Содержание к диссертации
Введение
1. Общая характеристика работы 6
2. Обзор литературы 11
2.1. Современные теории, представления об анемии сельскохозяйственных животных
2.2. Биологическая роль железа, меди, кобальта в организме 17
2.3. Средства, применяемые для профилактики и лечения больных анемией сельскохозяйственных животных 35
2.4. Перспективы использования янтарной кислоты и ее производных в животноводстве 42
3. Материалы и методы исследований 57
4. Результаты исследований 63
4.1. Сукцинат железа, дигидрат и его физико-химические свойства 63
4.2. Фармакотоксикологические свойства сукцината железа (II) дигидрата 63
4.2.1. Определение острой токсичности 63
4.2.2. Изучение субхронической токсичности и кумулятивных свойств 67
4.2.3. Кожно-резорбтивное и местно-раздражающее действие сукцината железа (И) дигидрата 69
4.2.4. Отдаленные последствия применения сукцината железа (II) дигидрата 70
4.3. Неспецифические факторы иммунитета крови кроликов, больных постгеморрагической анемией, при применении сукцината железа (И) дигидрата 74
4.3.1.1. Лизоцимная активность сыворотки крови (ЛАСК) 75
4.3.1.2. Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) 77
4.3.1.3. Фагоцитарная активность нейтрофилов (ФАН) 78
4.4. Влияние сукцината железа на специфические факторы иммунитета крови кроликов при постгеморрагической анемии 81
4.4.1. Уровень В-лимфоцитов 81
4.4.2. Уровень Т-лимфоцитов 83
4.4.2.1. Уровень Т-хелперов 85
4.4.2.2. Уровень Т-супрессоров 86
4.5. Влияние сукцината железа (И) дигидрата на гематологические показатели крови кроликов при постгеморрагической анемии 88
4.6. Влияние сукцината железа (II) дигидрата на биохимические показатели крови кроликов при постгеморрагической анемии. 94
4.7. Сравнительное изучение антианемических свойств сукцината железа (II) дигидрата и ферроглюкина-75 на модели постгеморрагической анемии белых крыс 99
4.8. Этиология, диагностика и клиника железодефицитной анемии свинома ток и применение сукцината железа (II) дигидрата для ее профилактики в учебно-опытном хозяйстве КГАВМ им. Н.Э.Баумана 105
4.9. Влияние разных доз сукцината железа (II) дигидрата на некоторые морфологические и биохимические показатели крови супоросных и подсосных свиноматок 111
4.9.1. Неспецифические факторы иммунитета свиноматок при применении сукцината железа (II) дигидрата в разных дозах... 121
4.9.1.1. Влияние разных доз препарата на БАСК 121
4.9.1.2. Воздействие разных доз препарата на ЛАСК 123
4.9.1.3. Влияние разных доз препарата на ФАН 124
4.9.2. Специфические факторы иммунитета свиноматок при применении сукцината железа (II) дигидрата в разных дозах... 126
4.9.2.1. Уровень Т-лимфоцитов 126
4.9.2.2. Уровень В-лимфоцитов 128
4.9.2.3. Уровень Т-хелперов 130
4.9.2.4. Уровень Т-супрессоров 132
4.10. Влияние сукцината железа (II) дигидрата на продуктивные качества свиноматок 134
4.11. Влияние сукцината железа (II) дигидрата в разных дозах и ферроглюкина на гематологические и биохимические показатели крови поросят-сосунов, полученных от подопытных свиноматок 136
4.12. Изучение влияния разных доз сукцината железа (II) дигидрата и ферроглюкина на неспецифические факторы иммунитета поросят-сосунов, полученных от подопытных свиноматок 150
4.12.1. ЛАСК 150
4.12.2. БАСК 151
4.12.3. Фагоцитоз 152
4.13. Изучение действия разных доз сукцината железа (II) дигидрата и ферроглюкина на специфические факторы иммунитета поросят- сосунов, полученных от подопытных свиноматок 153
4.13.1. Уровень Т-лимфоцитов 153
4.13.2. Уровень В-лимфоцитов 155
4.13.3. Уровень Т-хелперов 156
4.13.4. Уровень Т-супрессоров 158
4.14. Влияние разных доз сукцината железа (II) дигидрата и ферроглюкина на росто-весовые показатели и сохранность поросят - сосунов, полученных от подопытных свиноматок... 159
4.15. Влияние разных доз сукцината железа (И) дигидрата и ферроглюкина на санитарно-гигиенические и биологические показатели продуктов убоя поросят, полученных от опытных свиноматок 161
4.16. Микроморфология некоторых органов поросят, полученных от опытных свиноматок 168
5. Обсуждение результатов 187
6. Выводы 218
7. Практические предложения 221
8. Список литературы 222
9. Приложения 254
- Средства, применяемые для профилактики и лечения больных анемией сельскохозяйственных животных
- Перспективы использования янтарной кислоты и ее производных в животноводстве
- Фармакотоксикологические свойства сукцината железа (II) дигидрата
- Влияние сукцината железа (И) дигидрата на гематологические показатели крови кроликов при постгеморрагической анемии
Введение к работе
Актуальность темы. Алиментарная железодефицитная анемия поросят - возникает в связи с малым запасом железа при рождении и высокой потребностью в этом микроэлементе у интенсивно растущих поросят, а это вызвано, прежде всего, недостаточным содержанием его в молоке свиноматок и отсутствием других источников пополнения его запасов.
