Введение к работе
Актуальность темы. Несмотря на определенные достижения в изучении этио-югии, диагностики, профилактики, эпизоотологии и эпидемиологии зооантропоноз-шх инфекций, таких как бешенство и лихорадка Ку, остаются не решенными и актуальными дальнейшая разработка и усовершенствование средств и методов иммунологического мониторинга и мер борьбы с ними.
В большинстве регионов России эпизоотическая ситуация по бешенству чрезвычайно сложна - резко активировались природные очаги этой инфекции, увеличитесь число случаев заболеваний среди диких плотоядных, домашних и сельскохозяйственных животных, отмечены случаи заболеваний людей с летальным исходом М.Г. Таршис, Н.А.Ковалев, П.П.Кузнецов и др., 1990; Г.С. Полюшкина, А.А. Горку-гов, 1998; В.А. Седов, И.Л. Бакулов, 1998; В.А. Ведерников и др., 1998; М.А. Сели-лов, 1987, 1998; Ю.М. Федоров и др. 1998). По данным ряда авторов (А.З. Равилов, 3.Х. Юсупов, В.А. Верхолетов, P.M. Ахметов, 1992; К.Н. Груздев, А.К. Груздев, 1997; З.М. Авилов, В.А. Седов, СМ. Коломыцев и др., 1998; В.И. Белоусов, 1998; А.З. Ра-шлов, Н.А. Хисматуллина, Р.Х. Юсупов и др., 1999 и др.) научно обоснованные про-:'ивоэпизоотические и противоэпидемические мероприятия должны основываться на ізучении особенностей краевой эпизоотологии этого зооантропоноза, а также свое-феменном выявлении возбудителя бешенства и изучении его биологических свойств.
Лихорадка Ку - одна из опасных зооантропонозов, продолжает оставайся важ-юй проблемой ветеринарии и медицины. Ее значение становится очевидным, если 'честь наличие массивных природных очагов инфекции в различных регионах Рос--ийской Федерации; восприимчивость к ней человека, практически всех видов мле-:опитающнх, птиц и клещей; образование антропоургических очагов; стойкость воз-іудителя к факторам внешней среды и разнообразие путей передачи. Учитывая бес-:имптомиое течение болезни у сельскохозяйственных животных, важное значение іриобретает постановка достоверного диагноза с использованием современных мето-[ов исследований.
Применяемые в настоящее время средства и методы иммунологического мони--оринга бешенства и лихорадки Ку имеют определенные недостатки: низкую чувст-іительность и недостаточную специфичность (световая микроскопия и реакция пре-щпитации, реакция длительного связывания комплемента), длительность получения іезультатов экспертиз и трудоемкость (биопроба и реакция нейтрализации на белых іьшіах). В связи с этим возрастает необходимость усовершенствования существую-цих и разработки ускоренных методов и эффективных средств иммунологического юииторинга этих зооантропонозов.
В последнее время для лабораторной диагностики инфекционных болезней гредложен метод иммуноферментного анализа (ИФА). В специальной литературе [меются, в частности, сообщения о применении иммунопероксидазной реакции для ібнаружения рабического антигена в патологическом материале и для оценки качества антирабических вакцин (А.Д. Ботвинкин и др., 1987; В.В.Недосеков, Т.Ф.Вишняков и др., 1998; P.Atanasiu et al, 1982; P.Marel, A.Wezel, 1982 и др.), атак-<е - для обнаружения антигена возбудителя лихорадки Ку в органах больных людей И.В. Токаревич и др., 1988; Е.ГТ. Горбачев и др., 1989; Н.К. Токаревич Н.К. и др.,
W) ГТптгтпщ тпттгг пгрспективность использования твердофазного ИФА для обна-РОССИИСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА
ружения антител в сыворотке крови людей, переболевших лихорадкой Ку и привить антирабическими вакцинами, а также у иммунизированных животных (А.Д. Ботви кин и др., 1986; АЛ. Бойко и др., 1987, Э.Я.Сазапова и др., 1988; 1997; Е.Ковачев 1989; RAtanasiu et al, 1977, 1978; P.Sureau, 1979; K.Nicholson, A.Prestage, 198 L.Szkudlarek, 1982 и др.). Положительные результаты в этом отношении были пол чены при использовании метода выделения возбудителя бешенства в культуре клст< (А.Г. Татаров, М.А. Селимов и др., 1985, 1987; R.G. Rudd, C.V. Trimarchi, 1983; W.j Webster, 1987 и др.), а также при изучении морфологических и биологичесю свойств возбудителя лихорадки Ку и его титровании (M.Arens, 1983; W.Schneidt 1989 и др.).
