Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1 Характеристика продуктивных качеств пород и внутрипородных линий уток 8
1.2 Генетическая дифференциация популяций как основа формирования новых внутрипородных групп 20
1.3 Методы молекулярной генетики в изучении генетической дифференциации популяций 21
1.3.1 Типы молекулярных маркеров 24
1.3.2 Полиморфизм митохондриальной ДНК 26
1.3.3 RAPD-полиморфизм и возможности его использования в оценке генетической дивергенции 32
2. Материалы и методы 36
2.1 Материал исследования 36
2.2 Метод полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) для выявления RAPD-полиморфизма 39
2.3 Методы изучения полиморфизма ДНК митохондриального генома 40
2.4 Методы статистической обработки 41
3. Результаты и обсуждение 44
3.1 Анализ ПДРФ-ДНК и митотипов участка ND-2 митохондриального генома внутрипородных линий уток Благоварского ГУП ППЗ 44
3.2 Оценка генетической дифференциации пекинских и мускусных уток с использованием RAPD-маркеров 59
3.2.1 Межпородная дифференциация 61
3.2.2 Внутрипородная межлинейная дифференциация пекинских уток 68
3.3 Оценка генетической дифференциации и степени генного разнообразия зональной популяции уток Благоварского ГУП ППЗ по данным полиморфных маркеров ядерного (RAPD) и митохондриального геномов 81
3.4 Оценка возможности использования стабилизирующего отбора для повышения продуктивных качеств уток 86
3.5 Экономическое обоснование результатов исследований 91
Выводы 93
Предложения производству 95
Библиография 96
- Характеристика продуктивных качеств пород и внутрипородных линий уток
- Методы молекулярной генетики в изучении генетической дифференциации популяций
- Метод полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) для выявления RAPD-полиморфизма
- Анализ ПДРФ-ДНК и митотипов участка ND-2 митохондриального генома внутрипородных линий уток Благоварского ГУП ППЗ
Введение к работе
Актуальность работы. В современном птицеводстве при линейном разведении в условиях изолированного содержания и постоянного длительного давления направленного отбора, который ведется одновременно по целому комплексу признаку продуктивности, происходит непрерывное изменение генетической структуры линии, что в конечном итоге приводит к генетической дифференциации исходной родительской группы и формированию новых породных групп (В.И. Глазко, Р.В. Облап, Г.В. Глазко, 1997; Ф.Айала, 1988).
Исследователи уделяют немалое внимание вопросам дифференциации популяций, в основе которой лежит динамика генных частот (Ю.П. Алтухов, 1996; СП. Князев и др., 2004).
Для оценки генетической структуры и генетической дифференциации популяций в настоящее время широко используется изучение полиморфных локусов. При этом целесообразно использовать гипервариабельные локусспецифические последовательности ДНК ядерного и митохондриального геномов, поскольку они являются более информативными маркерами по сравнению с иммуно-биохимическими (Э.К. Хуснутдинова, 1997).
В настоящее время возможности использования полимофных маркеров ДНК продемонстрированы на значительном количестве природных и сельскохозяйственных популяций (С.А. Булат, 1992; И.В. Чуркина, 1995; С.К. Семенова, 1996; Г.Д.Рябова и др., 1995; А.В. Городная,1997; Е.Д. Рысков, 1999; И.В. Чуркина, 2000; В.Н. Поздняков и др., 2000; Вл. А. Брыков, 2001; Е.З. Кочиева, 2002;Т.С. Голованова, 2003; Г.Г. Хрисанфова и др., 2004).
Полиморфизм ядерного и митохондриального генома уток совершенно не исследован, тогда как промышленные популяции являются прекрасным объектом для изучения процессов генетической дифференциации, которая происходит в ходе селекционного процесса. Благоварский ГУП ППЗ
5 выполняет функции селекционно-генетического центра по утководству в России и является уникальным в этом плане. Менее чем за 10 лет созданы высокопродуктивный кросс Благоварский, а также Башкирская цветная порода уток, что является наглядным примером генетической дифференциации исходной родительской группы уток на различные по фенотипу и продуктивным качествам (а следовательно по генотипу) внутрипородные группы.
Изучение полиморфных локусов ДНК сразу двух геномов: ядерного и митохондриального значительно увеличивает глубину исследования генетических процессов в сельскохозяйственных популяциях, приводящих к их генетической дифференциации.
Выше изложенное обосновывает своевременность и актуальность настоящего исследования.
