тяжи. Так, наружная мембрана клеточной стенки была заметно разрыхленной, местами размытой; подлежащий слой разрежен. Цитоплазматическая мембрана подвергалась фрагментарному разрушению. Внутренние компоненты были представлены уплотненным и размытым гранулярным материалом.
Изучение ультраструктуры клеток Salmonella pullorum-gallinarum после воздействия поверхностно - активного вещества Ы-[изононилфеноксиполи (этиленокси)карбонилметил] показало более мягкую картину разрушения внутренних структур клетки. Так, воздействие 0,3%-ного раствора ПАВ в течение той же экспозиции (15 минут) вызывало изменение в клеточной стенке, характеризующееся разрыхлением и локальным её размыванием. На полюсах клетки наблюдалось незначительное отхождение поверхностных структур, однако в целом клеточная стенка сохраняла видимую целостность. Цитоплазматическая мембрана имела разрыхленную структуру и на снимках плохо просматривалась (рис. 3). Рис. 3 Ультраструктура Salmonella pullorum-gallinarum после воздействия 0,3% раствора ПАВ х 15тыс.
РКС - разрыхление клеточной стенки; ЦСР - цитоплазма в стадии разрыхления гранулярного компонента.
Изучение воздействия препарата «Глуфар» на ультраструктуру клеток Salmonella pullorum-gallinarum показало, что действие его по-сравнению с глутаровым альдегидом более выражено, при этом в тех же условиях проведения эксперимента отмечается полное отхождение поверхностных структур клетки, контуры их трудноразличимы. Подлежащий слой клеточной стенки был сильно разрежен. Цитоплазма состояла из уплотнённого и размытого гранулярного компонента с участками коагуляции по периферии (рис.4)
Похожие диссертации на Разработка пенообразующего дезинфицирующего средства для промышленного птицеводства
