Введение к работе
1.1 Актуальность темы
Инфекционный ринотрахеит – герпесвирусная инфекция крупного рогатого скота всех возрастных групп и пород, характеризующаяся разнообразием клинических форм проявления. В настоящее время, данное заболевание в силу своей высокой контагиозности, получила широкое распространение во всех странах мира с развитым животноводством. Так, например, относительное количество неблагополучных стад КРС во Франции составляет 10%, в Испании – 25%, в Великобритании и Германии – 50%, Италии – 60%, в Бельгии – 63%, в Нидерландах – 70% (Олейник А.В., 2007; Иванов А.В. и соавт., 2008; Юров К.П., 2011; Ackermann M., 1990).
В последние годы приходиться сталкиваться с субклиническим течением, обусловленным циркуляцией штаммов ВНV-1 с пониженной вирулентностью или повышением в стадах количества животных, имеющих специфические антитела. В таких случаях первичная инфекция быстро принимает латентный характер, при котором в тройничном нерве и других сенсорных ганглиях персестирует вирусная ДНК, а инфекционных вирионов нет. Латентное вирусоносительство находится под постоянным иммунным контролем со стороны макроорганизма. При понижении резистентности организма происходит реактивация вируса из латентного состояния и его выделение во внешнюю среду. Кроме того, вирус может выделяться спонтанно. При этом может отмечаться обострение инфекции как с развитием клинических признаков, так и без них (Глотов А. В. и соавт., 2009; Мищенко В.А. и соавт., 2012; Timoney P. J. et. al., 1971; Bagnst P. J., 1972).
Учитывая вышеизложенное, успешная борьба с инфекционным ринотрахеитом КРС во многом зависит от быстрой и достоверной диагностики, основанной на применение высокоспецифических иммунохимических тест-систем. В этом направлении перспективными методами являются ИФА и иммуноблотинг.
1.2 Цель и задачи исследований
Целью данной работы являлось получение специфического антигена, антител к нему и разработать иммунохимические тест-системы для серологической диагностики ИРТ КРС. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
- провести биохимический и иммунохимический анализы референтного, вакцинных и эпизоотических штаммов возбудителя инфекционного ринотрахеита КРС и изыскать способы выделения специфического антигена;
- оптимизировать иммуноферментную тест-систему для серологической диагностики ИРТ КРС;
- разработать метод иммуноблотинга для серологической диагностики герпесвирусной -1 инфекции КРС.
1.3 Научная новизна работы
Впервые проведен сравнительный анализ структурных вирусных полипептидов 4-х изолятов вируса ИРТ, выделенных от больных животных из неблагополучных по респираторным заболеваниям хозяйств Среднего Поволжья, референтного и 2-х вакцинных штаммов герпесвируса – 1 КРС.
Усовершенствован способ получения антигена герпесвируса-1 КРС, при разработке иммуноферментной тест-системы для серологической диагностики инфекционного ринотрахеита.
Показано, что разработанная иммуноферментная тест-система ИРТ обладает экспрессностью (5-6 ч), а также высокой чувствительностью и специфичностью.
Разработан метод иммуноблотинга для серологической диагностики ИРТ КРС.
1.4 Практическая значимость работы
Внедрение в практику ветеринарных лабораторий усовершенствованной иммуноферментной тест-системы и разработанного метода иммуноблотинга для серологической диагностики герпесвируса-1 позволит решить проблему достоверной диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
Проведены лабораторные, межведомственные комиссионные и производственные испытания усовершенствованной тест-системы «ИФА-АНТИ-ИРТ» с положительным результатом.
Материалы исследований по разработке иммунохимических тест-систем вошли в научно-нормативные документы.
1.5 Апробация работы
Основные материалы диссертационной работы доложены и одобрены на научных сессиях ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2003-2012гг., Всероссийских и Международных научных конференциях и симпозиумах (Казань, 2004, 2005, 2006, 2007, 2010; Владимир, 2004; Москва, 2005).
1.6 Публикации результатов исследований
По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в т.ч. 1 статья - в издании, рецензируемых ВАК РФ.
1.7 Объем и структура диссертации