Работа выполнена в рамках и при частичной финансовой поддержке гранта Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) -Агидель (№ проекта 05-04-97940).
Цель и задачи работы. Изучение генетической структуры внутрипородных линий уток по данным о полиморфизме ядерного и митохондриального геномов и количественная оценка произошедшей в ходе селекции их генетической дифференциации.
Задачи исследования:
Провести изучение RAPD-полиморфизма генома 10 внутрипородных линий уток с несколькими универсальными праймерами;
Изучить полиморфизм длин рестрикционного фрагмента в участке митохондриального ДНК, кодирующем вторую субъединицу НАДН-дегидрогеназы (ND2) у различных пород (пекинских и мускусных) и внутрипородных линий уток;
3. Провести количественную оценку степени межлинейной
генетической дифференциации пекинских уток;
4. Провести количественную оценку степени расхождения новых
линейных групп с исходными родительскими группами;
5. Провести сравнительный анализ генного разнообразия линий уток по
данным полиморфизма ДНК двух геномов - ядерного и митохондриального.
Научная новизна работы. В нескольких поколениях 10 внутрипородных линий уток пекинской и мускусной породы впервые проведен:
RAPD-анализ генома с использованием нескольких универсальных праймеров;
ПДРФ-анализ митохондриального генома в участке, кодирующем вторую субъединицу НАДН-дегидрогеназы (ND 2).
На основе анализа полиморфизма ДНК ядерного и митохондриального геномов, определена степень генетической близости и филогенетические взаимоотношения исследованных линий уток. Проведен сравнительный анализ уровней генетической дифференциации исследованных линий уток по ядерному и митохондриальному геномам и выявлена близость уровней дифференциации этих двух типов генома.
Впервые дана количественная оценка степени генного и митотипического разнообразия внутрипородных линий уток по данным ДНК-маркеров ядерного и митохондриального геномов.
Научно-практическая значимость. Молекулярно-генетическое изучение промышленных популяций птиц имеет важное теоретическое и практическое значение, поскольку результаты его послужат основой для рассмотрения молекулярно-генетических механизмов дифференциации популяций в процессе селекционной работы по выведению новых пород и внутрипородных линий.
В общем плане популяционно-генетических исследований определение частот генотипов и аллелей ДНК-локусов в линейных субпопуляциях уток является новой информацией для характеристики
7 генофонда уток вообще и их зональной (ГУП ППЗ Благоварской) популяции в частности.
Совокупность полученных принципиально новых сведений о динамике генетической структуры внутрипородных линий уток под действием отбора являются платформой для оценки степени генетической дифференциации селекционируемых групп животных и птиц. Результаты исследований вошли в методические рекомендации «Использование биохимических и молекулярно-генетических маркеров для оценки генетического разнообразия уток» (Уфа, 2006).
Апробация работы. Основные положения и результаты исследований были доложены и обсуждены в период 2002 - 2006 г.г. на Второй конференции Московского общества генетиков им. Вавилова (Москва, 2003), Республиканской научно-практической конференции молодых ученых и аспирантов БГАУ (Уфа, 2003), Международной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Молодежная наука и АПК: проблемы и перспективы» (Уфа, 2005)
Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 5 научных трудов, в том числе 1 статья в журнале «Вестник Башкирского университета» и 1 статья в журнале «Птицеводство».
Структура и объем работы. Диссертационная работа включает введение, обзор литературы, материалы и методы, главу результатов и обсуждения, выводы, предложения производству, библиографию. Работа содержит 111 страниц машинописного текста, 21 таблицу, 30 рисунков. Библиография включает 144 наименования.
Характеристика продуктивных качеств пород и внутрипородных линий уток
В современном понимании, порода это целостная группа сельскохозяйственных животных (птиц) имеющих общее происхождение, сходные морфологические и хозяйственные признаки, стойко передающиеся потомству, что обеспечивает сохранение относительного сходства животных в ряде поколений в течение длительного периода времени (И.М. Дунин, С.К. Охапкин, 1999).
Утководство основано на использовании двух одомашненных пород уток: Anas platynhunchos domestica (домашние утки) и Cairina moschata demestica (мускусные утки), причем последних начали использовать в промышленном утководстве лишь два десятка лет тому назад.
Селекционерами многих стран мира созданы более 20 пород домашних уток, однако основу составляет немногие из них: пекинская, хаки - кемпбелл, эйльсбюри (И.И. Кочиш, 1992).
