Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 9
Морфология дирофилярий и их развитие в организме собак 9
Промежуточные хозяева дирофилярий 12
Распространение и эколого-эпизоотологическая характеристика дирофиляриоза 19
Влияние дирофилярий на организм собак и человека 34
Диагностика дирофиляриоза собак 40
Профилактика дирофиляриоза собак 49
Собственные исследования 54
Материалы и методы 54
Развитие Dirofilaria immitis Leidy, 1856 в организме собак 64
Развитие D.repens Railliet et Henry, 1911 в организме собак 66
Сроки развития D.immitis в организме комаров 68
Сроки развития D.repens в организме комаров 70
Эколого-эпизоотологическая характеристика дирофиляриоза собак 75
1. Распространение дирофиляриоза собак городской и сельской популяций 75
2. Плотность популяции D.repens в организме собак разного возраста 79
3. Количественные показатели инвазированности собак D.repens в разное время года 82
4. Влияние породы и пола собак на инвазированность дирофиляриями 87
5. Инвазированность дирофиляриями квартирных, дворовых, прифермских, бродячих и служебных собак 90
6. Зараженность разных видов комаров личинками дирофилярий 92
2.6.7. Сезонная динамика численности комаров - промежуточных хозяев D.repens 105
2.7. Влияние D.immitis и D.repens на клинические, гематологические и биохимические показатели собак 107
2.8. Прижизненная диагностика дирофиляриоза 111
2.8.1. Количественный метод прижизненной диагностики дирофиляриоза собак 111
2.8.2. Суточная периодичность микрофилярий в крови собак, инвазированных D.immitis и D.repens 113
2.8.3. Сезонная динамика микрофиляриемии в крови собак, инвазированных D.immitis и D.repens 119
2.8.4 Использование дексаметазона для провокации микрофиляриемии при дирофиляриозе собак 121
2.9. Разработка оптимальной схемы профилактики дирофиляриоза собак 123
2.9.1. Персистентность действия препаратов из группы макроциклических лактонов против микрофилярий 123
2.9.2. Испытание оптимальной схемы профилактики дирофиляриоза собак с применением ивермека 125
Выводы 137
Практические предложения 141
Литература 142
Приложение 173
- Промежуточные хозяева дирофилярий
- Диагностика дирофиляриоза собак
- Развитие Dirofilaria immitis Leidy, 1856 в организме собак
- Зараженность разных видов комаров личинками дирофилярий
Введение к работе
Актуальность проблемы. Дирофиляриоз собак вызывается нематодами Dirofilaria immitis (Leidy, 1856), паразитирующими в правом желудочке сердца и легочной артерии и D.repens (Railliet et Henry, 1911), локализующимися в подкожной клетчатке.
Дирофиляриоз сердца и подкожной клетчатки широко распространен во многих странах мира, в том числе, в Российской Федерации и в странах Ближнего Зарубежья (Д.П.Козлов, Н.А.Скворцова, 1962; Т.П.Худавердиев, Ш.М.Джафаров, 1979; И.А.Архипов, С.В.Березкина, Н.В.Демидов, 1983; Д.Р.Архипова, 1994 и др.).
В последние годы отмечена тенденция к широкому распространению этого заболевания и расширению ареала его распространения не только на юге, но и в средней полосе России (М.В.Сухова, 2002; А.В.Кудинов, Л.В.Анникова, 2002; И.А.Архипов, Д.Р.Архипова, 2002 и др.).
По мнению В.А.Башанкаева, Д.Р.Архиповой (2002) основными причинами распространения дирофиляриоза являются неограниченные перемещения животных из одного региона в другой, плохо обустроенные оросительные каналы, создающие условия для массового выплода комаров -промежуточных хозяев дирофилярий, ввоз заболевания из других стран, ограничение использования химических средств защиты от гнуса, а также недостаточный арсенал антгельминтиков против взрослых дирофилярий.
Паразитируя в сердце, D.immitis вызывают расстройство кровообращения в результате механической закупорки и прогрессирующего эндоартрита. Заболевание приводит к эмболии, тромбозу кровеносных сосудов, а в дальнейшем циррозу печени, асциту и гибели собак (S.Kume, 1970; C.M.Savell, 1974; M.C.Sharma, S.P.Pachauri, 1982; R.B.Atwell I.B.Buoro, 1983; W.P.Bredal et al., 1998; W.Tarello, 2000 и др.).
