Введение к работе
Актуальность темы. Хламидийные инфекции широко распространены среди всех видов млекопитающих животных и птиц. Заболевание наносит существенный экономический ущерб различным отраслям животноводства и птицеводства, вызывая гибель животных, патологию их воспроизводительных органов, аборты, рождение мертвого или нежизнеспособного приплода. Распространенность возбудителей хламидиозов в природе среди домашних и диких животных, а также птиц представляет постоянную угрозу спарадических заболеваний для людей, профессионально не занятых в сельском хозяйстве (Шафикова Р.А., 1991; Хамадеев Р.Х. с соавт., 1997; Равилов Р.Х. , 1999; Равилов А.З. с соавт., 2000 и др.).
В 1956 году Schoop G. и Kauker E. в ФРГ впервые серологическим методом подтвердили, что причиной аборта у коров являются хламидии. В настоящее время хламидиоз у этого вида животных достаточно подробно изучен. Большой вклад в изучение хламидийных инфекций у коров внесли ученые Казанской школы хламидиологов. Большое внимание исследователи уделяли совершенствованию методов лабораторной диагностики (Гаффаров Х.З., 1969; Хамадеев Р.Х., 1975, 1984; Равилов А.З. с соавт., 2000 и др.).
Лабораторная диагностика хламидиоза включает обнаружение возбудителя в органах и тканях путем световой и люминесцентной микроскопии, выделение возбудителя на куриных эмбрионах и культурах клеток, выявление в сыворотках крови, больных и переболевших животных комплемент связывающих антител. Эти тест-системы имеют целый ряд недостатков: длительность получения ответа, низкая чувствительность и специфичность, субъективность оценки результатов исследования.
Одно из важных мест в лабораторной диагностике хламидиозов занимают методы выявления в сыворотках крови инфицированных животных специфических антител. В настоящее время вопросы серологической диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота остаются открытыми.
Наиболее широко в ветеринарной практике применяется реакция связывания комплемента. Однако согласно данным J. Schachter et al. (1975) при помощи РСК удается выявить только 50% больных животных. Впервые РСК была использована для обнаружения хламидийных антител в 1935 году, а в современных ветеринарных лабораториях до сих пор используют наборы диагностикумов, технология изготовления которых была разработаны в 70-е годы прошлого столетия.
В последние годы для индикации и идентификации хламидий предложены современные иммунохимические и молекулярно-генетические методы, такие как: иммуноферментный анализ, иммуноблотинг, гибридомные технологии, полимеразная цепная реакция и др. (Engvall E., Perlmann P., 1971; Van Zaane D., Ijzerman J., 1984; Lema F. et al., 1986; Шафикова, Р.А. с соавт., 1987; Белоусов В.И. с соавт., 1995; Гришаев М.П. с соавт, 1998; Сухова Л.П. с соавт., 1998; Обухов И.Л., Яковенко М.В., 2000; Равилов, Р.Х. с соавт., 2000 и др.). Перечисленные методы обладают высокой чувствительностью, специфичностью, воспроизводимостью, возможностью одновременно исследовать большое число проб, простотой постановки и учета результатов, способностью выявлять межвидовые и межштаммовые различия хламидий. До настоящего времени в Российской Федерации не выпускаются наборы для иммуноферментной индикации хламидийных антител у крупного рогатого скота.
Исходя из этого, перспективным является усовершенствование лабораторной диагностики хламидийных инфекций у крупного рогатого скота с учетом достижений современной биотехнологии.
Цель и задачи исследований. Цель исследований – усовершенствовать средства лабораторной диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота.
В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:
- провести анализ эпизоотической ситуации по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан;
провести эпизоотологическое обследование некоторых неблагополучных в отношении хламидийных инфекций сельхозпредприятий Республик Татарстан, Башкортостан и Марий Эл;
разработать тест-систему для серологической диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота иммуноферментным методом;
провести сравнительные серологические исследования неблагополучного по хламидиозу крупного рогатого скота хозяйств с использованием РСК и ИФА.
Научная новизна. Впервые проведен комплексный анализ эпизоотической ситуации по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан.
Разработан новый метод получения антигена из очищенной культуры хламидий.
Впервые сконструирована и апробирована в лабораторных и производственных условиях иммуноферментная тест-система для индикации в сыворотках крови крупного рогатого скот противохламидийных антител.
С использованием разработанного набора диагностикумов проведен серологический скрининг спонтанно зараженных хламидиями крупного рогатого скота.
Практическая ценность. Результаты исследований позволили установить эпизоотическую ситуацию по хламидиозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан.
Проведено эпизоотологическое обследование некоторых неблагополучных в отношении хламидийных инфекций сельхозпредприятий Республик Татарстан, Башкортостан и Марий Эл, разработаны рекомендации по их оздоровлению.
Разработана иммуноферментная тест-система для ретроспективной диагностики хламидиоза у крупного рогатого скота.
Результаты проведенных исследований вошли в следующие разработанные и внедренные в практику нормативно-технические документы: “Временное наставление по применению иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота (в порядке опыта)”, утвержденное ГУВ Кабинета министров РТ 18 мая 2011 г.; “Временную инструкцию по изготовлению и контролю иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота”, утвержденную ректором КГАВМ 18 мая 2011 г.; “Технические условия на опытную партию иммуноферментных тест-систем для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота”, утвержденные ректором КГАВМ 18 мая 2011 г.
Пути реализации результатов исследования. Полученные результаты исследований могут быть использованы для совершенствования диагностических и противоэпизоотических мероприятий при хламидиозе крупного рогатого скота, а также при организации учебно-педагогического процесса в ВУЗах при подготовке и повышении квалификации ветеринарных специалистов.
Личный вклад соискателя. Экспериментальные данные получены автором самостоятельно. Теоретическое обоснование, проведение экспериментов, анализ и обработка полученных данных проведены при личном участии автора. Результаты работы опубликованы и апробированы в производственных условиях.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:
Ежегодных итоговых заседаниях проблемных советов ФГБОУ ВПО “Казанская академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана” (2009 и 2010 гг.);
Научно-практической конференции “Ветеринарная медицина домашних животных” (Казань, 2009 г.);
Научно-практической конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2011 г.).
Всероссийских научно-практических конференциях “Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития” (Саратов, 2009 и 2011 гг.);
XVII-XIX Московских международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2009-2011 гг.).
Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 3 в изданиях рекомендованных ВАК для кандидатских диссертаций.
Основные положения диссертации, выдвигаемые для защиты:
хламидиоз крупного рогатого скота имеет существенное распространение на территории Республики Татарстан;
общепринятые методы диагностики хламидиоза не позволяют в полной мере контролировать эпизоотическую ситуацию по хламидийным инфекциям;
разработанная иммуноферментная тест-система более эффективна по сравнению с РСК при выявлении хламидийных антител у крупного рогатого скота.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах компьютерного текста (текстовый редактор “Microsoft Word 2003”, стиль “Times New Roman”, размер шрифта 14 пт, интервал полуторный) и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований (4 главы), обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения и указатель литературы (всего 242 источника, в том числе 140 иностранных и 4 ссылки на сайты Internet). Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 3 рисунками. Прилагаются разработанные нормативно-технические и другие документы, подтверждающие результаты исследований.