Согласно литературным данным, при интенсивном ведении свиноводства анемией заболевает до 100% новорожденных поросят, причем смертность доходит до 30-35%. У оставшихся в живых поросят наблюдается значительное отставание в росте и развитии, снижение среднесуточных привесов. Известно также, что у поросят, больных анемией, значительно снижаются клеточные и гуморальные факторы иммунитета, происходят глубокие изменения в обмене веществ, что является причиной развития в дальнейшем у таких животных различных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний (А.И.Карелин, 1971, 1983; Б.Д. Кальницкий, 1985; А.А. Заволокина, А.Ф. Бережной, 1988; И.П. Кондрахин, 1989; М.Г. Николадзе, 2002 и др.).
Проблемам диагностики, патогенеза, лечения и профилактики данного заболевания посвящено достаточно много работ, однако ведение современного животноводства требует отхода от традиционных и изыскания новых экономичных, доступных и технологичных средств, обеспечивающих своевременную комплексную профилактику болезней молодняка животных(В.И. Павлов, 1981; Б.Д. Кальницкий с соавт, 1988; М.П. Кучинский, 1988; Э.В.Тэн, 1991; СВ. Пантелеев, 1994; Н.С. Васильева 1996; Н.З. Хазипов с соавт., 1992,1997; 2000).
Работами отечественных и зарубежных ученых, проведенными в последние годы, установлено благоприятное воздействие на организм сельскохозяйственных животных янтарной кислоты и ряда препаратов на ее основе и рекомендовано их широкое применение для активизации обменных процессов, стимуляции гемопоэза, иммунитета, энергии роста, сохранности и продуктивности животных и птиц. Соли янтарной кислоты - сукцинаты также обладают высокой биологической активностью (М.Н.Кандрашева, 1976, 1997; Ю.Ю. Ивницкий с соавт., 1994; М.Н.Найденский с соавт., 1995, 1996; К.Х. Папуниди с соавт, 1997 - 2000; К.В.Шилин, 1999; А.В. Иванов, 2000). Однако многие из них изучены недостаточно. Так, в доступной литературе отсутствуют какие-либо сведения о сукцинате железа, его фармакотоксикологических свойствах и возможности применения при некоторых болезнях сельскохозяйственных животных, в частности для профилактики алиментарной железодефицитной анемии поросят. Исходя из вышеизложенного, изучение токсикологических свойств сукцината железа, влияние его на гемопоэз, обмен веществ, энергию роста и продуктивные качества свиней является актуальной задачей.
Цели и задачи исследования. Целью данной работы является изучение фармакотоксикологических свойств сукцината железа (II) дигидрата и разработка режимов его применения для лечения и профилактики анемии животных.
Исходя из вышеизложенного и в соответствии с отраслевой темой: «Разработать и внедрить методы ранней диагностики, лечения и профилактики нарушений обменных процессов у животных» (№ гос. регистрации 0194003692) для разрешения были поставлены следующие задачи:
1. Определить острую и субхроническую токсичность, кумулятивное, кожно-резорбтивное, местно-раздражающее, эмбриотоксическое и тератогенное действие сукцината железа.
2. Провести оценку антианемических свойств сукцината железа в сравнении с ферроглюкином-75 на модели постгеморрагической анемии белых крыс и кроликов.
3. Установить оптимальную дозу сукцината железа для кроликов и свиней и изучить эффективность применения его в системе «мать-плод», как средства, профилактирующего алиментарную железодефицитную анемию новорожденных поросят, в сравнении с ферроглюкином-75.