При заражении собак D.repens у них появляются поражения кожи в области головы и конечностей в виде папулезного дерматита и множественных узелков с изъязвлениями (D.W.Scott, T.C.Vaughn, 1979).
Дирофиляриоз представляет большую опасность для человека. В России и в странах СНГ известно свыше ПО случаев поражения человека D.repens (Т.А.Авдюхина и др., 1996; В.Ф.Постнова и др., 1997). При этом у людей отмечали серьезную патологию в форме подкожных или субконъюнктивальных узелков, отечности и поражения глаз (А.М.Водовозов, Г.Р.Ярулин, С.В.Дьяконова, 1971; Н.А.Азарова, В.П.Прейдер, 1999).
В предыдущие годы дирофиляриозу собак было посвящено большое количество работ, в том числе отечественных исследователей (А.М.Петров, 1931; Э.И.Шлейхер, 1948; В.В.Насилова, 1952; А.Н.Каденации, 1958; Р.Ш.Делянова, 1962; А.А.Гаврилов, 1976; Т.П.Худавердиев, 1979; И.А.Архипов, С.В.Березкина, Н.В.Демидов, 1983; М.В.Сухова, 2002; Б.Л.Гаркави, Ф.С.Михно, 2002 и др.) и иностранных (L.L.Walters et al., 1981; C.Genchi et al., 1991; B.E.Stromberg et al., 1995; A.Bidgoot, G.H.Collins, 1996; I.Kanev et al., 1996; C.A.Himonas, 1996; W.Tarello, 2000; G.Petruschke et al., 2001; G.Baneth et al., 2002).
Указанные исследователи сообщали сведения, касающиеся, в основном, распространения дирофиляриоза в том или ином регионе. В литературе имеются данные М.В.Суховой (2002) об эпизоотологическом надзоре при дирофиляриозе плотоядных в условиях Среднего и Нижнего Поволжья. Однако до сих пор в литературе недостаточно освещены количественные параметры развития D.immitis и D.repens в организме дефинитивного и промежуточного хозяев, эколого-эпизоотологическая характеристика заболевания собак в условиях степной зоны юга России на примере Калмыкии, влияния разных видов дирофилярий на организм собак, количественный метод диагностики дирофиляриоза, суточная и сезонная
периодичность микрофилярий в крови собак и влияние различных факторов на заражение собак дирофиляриями.
Актуальным для практики является также обоснование оптимальной схемы профилактики дирофиляриоза собак с учетом эколого-эпизоотологических особенностей заболевания.
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы явилось изучение количественных параметров развития D.immitis и D.repens в организме собак и комаров, эколого-эпизоотологической характеристики дирофиляриоза собак в условиях Республики Калмыкия и разработка оптимальной схемы профилактики болезни.
Для выполнения поставленной задачи мы считали необходимым изучить:
- сроки развития D.immitis и D.repens в организме собак и комаров;
- распространение дирофиляриоза собак городской и сельской
популяции;
влияние возраста, пола, породы, типа содержания на зараженность собак D.repens;
численность комаров и их зараженность личинками дирофилярий;
влияние D.immitis и D.repens на организм собак;
количественный метод диагностики дирофиляриоза собак, суточная и сезонная периодичность микрофиляриемии в крови собак;
- разработка оптимальной схемы профилактики дирофиляриоза собак.
Научная новизна. Впервые установлено распространение
дирофиляриоза и плотность популяции D.repens в организме собак городской и сельской популяций в условиях Республики Калмыкия. Максимальная инвазированность собак D.repens установлена в возрасте 4-6 лет. Выяснено влияние пола, породы, условий содержания на зараженность собак дирофиляриями. Уточнены сроки развития D.immitis и D.repens в организме
собак и комаров в условиях нашей страны. Установлена диапауза в микрофиляриемии при дирофиляриозе в дневное и зимнее время и разработан количественный метод прижизненной диагностики дирофиляриоза с использованием счетной камеры и препарата для провокации микрофиляриемии. Оценена активность и персистентность микрофилярицидного действия некоторых препаратов из группы макроциклических лактонов.