Наибольшее распространение, как в России, так и за рубежом получили пекинские утки. Это одна из старейших мясных пород выведена в Китае более 300 лет тому назад. В разных странах мира имеются многочисленные популяции пекинских уток, которых используют для выведения новых пород (Н.А. Горюнов, 1981). Пекинские утки скороспелы и хорошо откармливаются, очень выносливы и легко переносят суровые зимы. Живая масса взрослого селезня 3,5-4 кг, утки 3-3,5 кг. Оперение белое с кремовым оттенком. Пекинские утки имеют давнюю историю. Распространение по всему миру эта порода получила из США, куда была завезена в 1870 году из Китая. Это - классическая порода мясного направления (Э.К. Пенионжкевич, 1989).
На базе породы пекинских уток созданы многие современные кроссы уток. В Англии выведен двух линейный кросс уток X - 11 (фирма «Черри -Велли»). Это скороспелый кросс, в 7 - недельном возрасте гибридные селезни достигают живой массы 4 кг, самки 3,5 кг при затратах корма 3 - 3,4 кг на 1кг прирост и сохранности молодняка 96 - 98% (И.И. Кочиш, 2004).
Углубленную селекционную работу с линиями данного кросса ведут специалисты Казахской и Белорусской ЗОСП.
Кросс Медео (рисунок 1) - двухлинейный, создан селекционерами Казахской ЗОПС на базе линии кросса X - 11; включает линии М - 2(1) -отцовская и М - 2(2) - материнская.
Живая масса утят - бройлеров в 7 - недельном возрасте - 3,16 кг, затраты кормов на 1 кг прироста - 3,03 кг, сохранность утят - 98,3 %. Яйценоскость материнской формы кросса - 159 яиц, вывод утят - 68,9 %. (И.И. Кочиш, 1992).
Племенной птицеводческий завод Благоварский с 1995 года выполняет функции генетического центра по утководству и является единственным предприятием подобного рода в России. С 1995 года проводится интенсивная селекционная работа с исходными родительскими линиями Ml и М2 кросса Медео, завезенными из Казахстана. Менее чем за 10 лет на их основе выведен новый высоко продуктивный кросс Благоварский (линии Б1 и Б2) и Башкирская цветная порода (линии БЦ1 и БЦ2).
Кросс Благоварский двухлинейный. Отцовская линия (Б1) по экстерьеру и конституции представляет ярко выраженный мясной тип (рисунок 2). Птица крупная, туловище длинное, широкое и глубокое, постановка его почти горизонтальная. Грудь глубокая, выпуклая и широкая, киль длинный, хорошо выполненный. Окраска оперения белая с кремовым оттенком. Утята обладают высокой живой массой в 7-недельном возрасте, хорошей оперясмостью, отличными формами телосложения и наиболее низкими затратами корма на 1 кг прироста.
Материнская линия (Б2) имеет хорошие мясные формы, но менее ярко выраженные в сравнении с линией Б1. Птица несколько легче, более подвижна. Грудь глубокая и широкая, туловище удлиненное и слегка приподнятое, оперение белое с кремовым оттенком. Материнская линия Б2 имеет яйценоскость 220 яиц и более, выводимость яиц 85% и вывод утят 75 -80%. За год от одной несушки линии Б2 можно получить более 520 кг мяса (живой массы) (Т.Ф. Саитбаталов, 1997).
Для получения гибридных утят скрещивание проводится по следующей схеме. Исходные линии и прародительские формы: самцы Б1 х самки Б1 самцы Б2 х самки Б2 Родительские формы: самцы Б1 х самки Б2 Финальный гибрид, утята-бройлеры Б (1x2) (Т.Ф. Саитбаталов, 2000)
Сохранение и совершенствование племенных и продуктивных качеств исходных форм уток пекинской породы базируется на индивидуальной и семейной оценке птицы, жесткой браковке по ведущим признакам, оценке линий на сочетаемость, отборе и размножении лучших особей.
Основной метод племенной работы - семейная селекция с индивидуальным отбором каждой особи и оценкой производителей по качеству потомства.
Методы молекулярной генетики в изучении генетической дифференциации популяций
В настоящее время генетическое сопоставление различных видов можно проводить путем прямого сравнения нуклеотидных последовательностей ДНК изучаемых пород.