Метод флуоресцирующих антител (МФА) - один из наиболее точных мегодс
микроскопической диагностики бешенства. В практике наиболее широкое примен
' ние получил прямой МФА (М.А.Селимов и др., 1964; ГОСТ 26075-84). В литерагу]
имеются единичные сообщения о перспективности МФА для диагностики лихорадь
Ку (Р.Б.Гольдин и др., 1977; Р.И.Ситдиков и др., 1989).
Как известно, эффективность МФА во многом определяется качеством антир бического глобулина и флуорохрома. В лабораториях нашей страны применяют глі булины из сыворотки лошади (М.А. Селимов, Е.В. Клюева, 1966).
По данным литературы эффективными оказались флуоресцирующие airnrrej из антирабических сывороток хомяков и морских свинок (А.Д. Ботвинкин и др., 198 В.И. Белоусов и др., 1996 и др.). Однако для производственных целей использоваш хомяков и морских свинок менее приемлемо по экономическим соображениям.
Успешным в этом отношении оказалось и применение моноклональных aim тел (МКА), обладающих моноспецифичностью по сравнению с поликлональными ai тисыворотками и позволяющих проводить идентификацию штаммов рабического ві руса, в частности, дифференцировать серотипы группы бешенства (М.А.Селимов др., 1982, 1987, 1994; А.Д.Ботвинкин и др., 1989, 1990; И.В.Кузьмин и др., 1992, 1991 T.Wiktor el al.,1978, 1980; T.Wiktor 1979 и др.), а также выявлять фазовые различг между штаммами C.bumetii ( В.Себерзов и др., 1987; Е.В.Прохватилова и др., 199; Z.Williams, 1984; G.Scott, 1989 и др.).
Однако вопросы полного и своевременного проведения мер борьбы и нрофі лактики в неблагополучных хозяйствах, совершенствования существующих и разр; ботка новых методов и средств иммунологического мониторинга бешенства и лих< радки Ку по-прежнему остаются важной проблемой вегеринарии и здравоохранения.
При этом, как показывает анализ литературы, наиболее перспективным являє' ся использование культур клеток, применение МФА и ИФА, а также идентификащ возбудителя бешенства и лихорадки Ку с помощью МКА.
Цель и задачи исследований. Цель исследования - разработать и усовершеї ствовать средства и методы иммунологического мониторинга бешенства и лихорадк Ку; комплексное проведение эпизоотологического и иммунологического мониториї га в очагах рабической инфекции и лихорадки Ку и усовершенствовать меры борьб с этими инфекциями. В соответствии с целью работы были поставлены следугощк задачи:
- изучить эпизоотолого-эиидсмическую ситуацию по бешенству в Республика Татарстан (РТ) и Башкортостан (РБ) за период 1970-1999 гг. и 1974-1999 гг. соотве ствешю и выяснить роль разных видов животных в сохранении рабического вируса биотопах;
изучить антигенные и биологические свойства эпизоотических изолятов виру-1 бешенства, циркулирующих на территории Татарстана и Башкортостана;
разработать и усовершенствовать средства и методы иммунологического мо-иторинга бешенства и лихорадки Ку;
провести сравнительную оценку эффективности общепринятых и разработан-ых методов иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку;
разработать нормативно-технические документы на созданные средства и ме-эды иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки Ку и внедрить научно Зосноваиные рекомендации по усовершенствованию системы организационных и іециальньїх мероприятий по борьбе с бешенством и лихорадкой Ку.
