Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 ФИАЛКА ПОЛЕВАЯ, ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ, ПРИМЕНЕНИЕ В НАУЧНОЙ И НАРОДНОЙ МЕДИЦИНЕ 12
1.1 Ботаническая характеристика растений рода фиалка 12
1.2 Фитохимический состав травы фиалки полевой 14
1.3 Применение фиалки полевой в научной и народной медицине 20
1.4 Способы получения экстракционных препаратов из лекарственного растительного сырья 21
1.5 Взаимосвязь анатомо-физиологических особенностей детского организма и технологии детских лекарственных форм 26
1.6 Современное состояние исследований в области создания детских лекарственных форм отхаркивающего действия 28
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ 34
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ 35
2.1. Материалы и объекты исследований 35
2.2. Методы и методики исследований 37
ГЛАВА 3 РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И НОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА ЖИДКОГО ЭКСТРАКТА ТРАВЫ ФИАЛКИ ПОЛЕВОЙ 49
3.1 Фармакогностическое изучение травы фиалки полевой, произрастающей на территории Северо-Кавказского региона 49
3.1.1 Макро- и микроскопический анализ растительного сырья и обоснование целесообразности ее малоотходной переработки 49
3.1.2 Определение нормируемых показателей качества растительного сырья... 53
3.2. Разработка технологии жидкого экстракта травы фиалки полевой 57
3.2.1. Разработка способа подготовки сырья, выбор экстрагента, метода экстрагирования для получения жидкого экстракта травы фиалки полевой 57
3.2.2. Нормирование качества жидкого экстракта травы фиалки полевой и установление условий и срока хранения 67
3.3. Изучение фармакологической активности жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой 73
3.3.1 Изучение антиэкссудативного действия жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой 73
3.3.2 Изучение влияния жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой на пролиферацию 74
3.3.3 Изучение антифлогистической активности жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой 75
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 3 :. 77
ГЛАВА 4 РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И НОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ШРОТА ТРАВЫ ФИАЛКИ ПОЛЕВОЙ 79
4.1. Разработка технологии сухого экстракта из шрота травы фиалки полевой 79
4.1.1. Получение и исследование сухого экстракта из шрота травы фиалки полевой 79
4.1.2. Нормирование качества сухого экстракта из шрота травы фиалки полевой, определение условий и срока его хранения 86
4.2. Фармакологические исследование сухого экстракта из шрота травы фиалки полевой 91
4.2.1. Изучение влияния на процессы экссудации 91
4.2.2. Изучение влияния на пролиферацию 92
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 4 94
ГЛАВА 5 РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ, СОДЕРЖАЩЕЙ СУХОЙ ЭКСТРАКТ ИЗ ШРОТА ТРАВЫ ФИАЛКИ ПОЛЕВОЙ 95
5.1. Разработка состава и технологии сиропа, содержащего сухой экстракт из шрота травы фиалки полевой 95
5.2. Нормирование качества сиропа с сухим экстрактом из шрота травы фиалки полевой 104
5.3. Изучение отхаркивающего действия сиропа с сухим экстрактом из шрота травы фиалки полевой 104
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 5 107
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 108
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПО
- Ботаническая характеристика растений рода фиалка
- Материалы и объекты исследований
- Фармакогностическое изучение травы фиалки полевой, произрастающей на территории Северо-Кавказского региона
Введение к работе
Актуальность темы. Из нескольких тысяч растений с установленными видами фармакологической активности лишь немногим более 200 разрешены в России к медицинскому применению. В их числе десятки видов лекарственного растительного сырья до сих пор используются только в форме водных извлечений -краткосрочных по хранению и практически неоцениваемых по качеству настоев и отваров. Данный подход в отношении растительного сырья, к тому же отягощенный устаревшими технологиями переработки, не соответствует современному требованию к его рациональному использованию, в частности, через получение в условиях мало- или безотходного производства нескольких фитосредств. К числу таких лекарственных растений относятся два близких вида фиалки - трехцветная и полевая, надземная часть которых применяется пока только в форме настоя отхаркивающего действия. Область применения и качество обоих видов лекарственного растительного сырья регламентируется единой для них фармакопейной статьей (ФС), в которой основным нормируемым показателем качества сырья является содержание двух гидрофильных групп биологически активных веществ (БАВ) — полисахаридов и флавоноидов. При этом фармакогностическому и технологическому изучению фиалки полевой, по сравнению с трехцветной, уделено значительно меньше внимания со стороны исследователей. Между тем, трава фиалки полевой имеет существенную сырьевую базу, особенно на территории Северо-Кавказского региона и могла бы стать объектом малоотходной переработки с получением нескольких лекарственных средств, в частности, на базе содержащихся в ней полисахаридов и флавоноидов.