Практическая значимость. Полученные результаты изучения сроков развития D.immitis и D.repens в организме дефинитивного и промежуточного хозяев, эколого-эпизоотологической характеристики дирофиляриоза собак являются основой для усовершенствования профилактики этого заболевания.
Рекомендуется проводить диагностику дирофиляриоза с учетом дневной диапаузы в микрофиляриемии. Результаты испытания абиктина и ивермека с целью профилактики дирофиляриоза рекомендованы для включения в Наставления по их применению.
Разработана научно-обоснованная оптимальная схема профилактики дирофиляриоза собак. Рекомендации по профилактике дирофиляриоза собак утверждены Комитетом ветеринарии Администрации Нижегородской области (2003).
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на научной конференции Всероссийского общества гельминтологов (1994), научной конференции ВОГ "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями" (г. Москва, 2002, 2003).
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Сроки развития D.immitis и D.repens в организме дефинитивного и промежуточного хозяев;
2. Распространение дирофиляриоза собак городской и сельской
популяций Республики Калмыкия;
3. Влияние сезона года, возраста, пола, породы и типа содержания
собак на зараженность их D.repens;
Влияние D.immitis и D.repens на организм собак;
Количественный метод диагностики дирофиляриоза собак, суточная и сезонная периодичность микрофиляриемии в крови;
6. Оптимальная схема профилактики дирофиляриоза собак.
Публикации. По материалам исследований опубликовано 5 статей и
подана заявка на Патент № 1114237 (2003 г.).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 180 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы и собственных исследований, включающих материалы и методы, 9 глав, обсуждения, выводы, практические предложения. Список литературы содержит 291 источников, в том числе 81 отечественных и 210 иностранных. Работа иллюстрирована 31 таблицей, 3 рисунками и 3 фото. Приложение на 9 страницах.
Промежуточные хозяева дирофилярий
По данным многочисленных исследований (T.L.Bancroft, 1904; E.Roubaud, 1937; C.Yen, 1938 и др.) промежуточными хозяевами дирофилярий являются комары родов Aedes, Culex и Anopheles. Однако в качестве промежуточного хозяина дирофилярий могут служить и блохи Ctenocephalides canis и C.felis (W.A.Summers, 1940). В Америке D.immitis, преимущественно, передаются комарами Ae.ochlerotatus (C.Yen, 1938; W.E.Kershaw et al., 1953; J.J.Arnott, J.D.Edman, 1978; K.Loftinetal., 1995). E.D.Stueben (1954) провел сбор кровососущих насекомых с собак с целью обнаружения в них микрофилярий D.immitis. Собранных насекомых содержали в инсектарии. При вскрытии на 6-7-й дни после сбора инвазионных личинок D.immitis находили в гемоцеле головы и груди Ctenocephalides felis, C.canis, Xenopsylla cheopis, Pulex irritans, Echidnophaga gallinacea, Orchopeas wickhami. По данным K.W.Ludlam et al. (1970) более 60 видов комаров могут быть потенциальными промежуточными хозяевами дирофилярий. Промежуточными хозяевами обоих видов дирофилярий являются во Франции Ae.detritus, Ае. caspius (O.Bain, 1978). В экспериментальных условиях микрофилярии D.immitis развивались в организме калифорнийских штаммов A.freeborni, Ae.sierrensis и Ae.dorsalis (C.J.Weinmann, R.Garcia, 1974; L.L.Walters et al., 1981). Комары Armigeres subalbatus - основной переносчик D.immitis в Малайзии (M.Zahedi et al, 1986).