Открытие генетического кода белков и полиморфизма ДНК, а также разработка метода электрофореза в гелях дали возможность количественно оценить генетические изменения происходящие в процессе видообразования. Степень генетической дифференциации двух популяций можно оценить, изучив в каждой из них некоторый набор случайно выбранных белков или нуклеотидных последовательностей (М. Ней, 1981) предложил удобный способ оценки генетической дифференциации популяций по данным электрофореза.
При этом используются две величины: 1) генетическое сходство J оценивающее долю структурных генов, которые идентичны в обеих популяциях и 2) генетическое расстояние D- оценка среднего числа замен аллелей в каждом локусе, произошедших за время раздельной эволюции двух популяций.
Генетическое сходство J может принимать значение от нуля (когда у сравниваемых популяций нет общих аллелей) до единицы (когда частоты всех аллелей одинаковы в общих популяциях).
Величины J и D используются в качестве меры генетической дифференциации популяций в процессе породообразования (A.M. Машуров, 1980).
Начиная с середины XX века биохимические и молекулярно-генетические методы вышли на передовые рубежи в изучении генетических процессов в популяции. Возникло целое направление изучения «молекулярной эволюции» (М. Кимура, 1985; В.А. Ратнер и др., 1985).
Молекулярные методы позволили создать тест-системы на уровне продуктов генов (белковый полиморфизм), а позднее на уровне генетического материала клетки (полиморфизм ДНК). С помощью белкового полиморфизма был сделан настоящий прорыв в исследованиях популяционной генетики. Однако возможности метода картирования с использованием белковых маркеров существенно ограничено.
Более перспективным представляется использование в качестве маркерных систем полиморфных последовательностей нуклеотидов в последовательности ДНК. Гомологичные последовательности ДНК у различных индивидов могут различаться по одному или нескольким основаниям в результате точечных мутаций, вставок, делеций или инверсий. Такие последовательности ДНК называются полиморфными, а само явление гетерогенности или вариабельности нуклеотидного состава гомологичных последовательностей - полиморфизмом ДНК. Использование в качестве маркерных систем полиморфных последовательностей ДНК позволяет тестировать генетический полимофизм непосредственно на уровне генотипа, а не на уровне продуктов генов, как в случае использования метода белкового полиморфизма (Ю.П. Алтухов, 1992).
ДНК-полиморфизм может быть тестирован различными способами, включая прямое определение нуклеотидной последовательности ДНК (В.И. Глазко, В.А. Малиенко, 2000). На практике используют обработку ДНК рестрицирующими эндонуклиазами с последующим электрофоретическим разделением полученной смеси и определением длин рестрикционных фрагментов. Рестрицирующие эндонуклеазы имеют строгую субстратную специфичность - сайты расщепления, поэтому генетические различия в нуклеотидной последовательности ДНК между индивидуумами приводят к отличиям в распределении сайтов рестрикции вдоль соответствующих молекул ДНК, а следовательно, к получению смесей продуктов рестрикции, в которой длина гомологичных фрагментов будет различаться (В.И.Глазко и др., 1998).
Полиморфизм ДНК может быть предметом самостоятельного изучения, то есть исследования эволюции ДНК, закономерностей изменчивости и наследования вариантов последовательностей ДНК в популяциях и филогенетических линиях. В основном же он используется в качестве средства маркирования гена, участка ДНК, хромосомы, генома, организма, популяции, вида при решении различных задач. В качестве основных из них можно выделить следующие: генетическое картирование, оценка генетического полиморфизма, ДНК-типирование организмов, популяций, видов, филогения и таксономия организмов, использование в селекции для решения задач MAS (В.И. Глазко, 2001).
Метод полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) для выявления RAPD-полиморфизма
ГУП ППЗ Благоварский с 1995 года выполняет функции селекционно-генетического центра по утководству в России. Менее чем за 10 лет специалисты завода вывели новый высокопродуктивный кросс уток пекинской породы Благоварский (зарегистрирован в Государственном реестре селекционных достижений в 1989 году), а также породную группу под названием Башкирские цветные с окраской оперения хаки (зарегистрирован Государственной комиссией РФ по испытанию и охране селекционных достижений в 2000 году). Все они выведены на базе уток кросса Медео, завезённых в 1989 году из Казахской ЗОСП по утководству и являются основой заводского племенного стада. Кроме того, в генофондном стаде разводят 2 линии уток кросса Медео и 4 линии мускусных уток.