4. Выяснить влияние сукцината железа на гемопоэз и обмен веществ у
кроликов, супоросных и подсосных свиноматок и поросят-сосунов.
5. Изучить иммуностимулирующие свойства сукцината железа (II) дигидрата на кроликах, супоросных и подсосных свиноматках и поросятах.
6. Определить влияние сукцината железа на продуктивные качества свиноматок, а также энергию роста и сохранность поросят.
7. Провести ветеринарно-санитарную экспертизу мяса поросят, полученных от подопытных свиноматок.
8. Провести гистологическую оценку внутренних органов после применения сукцината железа (II) дигидрата.
Научная новизна работы. Впервые проведены комплексные исследования по изучению фармакотоксикологических свойств сукцината железа (И) дигидрата и определены режимы его применения. Установлено корригирующее влияние сукцината железа (И) дигидрата на гемопоэз, минеральный, углеводный, белковый обмен. Определено влияние препарата на энергию роста, сохранность и продуктивность поросят, а также определены гистологические и гистохимические изменения в органах и тканях и дана ветеринарно-санитарная оценка мяса поросят, полученных от подопытных свиноматок.
Установлено влияние препарата на иммунологическую реактивность организма животных и эффективность применения для лечения и профилактики алиментарной железодефицитной анемии животных.
Практическая ценность работы. Разработаны и предложены оптимальные режимы и дозы нового препарата «сукцината железа (II) дигидрата» в качестве лечебного и профилактического средства при алиментарной железодефицитной анемии животных.
На основании экспериментальных данных и производственных испытаний разработаны следующие нормативные документы: - ТУ 26349216600100102 на препарат «ферси» (11.11.2002 г.);
- лабораторно-технологический регламент получения железной соли (II) янтарной кислоты «ферси» (30.10.2002 г.);
- временное наставление на применение «сукцината железа (II) дигидрата «ферси» в ветеринарии. Утверждено Главным управлением ветеринарии Кабинета Министров Республики Татарстан 11.11.2002 года;
- рекомендации по диагностике, лечению и профилактике отравлений животных солями тяжелых металлов. Москва, ФГНУ «Росинформагротех», 2006 г.
Предложенное средство для профилактики и лечения анемии, повышения сохранности и продуктивности животных внедрено в хозяйствах Республики Татарстан и Марий Эл.
Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами и слушателями повышения квалификации, с работниками животноводства Республики Татарстан.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Фармакотоксикологическая оценка «сукцината железа (II) дигидрата»;
2. Обоснование корригирующего действия сукцината железа (II) дигидрата на гематологические, биохимические и иммунобиологические показатели лабораторных и сельскохозяйственных животных;
3. Оценка качества мяса и результаты гистологических изменений органов и тканей животных при использовании сукцината железа (II) дигидрата в качестве антианемического средства для профилактики алиментарной железодефицитной анемии поросят-сосунов;
4. Практические предложения по применению сукцината железа (II) дигидрата в животноводстве и ветеринарии.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на научно-производственных сессиях Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (1999 - 2005 гг.); Международных научно-практических конференциях: г.г. Краснодар (2001), Казань (2000, 2001, 2002, 2003, 2004, 2005, 2006), Витебск (2000), Москва (2001), Барнаул (2005).
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 26 работ, в том числе наставление, техническое условие и рекомендация по диагностике, лечению и профилактике отравлений животных солями тяжелых металлов и другими токсичными элементами.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 271 странице машинописного текста и состоит из следующих разделов: общая характеристика работы, обзор литературы, описание методов и результатов исследований, их обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения.
Работа иллюстрирована 53 таблицами, 41 графиком. Список литературы включает 304 источника, в том числе 72 на иностранных языках.
Средства, применяемые для профилактики и лечения больных анемией сельскохозяйственных животных
Целенаправленное развитие свиноводства обуславливает ограничение контакта животных с естественными источниками микроэлементов. Поэтому ни на одном свинокомплексе, исходя из биологических и анатомо-физиологических особенностей организма поросят в неонатальный и постнатальный периоды их развития, не обходится без применения железосодержащих препаратов для профилактики анемии у поросят (А.И.Сергиенко, 1991).
В настоящее время применяются следующие схемы профилактики микроэлементозов: пероральное и парентеральное введение препаратов и сочетание этих двух способов.
Железодефицитную анемию поросят можно с успехом лечить введением внутрь любой из многих неорганических или органических солей железа: железо восстановленное (мелкий порошок металлического железа); растворимые соли двухвалентного (лактат, фумарат и карбонат железа) и трехвалентного железа (двойная соль лимоннокислого железа и лиммоннокислого аммония, фосфат железа с цитратом натрия).