Одновременно с рассмотрением вопроса о более полной переработке в промышленных условиях травы фиалки полевой, представляется целесообразным, с учетом фармакологических свойств этого сырья, создавать, в первую очередь, отхаркивающие средства для педиатрической практики. Ассортимент этой категории лекарственных препаратов отечественного производства крайне ограничен. Трава фиалки полевой с проверенной временем достаточно высокой
степенью безопасности применения для детского организма, является вполне подходящим объектом исследования и в этом аспекте. При этом для детей наиболее предпочтительной формой перорального применения лекарственных средств считается сироп, в котором удается сбалансировать необходимые фармакокинетические и органолептические свойства.
Таким образом, представляется актуальным исследование по технологическому изучению травы фиалки полевой, получению из нее в условиях малоотходного производства эффективных, удобных для применения и стандартизованных по качеству лекарственных средств.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлась разработка технологии лекарственных средств, содержащих гидрофильные комплексы БАВ из травы фиалки полевой, с использованием принципа малоотходной переработки растительного сырья.
Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:
провести фармакогностическое изучение травы фиалки полевой, собранной на территории Северо-Кавказского и других регионов, и составить проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) для использования сырья в производстве из него готовых лекарственных средств по малоотходной технологии;
обосновать целесообразность и выявить возможность получения фитоэкстракционных препаратов в условиях малоотходной переработки травы фиалки полевой;
разработать малоотходную технологию производства жидкого спиртового экстракта из травы фиалки полевой и сухого экстракта из её шрота, содержащих в качестве основных групп гидрофильные БАВ — флавоноиды и водорастворимые полисахариды, соответственно;
предложить показатели и нормы качества лекарственных средств, содержащих гидрофильные группы БАВ травы фиалки полевой, изучить условия и сроки их хранения;
- обосновать состав и разработать технологию пероральной жидкой
лекарственной формы, с сухим экстрактом из шрота травы фиалки полевой, изучить
условия и сроки ее хранения.
Основные положения, выносимые на защиту:
результаты фармакогностического изучения травы фиалки полевой, собранной на территориях Северо - Кавказского региона и Центрального Черноземья;
обоснование целесообразности и возможности малоотходной переработки травы фиалки полевой;
итоги исследований по разработке технологии жидкого экстракта травы фиалки полевой с применением метода вакуум-фильтрационного экстрагирования сырья;
предложенная схема малоотходной переработки, предусматривающая последовательное получение жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой и сухого экстракта с водоэкстрагируемым комплексом БАВ из шрота;
результаты разработки состава, технологии и норм качества сиропа отхаркивающего действия, содержащего сухой экстракт из шрота травы фиалки полевой.
Научная новизна. Впервые показана возможность, обоснована целесообразность и предложена малоотходная технология переработки травы фиалки полевой, предусматривающая последовательное получение из сырья двух фитопрепаратов -жидкого спиртового и сухого экстрактов.
Разработана технология жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой с использованием метода вакуум-фильтрационной экстракции, отличающегося высокой эффективностью и рядом преимуществ по сравнению с большинством применяемых в настоящее время способов извлечения БАВ из сырья.