Научная новтна. Впервые проведен ветерииарно-географический анализ зспространения бешенства на территории Татарстана и Башкортостана за 1970-1999 \ и 1974-1999 гг. соответственно, разработаны карты эпизоотологического райони-эвания территории республик и составлен краткосрочный прогноз энзоотии бешен-гва в РТ; изучены некоторые биологические свойства изолятов вируса бешенства, уделенные на территории РТ и РБ, и установлено их антигенное соответствие вак-инньш штаммам. Впервые разработаны наборы препаратов для обнаружения возбу-ателей бешенства и лихорадки Ку экспресс-методами ИФА и МФА, выделением эзбудителя бешенства в культуре клеток иевриномы Гассерова узла крысы ІГУК-1). Эти методы позволяют в более ранние сроки по сравнению с биопробой на глых мышах и с более высокой чувствительностью, чем РДСК обнаруживать специ-ические антигены указанных возбудителей болезни в патологическом материале, ест в культуре клеток НГУК-1 по чувствительности не уступает интрацеребральной «окуляции белых мышей. Кроме того, разработаны тест-системы, обеспечивающие ыстрое выявление специфических антител в сыворотках крови, вакцинированных ротив бешенства и лихорадки Ку (патент РФ № 1824196 от 5.03.94 г.).
С помощью полного набора антинуклеокапсидных МКА впервые идентифици-эваны штаммы вируса бешенства, циркулирующие на территории нашей страны, и ;тановлены их антигенные различия. Получены МКА к возбудителю лихорадки Ку итамм "Барабинский", 1 фазы), обеспечивающие межфазовую дифференциацию вбудителя болезни.
Практическая значимость. Результаты проведенных исследований вошли в ізработанньїе и внедренные в практику нормативно-технические документы (см. п.п. 1 "Практические предложения").
Апробация результатов исследований. Основные положения диссертации зложены на: 1) Отчетных научных конференциях Всероссийского научно-;следовательского ветеринарного института (1983-1999 гг). 2) 10 региональных и :спубликанских научно-практических конференциях (Казань, 1984, 1987, 1992, )95-2000; Троицк, 1989; Киров, 1999). 3)4 Юбилейных научных конференциях (Ки-т, 1998; Москва, 1998, 1999; Екатеринбург, 1999). 4) 7 Всесоюзных и Всероссий-сих научных конференциях и семинарах (Москва, 1985-1987; Львов, 1988; Влади-ир, 1995; Щелково, 1996). 5) 5 Международных научных конференциях и совещани-і (Москва, 1991; Воронеж, 1997; Казань, 1998, 2000; Покров, 1998). 6) 3 съездах (11о-юнбирск, 1992; Казань, 1995,2000).
Наборы препаратов для лабораторной диагностики бешенства и лихорадки Ку гтодами ИФА и МФА в 1991 и 1999 гг. экспонировались в павильоне "Ветеринария" ДНХ СССР и Всероссийского выставочного Центра и были отмечены серебряной
медалью (1991) и медалями Лауреата ВВЦ (1999).
Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликован* ПО научных трудов. Разработаны 5 наставлений, 5 инструкций, 5 технических уело вий, две рекомендации, санитарные правила. Получен патент РФ, выпущен информа ционный бюллетень.
Основные положения диссертации, выдвигаемые на защиту:
характеристика эпизоотолого-эпидемиологической ситуации по заболеваемо сти бешенством в Татарстане и Башкортостане за 1970-1999 гг. и районирование тер ритории республик по степени распространения заболевания;
анализ заболеваемости бешенством среди разных видов животных и их роль і развитии эпизоотического процесса;
выделение и идентификация возбудителей бешенства и лихорадки Ку, изуче ние антигенных и биологических свойств изолятов рабического вируса;
оценка эффективности общепринятых и разработка и усовершенствованш средств и методов иммунологического мониторинга бешенства и лихорадки К} (МФА, ИФА, МКА и культуры клеток) на основе применения поли- и моноклональ-ных антител;
иммунологический мониторинг бешенства и лихорадки Ку в хозяйствах, неблагополучных по данным заболеваниям;
научно-теоретическое и практическое обоснование путей усовершенствования мероприятий ио борьбе с бешенством и лихорадкой Ку с учетом эпизоотическое ситуации и результатов мониторинга.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 377 страницах v. включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований (6 глав), обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список использованной литературы (всего 822 источника, в том числе 299 иностранных). Диссертация иллюстрирована 68 таблицами, 4 схемами, 16 фотоірафиями и 29 рисунками. Приложения содержат 37 страниц.
Похожие диссертации на Разработка средств и методов иммунологического мониторинга и мер борьбы при бешенстве и лихорадке КУ животных