Наиболее часто применяемым ранее и самым дешевым препаратом являлся сульфат железа. Смачивание сосков свиноматки 0,5%-ным раствором сульфата железа, дача внутрь поросятам 0,5%-ного раствора сульфата железа в смеси равных частей его с 0,1%-ным раствором меди по 5 мл ежедневно считалась надежным приемом профилактики анемии подсосных поросят (А.А. Заволокин, А.Ф. Бережной, 1988). Подкормка свиноматок сульфатом железа в дозе 2000 мг/кг корма в расчете на металл за одну неделю до опороса и в течение 3 недель подсосного периода также предупреждала развитие анемии у поросят, существенно повышая обеспеченность организма этим элементом, увеличивая содержание железа в молоке в 1,4-1,8 раза, при этом легкодоступная фракция железа возрастала в 7-9 раз. Б.Д. Кальницкий, С.Г. Кузнецов и А.П. Батаева (1988) рекомендовали применять супоросным свиноматкам для профилактики анемии поросят сернокислое железо техническое в дозе 10 кг на 1 тонну корма. Аналогичным образом рекомендовались к применению и другие соли железа (Б.Д. Кальницкий, 1985; И.Г. Шарабрин с.соавт., 1985; Б.М. Анохин, 1991). Причем, более высокая усвояемость железа установлена из его сульфатов, хлорида, фумарата, глюконата, цитрата. Плохо усваивается железо из карбонатов, пирофосфатов, ортофосфатов, а также восстановленное железо. Железо из его окиси практически недоступно для организма животных (Е. МШег, 1981).
Нужно отметить необходимость введения микроэлементов в неорганической форме имеет ряд недостатков: в такой форме микроэлементы, в том числе и железо, сравнительно трудно усваиваются организмом животных, в то же время увеличение дозы для достижения оптимального уровня их ассимиляции вызывает у животных токсикозы. Входя в состав премиксов, неорганические соли микроэлементов часто создают среду, вызывающую деструкцию витаминов, повышение влажности премиксов, потерю активности антибиотиков, инактивации других ингредиентов, входящих в состав рациона, и прочие нежелательные изменения физико-химических свойств готового продукта (Б.Д.Кальницкий, 1985).
В данное время, как в нашей стране, так и за рубежом на производстве с целью лечения и профилактики анемии подсосных поросят широко применяют железодекстрановые препараты - ферроглюкин, ферродекс, ферродекстран, урсоферран, ферробалт, армидекстран, триферрол, импферон, импозил-200 и т.д. При интенсивной технологии выращивания свиней однократная (по 150 мг железа) или двукратная (по 100 мг железа) внутримышечная инъекция на 3-й и 12-ый день жизни поросят почти в 100% случаях предупреждает у них развитие железодефицитной анемии: в крови поддерживается нормальный уровень гемоглобина, эритроцитов, повышается количество сидероцитов, сывороточного железа; нормализуются запасы железа в организме, улучшаются привесы молодняка на 17-30%. Сочетанное двукратное применение ферроглюкина, декстрофера, ферродекса, ферроглюкина с тривитамином или витамином Вп обладает аналогичным воздействием на организм животных (Л.М. Джонс, 1971; П.В. Маринина, 1976; А.И. Карелин, 1976, 1983; А.В. Ковалев, 1981; Б.Д. Кальницкий, 1985; А.И. Сергиенко, 1991; Н.С. Васильевой, 1996; В.Т. Самохин, 2000; М.Г. Николадзе, И.М. Карпуть, 2000).
Использование аминоферродекса комплексного препарата, разработанного во ВНИВИ и содержащего незаменимые аминокислоты, ионы железа, меди и декстрины позволило стабилизировать эритропоэз, обмен веществ у свиней, что положительно сказалось в последующем на привесах животных и их воспроизводительных способностях (A.M. Алимов, М.С. Алиев, P.M. Ахмадеев, 1996).