Выявлена особенность экстрагирования флавоноидов из травы фиалки полевой вакуум-фильтрационным экстрагированием, заключающаяся в их максимальном переходе из сырья в два первых получаемых слива. Ориентируясь на флавоноиды как на основные спиртоэкстрагируемые БАВ травы фиалки полевой, предложено получать жидкий экстракт с коэффициентом съема готовой продукции 1:2. Показана
перспективность использования жидкого экстракта в лечении заболеваний, осложненных воспалительным процессом.
Впервые проведены исследования по разработке сухого экстракта, содержащего извлекаемый водой комплекс БАВ из шрота травы фиалки полевой. С учетом содержащихся в траве фиалки и обеспечивающих отхаркивающее действие полисахаридов, разработана оптимальная технология сухого экстракта, основанная на трехступенчатой ремацерации шрота горячей водой с последующим концентрированием и высушиванием в щадящих температурных условиях полученного извлечения. Для жидкого спиртового и сухого экстрактов осуществлено нормирование качества, определены условия и сроки их хранения. Разработан состав и предложена технология детского сиропа отхаркивающего действия, содержащего сухой экстракт из шрота травы фиалки полевой, проведена его стандартизация, установлены условия и сроки хранения.
Практическая значимость результатов исследования.
Разработанная технология жидкого экстракта (1:2) травы фиалки полевой, базирующаяся на вакуум-фильтрационном способе экстрагирования, позволяет истощить сырье на 85% по сумме всех извлекаемых 70% спиртом БАВ и на 90% - по флавоноидам. Установленное противовоспалительное действие жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой предполагает возможность его использования в качестве вспомогательного средства в комплексной фармакотерапии заболеваний, сопровождающихся воспалительным процессом. Предложенный жидкий экстракт позволяет расширить номенклатуру выпускаемых фармацевтическими фабриками суммарных фитопрепаратов.
Использованный в исследованиях принцип малоотходного производства делает возможным получение в одном технологическом цикле кроме жидкого спиртового экстракта травы фиалки полевой еще одного продукта - сухого экстракта, содержащего извлекаемый водой комплекс БАВ из остающегося шрота. Получение двух потенциальных лекарственных средств из одной производственной загрузки сырья будет способствовать повышению уровня рентабельности переработки травы фиалки полевой.
Проведенные исследования по созданию малоотходной технологии переработки травы фиалки полевой, результаты ее фармакогностического изучения позволили разработать проект фармакопейной статьи предприятия для использования этого сырья в производстве по малоотходной технологии последовательно двух лекарственных средств - жидкого и сухого экстрактов.
Разработанный состав, технология, проведенная стандартизация сиропа, выявленное отхаркивающее действие, а так же низкая токсичность входящего в его состав сухого экстракта из шрота травы фиалки полевой, создает предпосылку для внедрения в педиатрическую практику этой пероральной лекарственной формы. Разработанный сироп будет способствовать расширению ограниченного в настоящее время ассортимента эффективных и малоопасных фитосредств отхаркивающего действия для детей.
Степень внедрения. По результатам исследований разработан проект ФСП «Фиалки полевой трава» (акт внедрения ООО «Кубаньлектравы» от 19.09.06 г.), предназначенной для использования сырья в последовательном получении жидкого и сухого экстрактов по малоотходной технологии. Методики оценки качества и предложенные технологии фитопрепаратов травы фиалки полевой апробированы в отделах контроля качества и производственных цехах ООО «Кубаньлектравы» (акт апробации от 24.11.06 г.), ЗАО «Роскарфарм» (акты апробации от 14.04.07 г. и
18.04.07 г.). Разработан и утвержден лабораторный регламент на производство сухого
экстракта из шрота травы фиалки полевой на основе предложенной технологии (ГОУ
ВПО «Кубанский государственный медицинский университет Росздрава», 10.09.08 г.).
Фрагменты диссертационного исследования внедрены в учебный процесс фармацевтического факультета ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (акт внедрения от
04.09.08 г.).
Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены на III и IV региональных научно-практических конференциях молодых ученых и студентов юга России «Медицинская наука и здравоохранение» (Анапа, 2004 и 2006 гг.); Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фармацевтической науки и
практики» (Запорожье, 2006 г.); конгрессе «Человек и лекарство. Краснодар 2008» (Краснодар, 2008 г.).
По результатам исследований опубликовано 10 работ, из них 1 - в рекомендуемом ВАК издании.
Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (№ гос. регистрации 0120.0500289).
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения; обзора литературы; главы, посвященной объектам и методикам исследований; 3-х глав собственных исследований; выводов; списка литературы, включающего 168 наименований, в т.ч. 22 источника иностранных авторов. Работа изложена на 125 страницах машинописного текста, содержит 34 таблицы, 12 рисунков.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Ботаническая характеристика растений рода фиалка
Род фиалка Viola L. относится к семейству фиалковых Violaceae, и включает 900 видов, которые широко распространены по всему земному шару, от Арктики на севере до Фолклендских островов, а также Австралии, Новой Зеландии - на юге. В странах СНГ произрастает около 100 видов рода. Растения хорошо приспособлены к различным экологическим условиям. В областях Центрального Черноземья встречается примерно 20 видов, из которых одной наиболее распространенной является фиалка полевая [18,32,48,111].
Интерес к растениям рода Viola возрос в первой половине XIX в., благодаря садоводческим селекционным работам с анютиными глазками. Исследованию фиалок в первой четверти прошлого столетия посвящены работы двух выдающихся знатоков рода - монографа рода В. Беккера и балтийского флориста К.Р. Купффера. Труды первого наиболее значимы и представляют итоговый характер, поскольку ему в течение многих лет посылались для обработки и изучения обширные материалы по русским фиалкам.
Виды фиалок представлены многолетними, редко однолетними травянистыми растениями (в России), еще реже полукустарниками. Некоторые фиалковые -ползучие кустарники или лианы влажного тропического леса [41,48,111].
Растения рода фиалка имеют очередные листья, иногда собранные в прикорневую розетку. Цветки неправильные, одиночные, пазушные, на цветоножках с 2 прицветниками. Чашечка из 5 почти одинаковых чашелистников с небольшими, обращенными книзу придатками. Нижний лепесток со шпорцем или мешковидным выростом. Тычинки с широкими свободными, очень короткими нитями и со связниками, оттянутыми в треугольные придатки; две передние тычинки имеют нектарники при основании. Столбик обычно изогнутый, нередко с клювиком. У многих видов наблюдаются нераскрывающиеся клейстогамные цветки с недоразвитым венчиком и 2-5 тычинками. Плод - коробочка, обычно растрескивающаяся 3 створками и разбрасывающая семена. Семена с мясистым присемянником и без него.
Фиалка полевая - Viola arvensis Murr. - одно- или двулетнее травянистое растение с почти четырехгранным, прямостоячим или приподнимающимся, простым или ветвистым стеблем высотой от 10 до 35 см, рассеянно опушенным очень короткими волосками.
