Введение к работе
Актуальность тема
Птицеводство - вачсяайшая отрасль хсавотноводства,дающая высокоценяне продукты для питания челозека.Повшенйе ПрСДуКТИВ-носхя а сохранности птицы,сяясеняе потзрь и улучшение качества яиц я мяса во многом обусловлено успехаьчі науки я,прежде всего, ветеринарной.Однако различные заболевания продолжают снижать продуктивность птицк,отрицательно влияют на ее сохранность и более того,сдерживают развитие племенного дела в целом по от-раели.Поэтому,профилактика и борьба о заболеваниями пищ,в том числе с медленными, латентно-пероастирущями инфекциями сохраняет свою актуальность.
В последние годи в СССР,как а в других странах мира,наблюдается некоторая рост распространения авиреовирусного заболевания,о котором первые сведения в литературе появились во второй половине пятидесятых годов,хотя вирус бил идентифицирован значительно позднее,а его этиологическая причастность к заболевании доказана лишь в семидесятых годах.
Авярео'вяруоное"заболевание до настоящего времени остается малоизученным из-за весьма разнообразного течения болез»ч, зарьврущпх изменения выявляемых при патологоана?оничесноы доследования птицы п трудностей при доказательстве этиологической роли авиреовирусов.Поэтому.ещо сегодня в разных стретах, заболевание первоначально получает название по доминирующим признакам а только позднее,на основании изучения этиологии и свойств вируса,болезнь относят к реовируеноЯ' инфекции.
В СССР авпро овируси впервые выделены от индеек в начале 70-х годов Германом В.В.,который изучил вх свойства и осуществил идентификацию возбудатехя.В эта же годы были выделены реовирусы от гусей Л.М.Коятримавячуо и изучены вх овойства.Од-нако в целом остаются неизучен.чиыз аэяреевяруоы,выделенные от кур, отсутствуют данные об антигенной" віриабальностя штаммов вируса,пх биологятэсках своЙожзах.Трзбуег созерагеястасванш дзагпостика заболевания,меры профилактика в борьбы.
Цель исследования. Целью яастояшях исследования Зш»: - выделить ої кур. я вядеек, реовирусы и леучять вх основные сзоЗства^
-- разоаботачь, методы) ддауводввк» реоввруснего заболевания У кур;
- обосновать рациональную систему мер профилактики и борь
бы о .реовирусной инфекцией у кур.
Основнне задачи исследований. Для достижения намеченных целей били поставлены следующие задачи:
провести обследование птицеводческих хозяйств в выделить реовяруоы от кур и индеек;
изучить основные физико-химические и биологические свойства реовирусов выделенных от кур я индеек;
изучить серологическое родство штаммов авиреовирусов выделенных от кур и индеек;
изучить методы серологической диагностики авиреовирусно-го заболевания;
дать оценку эффективности мер борьбы о авиреовирусным заболеванием.
Научная новизна. Впервые в СССР проведено изучение реовирусной инфекции у кур,получены сравнительные данные о физико-химических и биологических свойствах авиреоварусов выделенных от кур и индеек.
Установлено,что для очистки вируса могут быть использованы органические растворатели;вирус .лишенный лппидной оболочки устойчив к поверхностной денатурации л максимально накапливается в водном слое при центрифугирования.
. Разработана эффективная схема иммунизации для получения специфической к авяреовирусам сыворотки крови на кроликах и козах.
Не выявлено антигенных и серологических различий меаду штаммами авиреовирусов выделенных от кур и индеек.
Предложена методика получения эратроцитарного препарата для выявления и идентификации авиреовирусов в РИГА.
. Практическая ценность таботк. Установлено широкое распространение авиреоварусов в птицеводческих хозяйствах,показана целесообразность организации мер профилактики и борьбы с вызываемыми ими заболеваниями молодняка и взрослой птицы кур яичных и мясных пород.
Разработаны методы и средства диагностики авиреовяруоного . заболевания у кур.Для ветеринарной практики предложены Методические указания по лабораторной диагностике реовирусного заболевания сельскохозяйственных птиц.Рассштрены и одобрены Методической комиссией 5КИИЭВ (протокол № 16 от IS.10.SO г.) и
Методические рекомендації- по диагностике,профилактике и мерам борьбы с рєовируснпми згоолеванйямі! сельскохозяйственной птицы. Рассмотрены и одобрена Главный Управлением ветеринарии с Государственной ветервнарной инспекцией при Совете Министров СССР по продовольствии и закупкам 11.04.00,15 043-6/4.08.
Апробация. Материалы диссертация доложены и одобрены:
на заседаниях .і отчетных сессиях ученого Совета и проблемного Совета У&ШВ 1988-1990;
8-й научно-практическое конференция молодых ученых й специалистов,посвящанной 70-3 -годовщине Великой Октябрьской Социалистической революции (г.Харьков,1987 г.);
республиканской научной конференции молодых ученых (г.Харьков,IS68 г.);
республиканской научной конференции молодых ученых (г.Харьков,1930 г.);
конференции национального отделения СССР Всемирной научной ассоциации по.птицеводству (-Рига, 1990 г.).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы, одна в печати.
Положения выносимые на защиту.