Необходимо отметить тот момент, что парентеральное введение железодекстрановых препаратов имеет ряд существенных недостатков: в первую очередь, это приводит к тому, что животные испытывают стресс, нередки случаи гибели поросят после инъекции этих препаратов в первые 1-2 дня жизни, особенно при гиповитаминозах; во-вторых, данный способ может вызвать различные осложнения у животных, например, абсцессы; грязно-коричневое окрашивание мышц в местах введения препаратов, что снижает товарные качества свинины; кроме того, многие исследователи отмечают отрицательное влияние железодекстрановых препаратов на иммунную и антиоксидантную системы организма животных; и, наконец, такой способ профилактики железодефицитной анемии в условиях крупных свиноводческих комплексов слишком трудоемок (L. Goldberg, 1958; M.W. Woodard, К.О. Cockell, G. Woodard, 1964; D. Zivanov, Б.Д. Кальницкий С.Г. Кузнецов, А.П. Батаева, 1988; Г.П. Логинов, 1995; М.Ю. Метлякова, 2000; М.Г. Николадзе, 2002).
Исходя из этого, большое практическое значение приобретает изыскание возможности введения в рацион животных биогенных металлов в легкоусвояемой форме. Функциональная активность микроэлементов осуществляется при включении их в состав металлоорганических соединений определенной формы и структуры. В сочетании с органическими соединениями активность микроэлементов возрастает в сотни раз по сравнению с ионным их состоянием в организме животных (И.Н. Стеценко, 1981; Б.Д. Кальницкий, 1985).
Биологическая активность металлов и широкое участие во всех важнейших метаболических процессах, в клеточном химизме во многом зависит от их хелатирующей способности. Причем хелатирующие агенты оказывают положительное влияние только в том случае, когда соединения их с металлами достаточно устойчивы, чтобы препятствовать связыванию металла с другими соединениями, затрудняющими его усвоение в пищеварительном тракте. Тем не менее, константа устойчивости хелатов, образующихся в желудочно-кишечном тракте, должна быть ниже, чем у соединений соответствующих металлов с биологически активными веществами, вовлекающими металл в метаболические процессы. Установлено, что хелатные соединения металлов оказывают влияние практически на все виды обмена (Б.Д. Кальницкий, 1978; Б.Д. Кальницкий, С.Г. Кузнецов, О.В. Харитонова, 1981). Важно и то, что хелатные или органические соединения биогенных металлов способны проникать через плацентарный барьер и обеспечивать плод жизненно-необходимыми элементами (Б.Д. Кальницкий, 1985; Э.В. Тэн с соавт., 1991; Н.З. Хазипов, ГЛ. Логинов, 1992,1995,1997; Х.Ш. Казаков, 1972).
Перспективы использования янтарной кислоты и ее производных в животноводстве
Научными экспериментами доказано, что янтарная кислота -естественный продукт, вырабатывающийся в живых клетках. Она обеспечивает энергообмен на клеточном уровне и считается основным энергоносителем всего живого. Ее влияние на растения, животных и людей достаточно хорошо изучено. Установлено, что она является мощным средством повышения устойчивости организма к неблагоприятным внешним воздействиям за счет нормализации работы системы энергообмена. В отличие от многих стимулирующих препаратов, она не вызывает допингового эффекта - то есть истощающего подстегивания какой-либо системы организма, а является естественным метаболитом.
Как нам известно, янтарная кислота или как ее еще называют «сосновая кислота», представляет из себя короткую четырехуглеродную молекулу с двумя карбоксильными группами. Оба приведенных названия отражают первоначальный способ ее получения - из янтаря, то есть окаменевшей сосновойсмолы. В составе янтаря она сохраняется миллионы лет, что указывает на ее химическую устойчивость. О целебном действии янтаря писал в своем научном трактате лекарь Амирдоваат Амаскаци. Считалось, что практически нет таких болезней, от которых не приносил бы лечение этот камень. Он лечит близорукость и катаракту, сердечные недуги и ангину, останавливает рвоту и кровохарканье, изгоняет камни из почек и печени и содействует мочеиспусканию. Янтарь укрепляет органы живота и лечит болезни желудка, может быть использован против головокружений и кровотечений, сильного кашля и чахотки, судорог, истерий, ипохондрии, в случае ряда женских и простудных заболеваний. Считалось, что он спасает от слабоумия и удушья, помогает при неправильном обмене веществ, спазмах и коликах. В то же время дарит красоту и долголетие (О.В. Кривенко с соавт., 1994). Янтарная кислота давно в медицине и является универсальным участником обмена веществ живой клетки. Главная ее роль заключается в снабжении энергией митохондрий, что позволяет им, в свою очередь, осуществлять синтез АТФ. В основе работы митохондрий лежит использование энергии электронов. Источником электронов могут являться разные пищевые вещества. Наиболее известные из них - глюкоза или жиры. Но янтарная кислота является наиболее мощным источником электронов, и, как показала в своих работах профессор М.Н. Кондрашева (1968,1976), для обеспечения энергией физиологической активности (в отличие от состояния покоя) митохондрии преимущественно используют янтарную кислоту.
