Введение к работе
1.1 Актуальность проблемы.
Вакцинопрофилактика до настоящего времени остается основным ветеринарно-санитарным мероприятием (Еремец В.И.,2011). При изготовлении вакцин для выращивания вирусов можно применять ткани любого вида. Тем не менее, на сегодняшний день остается актуальной проблема выведения новых клеточных линий, чувствительных к вирусам – возбудителям болезней людей и животных.
С развитием биологической и фармацевтической промышленности становится более качественным и разнообразным рынок лекарственных средств для животных (Самуйленко А.Я. и др.,2012). Активное использование первичных культур клеток почки эмбриона коров (ПЭК), бычьих тестикул (БТ) и легких или их субкультур, а также перевиваемых линий клеток (МДБК и ТР) в вирусологии и постоянно возникающие новые аспекты их применения обусловливают расширение спектра клеточных линий, обладающих различными свойствами (Гаффаров Х.З. с соавт., 2002; Дьяконов Л.П., 2009, Иванов А.В. и др., 2010, Панин А.Н., Малик Н.И. и др., 2012, Плотникова Э.М.и др., 2012).
Клетки эмбрионального происхождения при культивировании обычно сохраняют жизнеспособность более продолжительное время, чем полученные из тканей взрослых организмов (Азаев М.Ш. и др., 2011).
В настоящее время существуют методы получения первичных культур из клеток почек кроликов 20-35 дневного возраста (Митов Б., Бостанджиева Р., 2008). Из этих данных видно, что чем старше возраст доноров, тем меньше вероятность получить первичную культуру и соответственно перевиваемую культуру из тканей, большее количество времени затрачивается на достижение полного монослоя.
1.2 Цели и задачи. Целью исследования являлось разработка способа получения культуры клеток из органов новорожденных крольчат для репродукции производственных штаммов вирусов.
В соответствии с поставленной целью необходимо было решить следующие задачи:
-
Определить чувствительность к вирусам: парвовирусу КРС, герпесвирусу типа I, вирусу ПГ-3, вирусу ВД-БС и вирусу болезни Ауески первично-трипсинизированной культуры клеток почек новорожденных крольчат и полученной из неё новой перевиваемой линии (КПНК), и подобрать оптимальные условия их культивирования.
-
Стабилизировать основные биологические характеристики полу-ченныхклеток.
-
Изучить возможность использования антимикробных препаратов для профилактики бактериальной контаминации полученной линии клеток.
1.3 Научная новизна. Впервые получена первичная культура клеток почек от новорожденных крольчат 1-2 дневного возраста и на ее основе выделена новая перевиваемая линия клеток. Установлена возможность использования данной линии в качестве биологического субстрата для выращивания вирусов, и определены оптимальные условия ее стационарного культивирования.
Подана заявка на предполагаемое изобретение РФ «Разработка метода получения клеток почек от новорожденных крольчат». Плотникова Э.М., Глаголева И.С. и др.- приоритетная справка ФИПС №2013107101/ 20 (0110574) 18.02.13 г.
1.4 Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований для производства вирус - вакцинных препаратов предложен новый способ получения и использования линии клеток почек новорожденных крольчат. По результатам исследований также составлен паспорт по использованию культуры клеток почек новорожденных крольчат.
1.5 Основные положения, выносимые на защиту:
Чувствительность к вирусам: парвовирусу КРС, герпесвирусу типа I, вирусу ПГ-3, вирусу ВД-БС и вирусу болезни Ауески первично-трипсинизированной культуры клеток почек новорожденных крольчат;
Усовершенствование метода получения культур клеток от новорожденных крольчат и оптимизация условий их культивирования;
Культуральные, цитоморфологические, кариологические и вирусрепродуцирующие характеристики стационарной перевиваемой линии клеток почек новорожденных крольчат (КПНК) и ее использование в вирусологической практике;
Биотехнологические параметры стационарного способа культивирования КПНК;
Возможность использования антимикробных препаратов для профилактики бактериальной контаминации линии клеток.
1.6 Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на конференциях: XVII Межвузовская научная конференция молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2011); конференция «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» (Казань, 2011); Международная научно-практическая конференция молодых ученых и специалистов «Биотехнологии в решении экологических проблем природы, общества и человека в Евразии: взгляд молодых ученых и специалистов» (Казань, 2013 г.).
1.7 Публикации. По материалам диссертационной работы опубли-ковано7 научных работ, в том числе 4- в изданиях, включенных в перечень ВАК РФ.
1.8 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 132 страницах компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, собственных исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений и приложений.