Клетки мальпигиевых сосудов и мышц груди комаров -промежуточных хозяев дирофилярий способны выделять вещества, блокирующие развитие личинок дирофилярий и приводящие к их инкапсуляции и меланизации. Интенсивность этих процессов зависит от восприимчивости комаров, степени их зараженности микрофиляриями и других факторов (B.N. Christensen, K.F.Forton, 1986; V.M.Talluri, G.Cancrini, 1994). Так как известно, что миграция и развитие личинок дирофилярий в организме комаров может приводить к их гибели (J.K.Nayar, D.M.Sauerman, 1975), меланизация является защитной реакцией комаров, ограничивающей число личинок и, тем самым, гарантирующей выживаемость самих комаров. По данным B.N. Christensen, K.F.Forton (1986), B.N.Christensen, J.W.Tracy (1989) наличие кристаллов оксигемоглобина, образующихся в результате лизиса кровяных клеток, служит основным фактором, снижающим численность личинок дирофилярий в организме комаров.
S.A.Wright, K.W.Boyce (1989) основным переносчиком дирофилярий в шт. Калифорния (США) считают комаров Ae.sierrensis. F.Mahmood, J.K.Nayar (1989) в лабораторных условиях заражали комаров Ae.aegypti, являющихся одним из промежуточных хозяев дирофилярий в условиях США, D.immitis и изучали влияние инвазии на выживаемость комаров. Инвазионные личинки D.immitis вызывали гибель комаров во время миграции в мальпигиевы сосуды, в период линьки L3 в L4 и при выходе личинок из мальпигиевых сосудов. Основной причиной гибели комаров был разрыв мальпигиевых сосудов из-за постоянного движения микрофилярий D.immitis и частичной их гибели.
Комары Ae.polynesiensis и Ae.samoanus являются переносчиками D.immitis в Самоа (W.A.Samarawickrema et al., 1992). E.M.Zytoon et al. (1992) в лаборатории заражали комаров Ae.albopictus D.immitis путем питания на зараженной собаке или при помощи специального аппарата. Наибольшее количество развивающихся личинок дирофилярий находили в мальпигиевых сосудах. Инвазионных личинок в максимальной степени обнаруживали в хоботке комаров. Авторы предполагают, что в условиях Гавайских островов комары Ae.albopictus могут служить промежуточным хозяином дирофилярий. В Италии Ae.caspius, Anopheles maculipennis, Сх modestus и Cx.pipiens являются переносчиками дирофилярий (C.Genchi, B.Di Sacco, G.Cancrini, 1992; F.Pollono, L.Rossi, G.Cancrini, 1998). C.C.Wu, P.C.Fan, G.N.Chang (1995) экспериментально заражали комаров Ae.aegypti D.immitis при их кровососании на зараженной собаке, привезенной из Японии. Через 10-33 дня после экспериментального заражения в 93% из 41 экз. вскрытых комаров обнаруживали инвазионных личинок D.immitis.Hs 725 обнаруженных личинок 24, 34, 20 и 20% обнаружены соответственно в мальпигиевых сосудах, голове, груди и брюшке комаров. В естественных условиях Португалии по данным A.M.Araujo (1996) промежуточными хозяевами дирофилярий являются комары Cx.thieleri, Cx.pipiens, Ae.caspius, An.atroparvus. Комары Ae.taeniorhynchus, Ae.scapularis, Ae.aegypti, Cx.quinquefasciatus, Cx.declarator и Cx.nigripalpus являются наиболее вероятными промежуточными хозяевами D.immitis в Бразилии (N.Labarthe et al., 1998; M.L.Serrao, N.Labarthe, R.Lourenco-de-Oliveira, 2001).
F.C.Macedo, N.Labarthe, R.Lourenco-de-01iveira (1998) изучали восприимчивость комаров Ae.scapularis штамма Рио-де-Жанейро (Бразилия) к заражению D.immitis в лабораторных условиях в сравнении с восприимчивым к заражению штаммом комаров Ae.aegypti. Комаров обоих видов заражали D.immitis при помощи специального аппарата (L.C.Rutledge, R.A.Ward, D.J.Gould, 1964) кровью, содержащей 60-70 микрофилярий в 20 цл. Вскрытие комаров проводили через 9 дней, 2 и 3 недели после заражения. Среднее количество инвазионных личинок составило 8,4 и 6,9 экз. соответственно в комарах Ae.aegypti и Ae.scapularis. У Ae.scapularis наблюдали меланизацию 28% личинок дирофилярий. Таким образом, комары Ae.scapularis контролируют процесс развития личинок, выражающееся в меланизации, но не подавляют его и, тем самым, могут служить промежуточным хозяином D.immitis.