Эксперименты по изучению механизма действия янтарной кислоты и ее влияния на живые организмы начали проводиться учеными нашей страны и зарубежья со второй половины XX века. Янтарная кислота, активизируя дыхательную цепь и повышая мощность синтеза АТФ в митохондриях, является активным корригирующим средством нарушений энергетического обмена (М.Н. Кондрашева, 1976, 1991; Л.Д. Лукьянова с соавт., 1978).
Необходимость снабжения живой клетки электронами особенно ярко определил крупный биохимик Сент-Дьердьи. Он отметил, что основа жизненных явлений - эта работа потока электронов. А если это так, то введение в организм дополнительной янтарной кислоты может существенно повлиять на его работоспособность или устойчивость к неблагоприятным воздействиям. Это действительно удалось наблюдать в ряде исследований на животных и человеке. Особенно выражено стимулирующее действие янтарной кислоты при ослаблении организма и его заболеваниях. При этом установлено, что на здоровый организм янтарная кислота оказывает малое действие. При умеренных и средних отклонениях от нормы введение кислоты дает выраженный восстановительный эффект. При более глубоких сдвигах положительное янтарной кислоты проявляется более эффективно при сочетанном ее введении с другими веществами. Установлено, что положительное воздействие янтарной кислоты на организм может быть значительно усиленно одновременным введением витаминов Вг и В6, непосредственно участвующих в превращениях янтарной кислоты в организме. В отсутствии эффекта при исходно благоприятном состоянии объектов проявляется избирательность действия янтарной кислоты: она плохо проникает в нормальные ткани и значительно легче в клетки и проникает в нормальные ткани и значительно легче в клетки и ткани, находящиеся в состоянии возбуждения или патологического состояния (J.P. Mapes, R.A. Hariis, 1975; T.L. Spenser, 1976).
Согласно представлениям профессора Н.М. Кондрашевой (1974, 1977), само старение, истощение жизненных сил связано с постепенным накапливанием ошибок и сбоев в той системе организма, которая использует янтарную кислоту. Молодость и расцвет физической активности обусловлены наличием в организме достаточного количества янтарной кислоты. Дополнительное введение янтарной кислоты в организм способно даже восстановить некоторые, казавшиеся необратимыми, нарушения при старении и замедлить развитие старения. В условиях патогенного воздействия на организм в митохондриях происходит ослабление энергетической регуляции. При этом дыхательная цепь активизируется и при наличии факторов поддержки может обеспечить суперкомпенсацию. Янтарная кислота является мощным фактором такой поддержки. Источником образования ее внутри организма служат быстро окисляющиеся жирные кислоты. Но их запасы в организме ограничены. Эндогенное введение янтарной кислоты способствует поддержанию этих запасов. Сукцинат способствует усилению центрального звена внутриклеточной энергетики, увеличению окисления янтарной кислоты и активности сукцинатдегидрогеназы дыхательной цепи митохондрий: ускорению АТФ и восстановленных эквивалентов, а также стабилизации мембранного потенциала, как митохондрий, так и клетки в целом.
Установлена способность янтарной кислоты посредством энергетического обмена регулировать функциональные нарушения (нарушения сердечно-сосудистой деятельности, мышечной активности, утомления нервной системы) (Н.М. Петрунь и др., 1979; В.В. Дильман с соавт., 1976; В.В. Фралькис и др., 1976; В.И. Малюк с соавт., 1976), оказывать влияние на рост опухолей (В.Н. Анисимов, 1976,1979).
Доказано энергезирующее влияние на центральные регуляторные образования, находящиеся в состоянии возбуждения, особенно гипоталамус и надпочечники, что благотворно влияет на деятельность ряда органов (В.М. Дильман, М.Н. Остроумова, 1976; В.М. Дильман, В.Н. Анисимов, М.Н. Кондрашева, 1976).
Фармакотоксикологические свойства сукцината железа (II) дигидрата
Объектом исследований служили 42 белые мыши массой тела 18-22 г обоего пола, разделенных на 7 групп по 6 животных в каждой. Первые 6 групп животных являлись опытными: 1-ой группе мышей препарат вводили в дозе 500 мг/кг, 2-ой - 1000, 3-й - 1500, 4-й - 2000, 5-ой - 2500 мг/кг, 6-ой -3000 мг/кг, 7-ая группа животных служила контролем.