Нижние листья коротко яйцевидные или округло-овальные на черешках, равных листовой пластинке, или более длинных, с мелко выямчатым или округленным основанием; средние - продолговато-яйцевидные или удлиненно-эллиптические, с клиновидным основанием, низбегающим на короткий черешок; верхние - продолговато-ланцетные с мало-заметным черешком. Длина листьев колеблется от 5 до 70 мм, а ширина - от 2 до 25 мм. Листья городчатые и городчато-пильчатые (более верхние), с 2-5(7) зубцами на каждой стороне, вместе с прилистниками рассеянно-коротковолосистые, главным образом по краям и снизу по жилкам. Прилистники перисто-раздельные, длиной 2-40 мм с более крупной, часто листовидной конечной долей и линейными до узко-ланцетных боковыми долями, из которых внутренних три и наружных до шести. Цветки одиночные, на длинных цветоножках, длина последних составляет 25-110 мм. Имеется 2 ланцетных пленчатых прицветника. Чашелистики продолговато-ланцетные 5-16 мм длиной (с придатком), острые, придаток 1-4 мм длиной, неправильно зазубренные, внутренний вогнутый, заметно короче чашечки, или почти равный ей. Венчик светло-желтый с более бледными верхними лепестками, нижний лепесток, вместе со шпорцем длиной 5,5-14 мм, размер шпорца составляет 1-4 мм и не превышает придатков чашечки. Таким образом, у фиалки полевой венчик меньше чашечки. Плод - округло-трехгранная одногнездная коробочка, окруженная сохраняющейся чашечкой и раскрывающаяся тремя створками, длина коробочки составляет 6-10 мм. Створки, отклоненные горизонтально в виде лодочек, заполнены семенами. Семена продолговато-яйцевидные, буроватые, блестящие, с небольшим придатком. Размер семян варьирует в пределах от 1,5 до 1,8 мм.
Фиалка полевая распространена главным образом в Европейской части России, Западной Сибири, Восточной Сибири. Встречается как обычный полевой и огородный сорняк по открытым местам, у дорог, на лугах, полях, огородах, среди зарослей кустарников, на залежах и паровых полях [41,48,111]. Растения рода фиалка характеризуются наличием разнообразных биологически активных веществ. Из них выделены и изучены вещества фенольного характера (флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, кумарины, дубильные вещества), сапонины, полисахариды и другие природные соединения [12,13,16,66,142]. Достаточно хорошо исследован и химический состав фиалки полевой. Данные научной литературы об основных биологически активных веществах фиалки полевой, их содержании и преобладающих видах фармакологической активности этих веществ представлены в таблице 1.
Анализ данных научной литературы о химическом составе фиалки полевой позволяет сделать вывод, что среди флавоноидных соединений этого растения преобладает рутин с присущим ему противовоспалительным, капилляроукрепляющим, противоотечным и др. действием [34,149].
Кроме того, в цветках фиалки полевой был обнаружен антоциан виоланин. Фенолкарбоновые кислоты фиалки полевой представлены салициловой кислотой; простые фенолы - метилсалицилатом. В корнях обнаружен алкалоид виолоэметин.
Достаточно хорошо изучены полисахариды фиалки полевой: количественно определено содержание водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ, а также исследован их монозный состав. Значительное содержание полигликанов в надземной части фиалки полевой и присущее этой группе природных соединений противовоспалительное, иммуностимулирующее и отхаркивающее действие, безусловно, придают особую ценность данному растительному сырью [164,167].
Различными учеными было отмечено присутствие практически во всех частях растения аскорбиновой кислоты, качественно установлено наличие каротиноидов. Среди других классов природных соединений, входящих в состав фиалки полевой, найдены алкалоиды, органические кислоты, жирное масло, стероидные соединения, эфирное масло [34,46,60].
Материалы и объекты исследований
Настоящая работа проводилась с 2004 по 2007 г. на кафедре фармации ГОУ ВПО Кубанского государственного медицинского университета.
Объектами исследования служили измельченная трава фиалки полевой, заготовленные в Курской области, Краснодарском крае и Ставрополье.
Сырье заготавливалось в июне-августе 2004, 2005, 2006 гг. в период массового цветения растения. Сырье упаковывалось и хранилось в соответствии с требованиями нормативной документации на траву фиалки при комнатной температуре в сухом, хорошо вентилируемом не зараженном амбарными вредителями помещении, без прямого попадания солнечных лучей.
Образцы сырья травы фиалки полевой, использованные в качестве объекта исследований, приведены в таблице 2. Образцы шрота травы фиалки полевой были наработаны в лабораторных условиях после получения жидкого спиртового экстракта из данного лекарственного растительного сырья (вакуум-фильтрационное экстрагирование, экстрагент - спирт этиловый 70%, соотношение сырье-экстрагент 1:2) и удаления остатков экстрагента «острым» паром. Шрот травы фиалки полевой представлял собой однородную влажную массу светлого зеленовато-коричневого цвета с влажностью 52%.