Объектом исследования служили утки пекинской и мускусной породы, разводимые на ГУП ППЗ Благоварская (Башкортостан), которые состоят из следующих внутрипородных линий: 1) Ml и М2 - соответственно отцовская и материнская линии пекинских уток, кросс Медео; 2) Б1 и Б2 - соответственно отцовская и материнская линии кросса Благоварский, отселекционированные на основе линий Ml и М2 кросса Медео, выведенных на Казахской зональной опытной станции; 3) БЦ1 и БЦ2 - линии уток Башкирской цветной породы; 4) Ю1 и ЮЗ - отцовские линии мускусных уток; 5) Ю2 и Ю4 - материнские линии мускусных уток.
От каждой из описанных линий брали в среднем по 20 - 30 образцов крови. Кровь для выделения ДНК брали из подкрыловой вены. В качестве консерванта использовали стерильный раствор глюгицира.
Общая схема исследований приведена на рисунке 5.
ДНК выделяли по стандартному методу с использованием лизиса клеток крови 10%-ным SDS в присутствии протеиназы К и депротеинизацию фенол-хлороформом и последующим осаждением этанолом, как описано Р.Маниатис (1989). Образцы ДНК хранились в виде водного раствора при -20 С. Тотальную ДНК использовали для изучения полиморфных локусов ДНК как ядерного, так и митохондриального геномов (Л.А. Калашникова и др., 1999).
Для выявления RAPD-полиморфизма для амплификации использовались праймеры, представленные в таблице 3.
Исходную смесь для полимеразной цепной реакции готовили в объеме 25 мкл, содержащем 60 мМ трис-HCI (рН 7,5), 10 мМ ((NH4)2S04) 2804, 0,1% твин-20, ЮОмМ каждого из четырех dNTP 0,1 мкМ праймера, 20 - 25 нг геномной ДНК, 1 ед. Tag-полимеразы. Сверху наслаивали 20 мкл легкого минерального масла. Полимеразную цепную реакцию проводили в амплификаторе «Терцик» (Россия) в течение 30 циклов: 94С - 1 мин. 43С-1мин. 72С-1мин.
Продукты амплификации подвергали электрофорезу в 7,5%-ном полиакриламидном геле, окрашивали бромистым этидием и выявляли в УФ -свете. В качестве маркера молекулярных масс использовали ДНК фага лямбда, гидролизованную рестриктазой PstI (1501, 5077, 4749, 4507, 2838, 2556, 2459, 1986, 1700,1159,1093, 805, 514, 468, 339).
Изображения гелей фиксировали с помощью видеосистемы «DNA Analyzer» и прилагаемого к ней программного обеспечения «Gel-Imager» и «Gel-Analysis» в версии 1.0.
В митохондриальном геноме изучали полиморфизм длин рестрикционных фрагментов в участке, кодирующим вторую субъединицу НАДН - дегидрогиназы (участок ND2). Нуклеотидная последовательность этого участка была получена в базе данных «Genome Data Base» (Internet) и проанализирована при помощи компьютерной программы Lasergene. Участок имеет длину 1057 пн и содержит несколько сайтов рестрикции для эндонуклеаз рестрикции Alu I (AGACT;TCAGA), Dde I (CATNAG;GANTAC), Hae III (GGACC;CCAGG), Hinf I (GAANTC;CTNAAG).
Анализ ПДРФ-ДНК и митотипов участка ND-2 митохондриального генома внутрипородных линий уток Благоварского ГУП ППЗ
В данном разделе излагаются результаты исследования относительно эффективности использования RAPD-маркеров для оценки степени генетической дифференциации внутрипородных линий пекинских и мускусных уток.
Основным типом полиморфизма для RAPD-маркеров является наличие или отсутствие ампликона (полосы) на электрофореграмме. Ряд авторов в качестве полиморфизма рассматривает также интенсивность проявления (мажорность-минорность) соответствующих ампликонов. (Глазко В.И., Дунин И.М. и др., 2001)
К факторам, обусловливающим отсутствие ампликонов, относятся: 1) вставка большого отрезка ДНК между сайтами праймирования, которая может сделать фрагмент слишком большим, чтобы быть амплифицированным; 2) большая делеция; 3) наличие онтогенетических модификаций ДНК (метилирование, образование ковалентных сшивок с белками (Семенова С.К. и др., 1995); 4) мутация в зоне отжига праймера. Если структура, в которой произошла мутация, является уникальной, то полоса полностью отсутствует. Если же данная структура представлена повторами, то мутации в одной или даже нескольких копиях не должны вызвать исчезновения полосы, а скажутся лишь на ее интенсивности. В то же время при исследованиях линий пшеницы, в геноме которых было представлено от одной до четырех идентичных хромосом, различий по интенсивности полос в спектре RAPD-фрагментов у моносомиков и тетрасомиков не выявлено (Конарев А.В., 1998). Это противоречит предположению о том, что мажорные фрагменты на электрофореграммах могут представлять собой результат амплификации многокопийных равновеликих повторов генома. В таком случае остается вывод о том, что мажорные полоски появляются в результате более специфического отжига универсальных праймеров.