В результате исследований установлено (табл. 3), что доза 500 мг/кг сукцината железа не вызывала гибели подопытных животных. Через 20-30 минут после введения препарата в вышеуказанной дозе отмечали незначительное угнетение общего состояния животных. Спустя 60 минут отмеченные признаки исчезали, а через 2-3 часа животные внешне не отличались от интактных.
При введении препарата в дозах 1000 и 1500 мг/кг через 20-40 минут отмечали повышенную рефлекторную возбудимость, судорожные движения конечностями; гибель части животных наступала через 4-7 часов после применения препарата. Остальные мыши приходили в нормальное состояние спустя 4-Ю часов.
Введение препарата в дозах 2000 и 2500 мг/кг вызывало гибель соответственно 4 и 5 животных. Гибель мышей наступала от остановки дыхания в период судорог. Оставшиеся в живых мыши проявляли признаки беспокойства, бегали по клетке, вставали на задние конечности. Через 1-2 часа признаки возбуждения сменялись угнетением, а спустя 8-16 часов состояние животных начинало приближаться к норме. На 2-е сутки опытные животные внешне не отличались от контрольных.
Введение сукцината железа в дозе 3000 мг/кг вызывало гибель всех опытных мышей через 20-40 минут после применения (табл. 3, рис. 1). При вскрытии погибших животных наблюдали выраженную гиперемию легких, полнокровие печени, селезенки и почек, асфиксическое сердце.
На основании выживаемости животных в опытных группах после введения сукцината железа была рассчитана среднесмертельная доза (ЛД50) по формуле Кербера, а среднеарифметическую ошибку рассчитывали по формуле Геддема с соавт. Опыты по определению субхронической токсичности и кумулятивных свойств сукцината железа были проведены на 30 белых крысах обоего пола массой 185-195 г в течение 36 суток.
Препарат вводили ежедневно внутрижелудочно в виде суспензии на растительном масле при помощи иглы с оливой на конце. В первые 4 дня каждой крысе вводили 1/10 от ранее установленной однократной дозы ЛД5о. Затем каждые последующие 4 дня доза увеличивалась в 1,5 раза от предыдущих ежедневно вводимых доз. В процессе опыта регистрировали явления токсикоза и гибель животных.
Первые клинические признаки отравления сукцинатом железа (II) в виде угнетения наблюдались на 16-20-й день непосредственно после введения препарата. Спустя 1-1,5 часа отмеченные признаки исчезали, а через 2-5 часов животные внешне не отличались от интактных. На 20-й день введения препарата у животных отмечали угнетение, взъерошенность шерсти, отказ от корма. Эти признаки проходили через 8-Ю часов после введения препарата. Начиная с 22-го дня и до конца опыта (36 сут.), у крыс отмечали повышенную рефлекторную возбудимость, судорожные движения конечностями, гибель части крыс наступала через 1-12 часов после введения препарата. После 22-го применения сукцината железа погибла одна крыса, которая получила суммарно 11322,42 мг/кг, что в 6,8 раза превышает ЛД50 при однократном введении. Остальные крысы приходили в норму через 5-18 часов, при этом отмечали снижение массы животных. Смертность крыс повышалась в зависимости от кратности дозы препарата. На 23-й день пало 2 крысы, на 28-ой -2, на 30-й - 1, на 31-й -2 и на 32-день - 1 крыса. Дозы, вызывавшие гибель крыс, превышали ЛД5о сукцината железа при однократном применении более, чем в 7,55-19,7 раза. На 36-й день от начала опыта пала последняя крыса от дозы, превышающей ЛД5о в 29,95 раза. Результаты опытов представлены в таблице 4.
При вскрытии погибших крыс наблюдали выраженную гиперемию легких, полнокровие печени, селезенки и почек, асфиксическое сердце. Таким образом, вычисленный коэффициент кумуляции сукцината железа составил 22,9. Согласно методике Limm с соавт. (1961) коэффициент кумуляции больше 5 - это свидетельствует о развитии повышенной резистентности организма к изучаемому веществу.
Учитывая полученные результаты, можно считать, что сукцинат железа не обладает кумулятивными свойствами, а по классификации Ходже и Стернера относится к 4 классу опасности.