Диагностика дирофиляриоза собак
Диагностика дирофиляриоза традиционно базируется на обнаружении и идентификации микрофилярии в крови различными методами. Также необходимо принимать во внимание историю болезни и выраженность клинических признаков.
Одним из самых простых и быстрых методов обнаружения микрофилярии является метод прямого исследования мазка крови при малом увеличении микроскопа. Движущиеся микрофилярии хорошо заметны в поле зрения. Иногда их трудно увидеть из-за эритроцитов. Однако этот метод приемлим, если в крови есть микрофилярии. При "скрытой" форме дирофиляриоза и низкой интенсивности инвазии этот метод бессмысленен. Недостатком этого метода также является невозможность провести идентификацию микрофилярии по видам (J.D.Kelly, 1973).
Для диагностики дирофиляриоза можно использовать метод исследования сыворотки крови. Пробу крови отстаивают, каплю сыворотки помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа. Живые микрофилярии при большой концентрации переходят в сыворотку и их легко обнаруживают, так как в сыворотке нет эритроцитов. Недостатком этого метода является невозможность выявить низкую интенсивность инвазии (J.D.Kelly, 1973).
Для обнаружения микрофилярии в крови J.I.Knott (1939) предложил метод, сущность которого заключается в том, что в пробирку с 1 мл свежей крови добавляется 10 мл 2%-ного раствора формалина и смесь центрифугируется в течение 5 минут при 1000-1500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость удаляют, осадок смешивают в равных количествах с 0,1%-ным раствором метиленовой сини. Из окрашенного осадка делают влажный мазок и исследуют под микроскопом. G.Burch, H.E.Blair (1951) в пробирку с 2 мл цельной крови добавляли 1 мл 2%-ного раствора сапонина и центрифугировали 60 сек. при 4500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливали, осадок исследовали под микроскопом. Этот метод более чувствителен в отношении выявления слабой интенсивности инвазии. W.L.Newton, W.H.Wright (1956) усовершенствовали метод J.Knott (1939). 1 мл цельной крови смешивали с 10 мл 2%-ного раствора формалина и смесь центрифугировали в течение 5 минут при 1500 оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливали, осадок смешивали в равных частях с раствором метиленовым синим. 1 каплю окрашенного осадка помещали на предметное стекло, накрывали покровным и исследовали под микроскопом. Этот метод имеет ряд преимуществ перед другими: все микрофилярии концентрируются в небольшом количестве осадка, состоящего, в основном, из лейкоцитов и разрушенных гемолизированных эритроцитов. Это особенно важно при установлении заражения дирофиляриями при слабой инвазии. Данный метод достаточно надежный, при котором легко измерить длину и ширину микрофилярий.
В химиотерапевтических опытах необходимо проводить количественное определение микрофилярий. J.R.Lindsey (1965) для подсчета микрофилярий предложил метод, при котором кровь набирают в шприц с гепарином, смешивают. Затем делают 3 мазка (2 мл), высушивают их и окрашивают раствором Гимза. Если в мазке обнаруживают, в среднем, менее 1 микрофилярий, то считают, что в 1 мл цельной крови меньше 50 микрофилярий.
O.W.Schalm, N.C.Jain (1966) предложили метод выявления микрофилярий гематокритным методом, при котором кровь помещают в стандартные микрогематокритные пробирки и центрифугируют в течение 5 минут при 8500 обор./мин. После центрифугирования капиллярные трубки помещают горизонтально на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Микрофилярий совершают активные волнообразные движения. При применении данного метода можно исследовать маленький объем крови и невозможно дифференциировать микрофилярий по видам. Авторы описали метод подсчета микрофилярий, используя модифицированный метод Knott. Определенный объем окрашенного осадка, полученный при использовании этого метода, помещают на предметное стекло, закрывают покровным, исследуют под микроскопом и далее подсчитывают. Однако этот метод дает приблизительное количество микрофилярий в 1 мл крови.