Небольшая вставка или делеция фрагмента во внутренней части продукта амплификации привела бы к изменению размера ампликона. (С.А. Булат, Н.В. Мироненко, 1992)
Каковы бы ни были причины появления описанных типов полиморфизма RAPD-маркеров, в итоге они приводят к специфическому, сугубо индивидуальному геномному отпечатку, как правило, воспроизводимому при повторной амплификации.
Следует подчеркнуть, что подбор праймеров для RAPD-анализа генома различных таксономических групп в каждом конкретном случае должен проводиться строго индивидуально, поскольку получаемая картина амплификации зависит не только и не столько от нуклеотидной последовательности праймеров, сколько от первичной структуры ДНК изучаемых видов и пород. Так, при изучении геномной вариабельности у диких копытных животных методом RAPD-PCR с праймером Ш (С.Г.Потапов и др., 1994) не выявлено индивидуальной изменчивости, а только видоспецифическая. Нами же показана индивидуальная (внутрипородная и даже внутрилинейная) изменчивость.
Каждый из использованных праймеров инициировал синтез специфического набора фрагментов ДНК, отличающихся один от другого по молекулярному весу и мажорности. Различия между породами и внутрипородными линиями по степени генетической изменчивости обнаруживаются даже визуально. При этом уровень изменчивости RAPD-спектров, полученных с помощью разных праймеров, значительно отличался. Так, 10-членные праймеры Ш и П4 инициировали синтез чрезмерно мнококомпонентных фрагментов ДНК, которые при электрофоретическом разделении проявлялись слившимися вместе RAPD-спектрами (рисунок 17). В связи с этим, полученные при помощи этих праймеров RAPD-спектры не могли служить основой для анализа генетического разнообразия изученных субпопуляций.
На рисунках 18 и 19 приведены электрофореграммы амплифицированных RAPD-фрагментов изученных пород уток с праймерами П2 и П4. Как видно, данные праймеры с ДНК каждой из изученных пород и внутрипородных линий выявляют специфический спектр амплифицируемых фрагментов, отличающихся один от другого количеством (от нескольких до более чем 40), размером и степенью выраженности в спектре. Рисунок 18. RAPD-PCR-спектры ДНК исследуемых линий уток с праймером П2 (А): 1 -11 - БЦ1 и БЦ2; (Б): 1 -6 - Б1; 7, 8 - Ю4.
На данных рисунках чётко видны не только межлинейные, но и индивидуальные различия. Так, в линии Ю1 мускусных уток (рисунок 19А дорожки 1-5) нет фрагментов ниже маркерной полосы 468 пн, тогда как в линии Ю2 той же породы (дорожки 6-Ю) имеется от 2 до 4 фрагментов в этой зоне. Общее число амплифицированных фрагментов с праймерами П2 и П4 колеблется от 14 до 46 и они довольно равномерно располагаются в зонах расширения от 264 до 2556 пн (фрагменты, расположенные выше или ниже, в расчетах не учитывались).
Основная зона разрешения фрагментов - 805-2838 пн. Особенно значительные различия можно видеть в зоне расположения фрагментов ниже маркерного с молекулярной массой 1093 пн. Если у пекинских уток ниже этой полосы находится всего лишь один фрагмент, то у разных особей мускусных - от 1 до 8.
Одной из поставленных нами задач также было сравнение посчитанных разными способами оценок генетических расстояний и возможность интерпретации с этих позиций полученных индивидуальных и популяционных профилей амплификации и выведенных на их основе филогенетических взаимоотношений.
Оценка генетических расстояний, полученная на основе формулы Нея, предложена автором для изучения динамических аспектов дифференциации популяций и является наиболее подходящей для задач межвидовых (межпородных) сравнений по частотам аллелей при генетической дивергенции видов на основе нейтральных замен (Л.А. Животовский, 1991).