Влияние сукцината железа (И) дигидрата на гематологические показатели крови кроликов при постгеморрагической анемии
Одной из задач наших исследований было выяснение влияния препарата на гематологические показатели животных. Для решения поставленной задачи были использованы кролики, которых с учетом аналогов разделили на 4 группы по 5 животных в каждой (кролики породы «серый великан»; по четыре самки и одного самца в каждой группе; возраст -1,2-1,5 года; живая масса - 3,2-3,7 кг). Первые 3 группы животных были опытными: им задавали сукцинат железа соответственно в дозах 1/20 (1-ая опытная группа), 1/10 (2-ая опытная группа) и 1/5 (3-я опытная группа) от ЛД50- Четвертая группа животных служила контролем. Препарат задавали внутрь индивидуально с кормом в виде 10%-ной эмульсии в течение 30 дней.
Все животные, используемые в опыте, на основании проведенного непосредственно до начала эксперимента клинического обследования были признаны клинически здоровыми, поскольку каких-либо отклонений в клиническом статусе нами выявлено не было.
В дальнейшем, в ходе проведения исследований также не было выявлено каких-либо отрицательных изменений, как общего состояния, так и других клинико-физиологических показателей опытных животных, получавших с кормом сукцинат железа в трех различных дозах. Вместе с тем, анализ полученных результатов свидетельствует, что исследуемый нами препарат оказывал некоторое благоприятное влияние на изменение ряда показателей крови опытных животных в течение всего периода эксперимента.
Нами было установлено, что фоновое содержание количества эритроцитов и лейкоцитов, а также концентрации гемоглобина были у всех исследуемых кроликов на уровне нижних физиологических границ, характерных для данного вида животных, и колебались соответственно в среднем: эритроцитов - от 4,19 до 4,52x10 /л; лейкоцитов - 4,31-4,87х107л; гемоглобина - 81,7-82,7 г/л. Однако уже к 10 дню эксперимента у животных, получавших с кормом сукцинат железа, были отмечены положительные изменения вышеперечисленных показателей крови. А к 20 дню количество эритроцитов и гемоглобина возросло у опытных животных соответственно в первой, второй и третьей группах на 17,7; 30,7; 34,1% и 4,3; 7,3; 8,9%, а лейкоцитов - на 46,9; 55,1; 44,4% (Р 0,05-0,01). Тенденция к нормализации содержания форменных элементов крови (эритроцитов и лейкоцитов) и гемоглобина у опытных животных сохранялась и в дальнейшем. Благодаря этому к 30 дню эксперимента, то есть к концу опыта, содержание данных показателей под влиянием сукцината железа достигло нормальных физиологических значений. По отношению к показателям животных контрольной группы превышение количества эритроцитов составляло 22,4%; 23,3 и 26,2%; лейкоцитов - 32,6; 33,3 и 35,1%, а гемоглобина - 19,4; 19,0 и 21,0% соответственно в первой, второй и третьей опытных группах (Р 0,002-0,001). Наиболее выраженные изменения в процессе опыта происходили при использовании высоких доз препарата - 1/10 и 1/5 от ЛД50, о чем свидетельствуют средние показатели по группам.
Однако при статистической обработке данных показателей в указанных группах по отношению к животным, получавшим сукцинат 4 железа в дозе 1/20 от ЛД50, было выяснено, что уровень значимости Р 0,01-0,05, то есть различия в опытных группах недостоверны. В то же время у контрольных животных содержание эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина не изменялось на протяжении всего периода опыта и по-прежнему находилось на уровне нижних границ физиологической нормы (табл. 13 и графики 10, 11, 12).
Каких-либо существенных изменений не было отмечено и при подсчете среднего содержания тромбоцитов: у животных опытных групп, независимо от дозы применяемого препарата, в течение всего периода исследования их количество оставалось стабильным, колеблясь в пределах 112-192х109/л и не отличалось от такового в контрольной группе. Аналогичные результаты были получены нами также при изучении динамики скорости оседания эритроцитов, колебания которой составляли в процессе опыта от 0,5 до 2 мм/час.
При анализе лейкоцитарной формулы (табл. 14) и при изучении морфологии эритроцитов у кроликов опытных групп на протяжении всего эксперимента каких-либо отрицательных изменений не наблюдали. Соотношение различных лейкоцитов находилось в пределах нормативных физиологических величин, а в картине красной крови на 30-й день эксперимента были отмечены положительные изменения: значительная часть эритроцитов была представлена нормохромными нормоцитами с единичными полихроматофильными клетками. Что касается контрольной группы, то какого-либо существенного отличия в морфологическом составе лейкоцитов как по отношению к показателям животных опытных групп, так и по отношению к фоновым значениям выявлено не было. Однако, у них по-прежнему, как и в начале эксперимента, незначительная часть эритроцитов