J.J.Mines (1967) предложил использовать для подсчета микрофилярий в крови камеру H.M.Gordon, H.V.Whitlock (1939). При использовании этого метода 0,5 мл цельной крови лизируют добавлением 7 мл 0,04%-ного раствора гидрооксида аммония. Камеру заполняют кровью и исследуют под микроскопом, микрофилярий подсчитывают. Затем количество подсчитанных микрофилярий умножают на 100 и получают число микрофилярий в 1 мл крови.
На Филиппинах ветеринарными специалистами для диагностики дирофиляриоза собак используется метод, предложенный I.Ohishi, S.Kobayashi (1961). 1 мл крови помещают в центрифужную пробирку с 9 мл Ohishi раствора, перемешивают и центрифугируют при 1500 обор./мин. в течение 5 минут. Надосадочную жидкость удаляют, осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Ohishi раствор состоит из 50 мл метиленовой сини, 2 г цитрата натрия, 50 мл ацетона и 900 мл дистиллированной воды. По данным W.L.Newton (1968) микрофиляриемия может наблюдаться в течение 7,5 лет после заражения. Метод фильтрации через миллипоровые фильтры предложен J.P.Wylie (1970). В шприц набирают 1 мл крови, смешивают с гепарином и добавляют 10 мл лизированного раствора. Полученный лизированный кровяной раствор из шприца пропускают через Миллипоровый фильтр размером пор 8 ц. Затем через фильтр медленно пропускают 5-10 мл раствора толуидинового синего. Далее фильтр промывают 10 мл воды, отсоединяют от держателя и исследуют под микроскопом. Окрашенные микрофилярий можно дифференциировать. Этот метод не требует использования центрифуги. При сравнении эффективности четырех диагностических тестов, прямого влажного мазка, модифицированного метода Knott, метода концентрации и капиллярной седиментации, J.P.Wylie (1970) установлена наибольшая точность модифицированного метода Knott и метода фильтрации. При использовании метода концентрации на исследование 1 пробы крови затрачивалось около 6 минут, при методе фильтрации - меньше 1 мин. Преимуществом метода фильтрации J.P.Wylie считает возможность исследовать до 2-3 мл крови, в то время как при применении модифицированного метода Knott исследуют 1 мл.
L.Chalifoux, R.D.Hunt (1971) для идентификации микрофилярий использовали их реакцию на действие кислой фосфатазы. Микрофилярий имеют разные места окрашивания энзимных клеток в результате нафтол АС-ТР-фосфатной реакции. Данная методика отнимает много времени и необходима лишь при установлении вида циркулирующих микрофилярий.
Наиболее точным методом выявления микрофилярий в периферической крови N.H.Altaian (1972) считает метод использования Миллипорового фильтра (J.P.Wylie, 1970). Автором не выявлено разницы в количестве микрофилярий при взятии крови из ушной, головной вены и латеральной вены голени.
A.D. J.Watson, F.L.Testoni, W.L.Porges (1973) провели опыт по сравнению микрофилярий, выявленных модифицированным методом Knott и методом фильтрации. Авторами установлено, что при использовании метода фильтрации микрофилярий становятся значительно короче.
По данным R.S.Desowitz, B.A.Southgate (1973) при исследовании методом мембранной фильтрации 1 мл крови, взятой из вены, выявляемость зараженных филяриатозами возрастает в 1,5-3 раза по сравнению с результатами обследования методом толстой капли. J.D.Kelly (1973) проанализировал эффективность разных методов диагностики дирофиляриоза собак и пришел к выводу, что наиболее успешными являются усовершенствованный метод Knott и метод фильтрации.
Развитие Dirofilaria immitis Leidy, 1856 в организме собак
При заражении собак D.immitis в дозе 20 инвазионных личинок на голову микрофилярии в крови начали обнаруживать у одной собаки спустя 30 недель после заражения, у другой - на 31 и у остальных - на 33-36-й неделях опыта. В начале микрофилярии обнаруживали в незначительном количестве и только спустя 3-5 недель после начала обнаружения находили максимальное количество микрофилярии в крови. Средняя продолжительность препатентного периода D.immitis в организме собак составила 33,6+1,3 недель (235 дней). В 20 мм крови собак обнаруживали от 45 до 214 экз. микрофилярии, а в среднем, 117,0+12,4 экз. (табл. 1).