При проведении экспериментальных исследований использовались субстанции лекарственных и вспомогательных веществ, отвечающим требованиям НД (ГФ СССР X и XI изд., отдельных ФС, ГОСТ, ОСТ и ТУ).
В качестве экстрагентов: спирт этиловый (ФС 42-3071-00), воду очищенную (ФС 42-02619-97) и спирто-водные смеси.
В качестве вспомогательных веществ для приготовления сиропа использовали:
- Сорбит пищевой ТУ 64-5-17-86 и ФС 42-2660-89;
- Сахар-рафинад ГОСТ 22-78Е, ФС 42-77-72;
- Сахарозу ГОСТ (5833-75);
- Фруктозу РОСС NL ПП05 В 04300 (Финляндия);
- Сорбиновую кислоту (ГОСТ 26181 -84);
При выполнении исследований использовалась следующая основная аппаратура:
- весы аналитические лабораторные 2 класса по ГОСТ 24108-80 (предел взвешивания 200,0 г);
- разновес аналитический по ГОСТ 7328-82;
- термостат по ГОСТ 25336-82;
- эксикатор по ГОСТ 25336-82;
- измельчитель двухвалковый лабораторный типа ПД 320-160/160;
- вакуум-сушильный аппарат;
- спектрофотометр СФ-56 (кварцевые кюветы с толщиной рабочего слоя 10 мм);
- центрифуга лабораторная УЛР-1;
- вакуумный роторный испаритель ИР-1М2;
- микроскоп тринокулярный ML-200T-S оснащенный цифровой камерой;
-экстракторы, фильтрационные установки, набор сит, приборы для определения технологических и товароведческих показателей и др. Определение влажности
Содержание влаги в исследуемом сырье определяли методом высушивания по ГФ XI [39]. Влажность сырья (W) в процентах вычисляли по формуле: где m — масса сырья до высушивания, г; mi — масса сырья после высушивания, г Определение экстрактивных веществ
Содержание экстрактивных веществ определяли по методике ГФ XI [39]. Исследовали следующие показатели: экстрактивные вещества, извлекаемые из травы фиалки полевой 70% спиртом и экстрактивные вещества, извлекаемые водой очищенной непосредственно из сырья и шрота.
Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц диаметром 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) помещали в коническую колбу вместимостью 200-250 мл, прибавляли 50 мл экстрагента, колбу закрывали пробкой, взвешивали и оставляли на 1 час. Затем колбу соединяли с обратным холодильником, нагревали, поддерживая слабое кипение в течение 2 часов. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывали той же пробкой, взвешивали и потерю в массе восполняли экстрагентом. Содержимое колбы тщательно взбалтывали и фильтровали через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150-200 мл. 25 мл фильтрата пипеткой переносили в предварительно высушенную при температуре 100-105С до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 9 см и выпаривали на водяной бане досуха. Чашку с остатком сушили при температуре 100-105С до постоянной массы. Все измерения проводили с точностью 0,0001 г.
Содержание экстрактивных веществ рассчитывали по формуле: где х — содержание экстрактивных веществ в сырье, г m - масса сухого остатка, г; nil — масса сырья, взятого на анализ, г; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; Определение золы
Определение общей золы в исследуемом сырье проводили по методике, рекомендуемой ГФ XI. Точную навеску (около 5,0 г) измельченного лекарственного растительного сырья помещали в предварительно прокаленный и взвешенный фарфоровый тигель, равномерно распределяя сырье по дну тигля. Затем тигель осторожно нагревали, давая сырью сгореть при возможно более низкой температуре. После почти полного сгорания угля пламя увеличивали. Прокаливание в муфельной печи вели при слабом красном калении (около 500С). По окончании прокаливания тигель охлаждали в эксикаторе и взвешивали.
