Введение к работе
Актуальность темы. Чума мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) – la peste des petits ruminants – вирусное заболевание, характеризующееся некротическим стоматитом, диареей и бронхопневмонией. Возбудитель – РНК-содержащий вирус, относится к семейству Парамиксовирусов, роду Морбилливирус. Впервые она была зарегистрирована в Кот Дивуаре в Западной Африке в 1942 году.
Вирусная этиология болезни была подтверждена в 1972 году во время всестороннего исследования вспышки болезни среди овец и коз клинически похожей на чуму крупного рогатого скота.
Экономический ущерб, причиняемых ЧМЖЖ козоводству и овцеводству велик, особенно в странах, где преимущественно разводят мелких жвачных животных, так как заболеваемость в первичных очагах болезни может достигать 100%, при высоком уровне летальности.
Для борьбы с этой болезнью необходим точный диагноз, но не всегда это удаётся из-за схожести с другими болезнями. Своевременная диагностика ЧМЖЖ является важным условием купирования инфекции в первичном очаге.
В настоящее время для диагностики ЧМЖЖ применяют различные серологические методы такие как: реакции диффузионной преципитации (РДП), реакции связывания комплемента (РСК), реакции нейтрализации (РН) и иммуноферментный анализ (ИФА).
Наиболее простым в исполнении и легко воспроизводимым являются реакции диффузионной преципитации и связывания комплемента, но малочувствительные, реакция нейтрализации является длительным, трудоемким и требует для постановки культур клеток.
Известно, что разработанный для диагностики болезни ЧМЖЖ метод ИФА применяют во многих странах. Однако в разных странах методы ИФА отличаются между собой по многим параметрам и имеют специфические особенности.
Принимая вышеуказанное во внимание можно сделать заключение о необходимости разработки ИФА для выявления антигена и антител при ЧМЖЖ. Для широкого применения ИФА для диагностики и серомониторинга требуется разработка и создание универсальных отечественных высокоспецифических диагностикумов.
Цель и задачи исследований.
Разработать тест-систему для лабораторной диагностики и идентификации антигена вируса ЧМЖЖ и антител к нему.
Для достижения указанной цели необходимо было:
- провести эпизоотологические и вирусологические исследования в очагах инфекции и выделить эпизоотический изолят вирулентной культуры вируса ЧМЖЖ, пригодный для приготовления диагностических препаратов;
- отработать методы приготовления комплексных культуральных специфических и нормальных (контрольных) антигенов для серологических тестов;
- получить активную вирусоспецифическую и антивидовую сыворотку пригодную для постановки ИФА;
- подобрать оптимальные методы выделения иммуноглобулинов и аффинноочищенных антител, и на их основе получения иммунопероксидазных конъюгатов;
- отработать оптимальные условия постановки твердофазного варианта ИФА для обнаружения специфического антигена вируса ЧМЖЖ;
- разработать оптимальные условия постановки непрямого твердофазного варианта ИФА для обнаружения антител к вирусу ЧМЖЖ.
Научная новизна. Научная новизна проведенных исследований состоит в том, что:
- впервые выделен эпизоотический вирус ЧМЖЖ из очага болезни мелкого рогатого скота в Республике Таджикистан. Выделенный вирус ЧМЖЖ паспортизован и депонирован в коллекции микроорганизмов ДГП Научно-исследовательском институте проблем биологической безопасности Республики Казахстан штамм вируса ЧМЖЖ «Темурмалик» для биотехнологических целей.
- впервые в Республике Таджикистан разработана методика приготовления комплексных культуральных специфических (на основе штамма «Темурмалик» ЧМЖЖ) и нормального антигенов;
- разработана схема гипериммунизации получения высокоактивных вирусоспецифических (на основе штаммов «G-45» и «Темурмалик») и антивидовых сывороток для серологических реакций;
- отработаны оптимальные условия постановки прямого «Сэндвич» - варианта ИФА для обнаружения антигена вируса ЧМЖЖ;
- отработаны оптимальные условия постановки непрямого варианта ИФА для выявления вирусспецифических антител к вирусу ЧМЖЖ;
Практическая значимость работы. Предложен способ изготовления культурального антигена на основе эпизоотического штамма «Темурмалик» вируса ЧМЖЖ для постановки серологических реакций и гипериммунизации животных.
Рекомендованная схема получения специфической сыворотки на культуральный антиген и антивидовой кроличьей сыворотки, а также методы выделения и очистки из них иммуноглобулинов и аффинноочищенных антител переданы для использования в НПП «Биологические препараты» Таджикской Академии сельскохозяйственных наук для налаживания их производства.
По результатам исследований разработана и составлена нормативно-техническая документация: Дастур оид ба ташхиси озмоишгохии тоуни чорвои хурди шохдор бо усули тахлили иммуноферменти (Наставление по лабораторной диагностике ЧМЖЖ методом ИФА) и Тавсияхо оид ба гузаронидани тадбирхои зиддиэпизооти ва пешгирикунанда хангоми тоуни чорвои хурди шохдор (Рекомендации по проведению противоэпизоотических мероприятий при чуме мелких жвачных животных), утвержденные начальником и зам. начальником Службы государственного ветеринарного надзора Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан (15 марта 2011г.).
Личный вклад соискателя. Экспериментальные данные получены автором самостоятельно. Теоретическое обоснование, проведение экспериментов, анализ и обработка полученных данных проведены при личном участии автора. Результаты работы опубликованы и апробированы в производственных условиях.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы изложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета НПП «Биологические препараты» (Среднеазиатского ящурного института) - 2003-2010гг., на научно – теоретических конференциях в Бишкеке и Москве.
Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 12 научных работ, из них три статьи в изданиях, по перечню ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 111 страницах компьютерного текста (Word) и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Список используемой литературы включает 151 источников, из которых 79 иностранных. Диссертация иллюстрирована 9 рисунками, 25 таблицами. Приложение на 2 страницах.