Полученные нами результаты согласуются с данными W.A.Webber, F.Hawking (1955), проводившими опыты в условиях Англии. Однако T.C.Orihel (1961) сообщал о развитии D.immitis в организме собак в течение 6,3 месяцев или 191 дней. Указанная разница в продолжительности препатентного периода развития D.immitis, по-видимому, обусловлена различными природно-климатическими условиями.
Таким образом, в условиях нашей страны продолжительность препатентной стадии развития D.immitis в организме собак составила 33,6 недели. В условиях Республики Калмыкия по нашим данным распространен дирофиляриоз, вызванный D.repens. После экспериментального заражения 8 собак D.repens в дозе 17-23 экз. инвазионных личинок на голову, которых получали от зараженных комаров, микрофилярий в крови впервые начали обнаруживать в незначительном количестве через 25 и последующие недели после заражения (табл. 2). Интервал от момента заражения до обнаружения микрофилярий в периферической крови собак составил, в среднем, 27,0 недель, т.е. 193 дня. В первые дни после обнаружения микрофилярий в крови их количество было незначительным, но в последующие месяцы количество микрофилярий значительно повысилось и составило 37-122 экз., а в среднем, 79,6+6,8 экз.
Следует отметить, что срок препатентного развития D.repens в организме собак на 6 недель короче, чем D.immitis. Таким образом, нами впервые в условиях нашей страны установлена продолжительность препатентной стадии развития D.repens, равная 193 дням. Результаты изучения сроков развития инвазионных личинок D.immitis в организме комаров Ae.aegypti после питания на зараженной собаке при обнаружении в 20 мм3 крови 300 микрофилярий представлены в таблице 3 и свидетельствуют о том, что на 5-й день после заражения личинки D.immitis локализуются в брюшной части и мальпигиевых сосудах комаров. В это время большая часть личинок находилась на 2-й стадии развития.
Через 10 дней после заражения на 2-й стадии развития были 59,8% личинок D.immitis и 40,2% личинок были инвазионными. Большая часть личинок, в том числе инвазионных, находилась в мальпигиевых сосудах, где обнаружили, в среднем, 18,6+5,0 экз. личинок, из них 6,5+2,0 экз. были инвазионными. В грудной, брюшной части и голове комаров в этот период обнаруживали только инвазионные личинки в единичных экземплярах.
На 15-й день после заражения 92,3% обнаруженных личинок были инвазионными и только 7,7% - на 2-й стадии. В мальпигиевых сосудах обнаружили, в среднем, 10,6+2,6 экз. личинок, из них 8,3+1,8 экз. были инвазионными. В брюшке, груди и голове комаров находили только инвазионных личинок в количестве соответственно 3,7+1,0; 4,6+1,4 и 13,2+3,7 экз. Большое количество инвазионных личинок D.immitis в головной части комаров обусловлено их готовностью к выходу из организма.
Таким образом, развитие инвазионных личинок D.immitis в организме комаров Ae.aegypti происходило в течение 10 дней. Однако максимальное количество инвазионных личинок в головной части комаров отмечали на 15-й день после их экспериментального заражения на собаке, инвазированной D.immitis.
Зараженность разных видов комаров личинками дирофилярий
Из 5744 экземпляров комаров, собранных с тела собак, 1456 экз. были Ae.caspius, 1174 экз. Ae.dorsalis, 898 экз. Cx.pipiens, 635 экз. Сх. modestus, 713 экз. Cx.molestus и 868 экз. An.maculipennis. Результаты вскрытия комаров приведены в таблице 16 и свидетельствуют о высокой инвазированности комаров личинками дирофилярий. Зараженность Ae.caspius, Ae.dorsalis, Cx.pipiens, Cx.modestus, Cx.molestus и An.maculipennis в июле 2001 года составила соответственно 17,1; 13,5; 7,8; 2,4; 2,0 и 5,6%. Учитывая полученные данные по зараженности комаров личинками дирофилярий в первый день сбора на инвазированных собаках и возле них, дальнейшие опыты проводили на видах комаров Ae.caspius и Ae.dorsalis, так как эти виды были в максимальной степени инвазированы личинками дирофилярий.