Фармакогностическое изучение травы фиалки полевой, произрастающей на территории Северо-Кавказского региона
Результаты исследования последних лет в отношении травы фиалки позволили разработать новую фармакопейную статью на это сырье (ФС 42-0142-05). Для использования травы фиалки полевой как источника готовых лекарственных средств, производимых серийно по малоотходной технологии, требовалось разработать соответствующую фармакопейную статью предприятия (ФСП). Учитывая богатую сырьевую базу фиалки полевой на территории Северного Кавказа, а также наличие в Краснодарском крае и на Ставрополье большого числа заготавливающих и перерабатывающих растительное сырье предприятий, представлялось целесообразным использовать в исследованиях сырье данных регионов произрастания. Наряду с этим, вызывали интерес сравнительные фармакогностические исследования сырья, заготовленного в Курской области, поскольку при разработке ФС 42-0142-05 в основном использовалась собранная в этом регионе Центрального Черноземья трава фиалки полевой [8].
Макро- и микроскопическое исследования проводили на основе фармакопейных методик.
Подготовку материала для микроскопического исследования и анализ микропрепаратов проводили в соответствии с методиками ГФ XI [38,39].
При рассмотрении препаратов листа и чашелистика фиалки с поверхности видно, что клетки эпидермиса с нижней стороны более извилистые, чем с верхней стороны. Устьица длиной 21-40 мкм, шириной 28-45 мкм, имеются на обеих сторонах и окружены 3-4 околоустьичными клетками эпидермиса (аномоцитный тип). Замыкающие клетки устьиц имеют почковидную форму. Размеры клеток верхнего эпидермиса листа фиалки полевой: длина 70-130 мкм, ширина 30-50 мкм; нижнего эпидермиса: длина 70-110 мкм, ширина 50-90 мкм. Волоски двух типов -простые и головчатые. Простые волоски одноклеточные, длиной до 380 мкм, нежно-бородавчатые, с толстыми стенками, расширены у основания и заострены на конце; они располагаются преимущественно на жилках и по краю листа (рис 1.). Головчатые волоски с многоклеточной головкой (длиной 95-130 мкм) на широкой многоклеточной ножке, встречаются только по краю листа, в углублениях между зубцами (рис 2.). В мезофилле листа видны многочисленные крупные друзы оксалата кальция (рис 3.).
Клетки верхнего эпидермиса лепестков имеют сосочковидные выросты (высотой до 45 мкм). На эпидермисе средних и нижних лепестков, у основания, располагаются длинные одноклеточные тупоконечные волоски (длиной до 910 мкм) с тонкими стенками. На нижнем лепестке, при входе в шпорец располагаются извилистые длинные одноклеточные бугорчатые волоски длиной до 510 мкм.
В паренхиме нижней части лепестков встречаются друзы оксалата кальция. Размеры клеток эпидермиса лепестка венчика фиалки полевой: длина 60-100 мкм, ширина 20-80 мкм.
Клетки эпидермиса стебля длиной 210-900 мкм шириной 20-60 мкм, прямые, вытянутые по длине. Волоски эпидермиса стебля простые, длиной до 400 мкм, многоклеточные, заостренные на верхушке.
Исследование микробиологической чистоты травы фиалки позволило установить, что все исследованные образцы соответствовали изменениям №3 от 19.06.03 к статье ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» (категория 4 А) [39
Определение числовых показателей проводили по методикам, представленным в разделе 2.2.
При определении содержания экстрактивных веществ для исследования были выбраны следующие показатели: экстрактивные вещества, извлекаемые 70% спиртом этиловым, экстрактивные вещества, извлекаемые водой очищенной, непосредственного из воздушно сухого сырья и после обработки 70% спиртом этиловым. Данные показатели являлись необходимыми в определении целесообразности получения экстракционных препаратов из травы фиалки полевой в условиях малоотходной схемы переработки сырья, в т.ч. по их технологическому выходу. С этой целью нами принимались значения показателя «экстрактивные вещества» как ориентира на максимально возможное количество потенциально получаемого фитоэкстракционного продукта [81,124].