При вскрытии содержащихся в садках комаров Ae.caspius на 1, 3, 5, 10 и 15-й дни после питания на инвазированных собакахОшг установлена соответственно 87,0; 76,8; 71,1; 65,8 и 58,0%-ная их зараженность личинками D.repens, находящимися на разной стадии развития (табл. 17). Среднее количество микрофилярий в одном зараженном комаре Ae.caspius в день заражения было равным 25,6±7,0 экз. В последующие сроки количество личинок дирофилярий в организме комаров снижалось и составило на 3-й день 17,7±2,4, на 5-й - 13,6±2,1, на 10-й - 8,3±1,2 и на 15-й - 3,8±0,7 экз. Личинок 1-й стадии обнаруживали на 1 и 3-й дни после питания комаров на зараженной собаке. Личинки 2-й стадии находились в организме комаров с 3 по 15-й дни, а личинки 3-й стадии - на 10 и 15-й дни после заражения. Количество личинок 2-й стадии в организме комаров снижалось после 5-го дня заражения.
В связи с тем, что при исследовании в день сбора комаров с тела зараженной собаки микрофилярии были обнаружены также в большом количестве в организме Ae.dorsalis, нами проведено изучение развития в них инвазионных личинок D.repens.
Результаты вскрытия комаров данного вида на 1, 3, 5, 10 и 15-й дни после заражения представлены в таблице 18 и свидетельствуют о высокой их зараженности микрофиляриями как в день питания на собаке, так и в последующие дни. Инвазированность вскрытых Ae.dorsalis на 1, 3, 5, 10 и 15-й дни после заражения составила соответственно 84,2; 74,7; 67,4; 63,8 и 53,3% при интенсивности инвазии, равной 21,4±5,5; 16,3±3,0; 11,8±2,2; 7,7±1,2 и 3,2±0,8 экз. соответственно.
На 10-й день после питания комаров в мальпигиевых сосудах и головной части 63,8% Ae.dorsalis находили инвазионных личинок при интенсивности 3,9±0,8 экз., размеры которых не отличались существенно от размеров личинок 3-й стадии, обнаруженных в организме Ae.caspius. Следовательно, Ae.dorsalis, как и Ae.caspius являются промежуточными хозяевами D.repens собак в условиях Республики Калмыкия.
Данные анализа литературы и результатов собственных исследований, представленные в таблице 19, указывают на то, что промежуточным хозяином D.repens собак могут являться в разных регионах различные виды комаров, относящиеся к родам Aedes, Culex и Anopheles. Полученные нами данные в Республике Калмыкия подтверждают результаты опытов Э.И.Шлейхера (1948) в Узбекистане, Т.П.Худавердиева (1976), Т.П.Худавердиева и Ш.М.Джафарова (1979) в Нахичеванской АССР, O.Bain (1978) во Франции, C.Genchi, B.Di Sacco, G.Cancrini (1992) в Италии, указывающих на передачу D.repens с помощью комаров вида Ae.caspius. Однако эти и другие авторы сообщали о возможности распространения этой инвазии и другими видами комаров. Нами впервые установлено, что промежуточным хозяином D.repens в условиях Республики Калмыкия являются кроме Ae.caspius комары вида Ae.dorsalis. Мы не исключаем возможности передачи D.repens и другими видами комаров, таких как Cx.pipiens, An.maculipennis из-за их высокой зараженности личинками D.repens, а также данных литературы, указывающих на их роль промежуточного хозяина этого возбудителя в других регионах.
Следует отметить, что Ae.caspius и Ae.dorsalis в сборах возле и на собаках были доминирующими видами. В связи с этим можно предполагать, что промежуточным хозяином D.repens являются доминирующие или распространенные в данной местности виды кровососущих комаров. На собак активно нападают и другие виды кровососущих насекомых: мошки, мокрецы, слепни. Однако по данным Т.П.Худавердиева (1976) в их организме развития инвазионных личинок D.repens не происходит.
Таким образом, D.repens не обладают высокой специфичностью в выборе промежуточного хозяина. В условиях степной зоны юга России (Калмыкия) промежуточным хозяином D.repens собак являются комары Ae.caspius, Ae.dorsalis.