результаты исследований по выделению авиреовирусов от кур и индеек п изучение их физико-химических а биологических свойств;
усовершенствование диагностики авиреовирусного заболевания у кур и индеек;
обоснование к системе мер борьбы о авиреовирусным заболеванием.
Обьем и структура.работы. Диссертация изложена на Юб страницах машинописного, текста и-включает: общая характеристика работы,обзор литературы,собственные исследования,обсуждение результатов исследований,выводя,практические предложения, список литературы,приложение.
Работа иллюстрирована 20 таблицами,2 риоуяками.Список использованной литературы включает 121 источников из них НО вноотранннх.
2. СОБСТВЕННЫЕ КОСДЕДОЗАЮИ Материалы и методы
Работа выполнена в течение I987-ISS0 гг в лаборатория изучения болезной птиц Украинского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (УН1ГЛЭЗ).
Вирусы. В работе использовали полевые эпизоотические штаммы овяреовирусов выделенных при выполнении работы "BSQ", "ВВ-88",,Ч1Т-88,,,"3-гЗ","Т.ш-88",иШ1-8Э",,'Ж-89".Эталошшй штамм авиреовяруса"С13-?3",выделенный и идентифицированный Герман В.В. я эпизоотические штамма авирсовирусов хранящиеся в банке лаборатория - "Г-65",,Т8-84",иН8-в6,,,',1Ш-Б6,|.В работе были использованы и другие вирусы - вакцинный La-Sota ,вирус инфекционного ларянготрахеита (ИДТ),болезни Марека,аденовируо первого серотипа.
Куриные эмбрионы,цыплята я др. животные. Куриные эмбрионы в цыплят, получала из благополучных по реовирусной инфекции хозяйств.Всего в работе использовали 2000 эмбрионов,300 цыплят, 30 петухов,30 индеек,25 кроликов и 3 козы.
Вирусологические д'оследодания. Вирусы выделяли от павшей и больной птицы, использз'я средние пробы тканей д органов,а так же отдельные органы.Подготовка материала к заражению.велась общепринятыми методами в вирусологии.Исследуемый материал ино-куляроьали з хораоналлантоисную полость развивающимся куриным эмбрионом II-дневного.возрвста.Эмбрпоны после заражения инкубировали при +37С 5 суток,ежедневно овоскопяровала,удаляли павших,а оставшихся в живых размещали на 10-12 часов в холодильнике при +40С.Затем их вскрывали а исследовали.
Кагд&ч исследуемая проба патологического .чатериала проходила не менее 3 пассааей.
Титрование вируса проводили на куриных змбрвонах.Титр вируса расчитывали по кегЬегг (І93І)и модификация Аівмаршіа П.И (1961) а выражали в ИД50/0,2 мл. '.
'. Идентификация" вирусных изолятов. Для идентификации изоля-тов изучали.их основные физико-химические свойства,определяли тип. нуклеиновой кислоты и чувствительность к хлороформу по методу Майера А. а др.' (1977),чувствительность изолятов к дей-
отвйи эфира и температуры определяли по методу Говозо Г.С.,. Берку С.Н.(Ї973) в медяфикации УНИИЭВ.
Серологически вярускке изоляты идентифицировали в РТА, . І>НГА,РДД.
Изучение биологических свойств штамноз авнреовируооа.Проводили на куриных эмбрионах П-дневного возраота,введением ви-руссодершцего материала в титре 10 или 10 в разведении Ю-4 я объеме 0,2 мл в аллантоаснув полость.
^атогешость авяреовирусов для куриных эмбрионов определя
ла погибели,в течение 5 суток,токсичность вируса оценавали по
выводимости зараженных эмбрионов.
При изучении патогегюсти выделенных штампов авиреовяру-сов для суточных цыплят использовали два метода заражения: -оральный л подкошшЗ;подкоЕни8 п введением в подушечку стопы. Вируосодершцпй материал в титре 10 "^ вводили в объеме 0,2мл в разведение Ю-4.Наблюдение за цыплятами продолжалось 30 дней. Серологические исследования провели на 10,20,30 дней.Опыт проводили в двух повторностях.
Павших в ходе опыта эмбрионов и цыплят исследовали бактериологически а патологоанатомическя.
Очистка и концентрация авиреовируса. Очистку авиреовируоа проводили методом удаления балластных веществ с использованием органического растворителя 20$ хлороформа Poison, a., Seiaer и.
(І954).К0НЦЄНТраЦИЮ вируса.Осуществляли ПО методу Laberman н.
(1966) осаждением ПЭГ-6000.
Хроматографию вируса вели на сєфадекое^Кленина Н,В.,Буи-' ТЄДТ Д.ВДЇ967), Sekiguohi К.,Koide F. ,Ka*amura Н. (1968),).
Получение гипериммуяных сывороток к авяреовдрусу. Для получения специфической сыворотки крови.к авиреоБирусу иммунизировали птицу по схеме Усманходжаева А, .Закетельокой Л,,(1965).
Были яспнтаны схемы- иммунизации- кроликов з коз.Иммунязадаю кроликов проводили.введением вируссо держащего' материала в объеме 0,25 ш 2 дня подряд в третье веко а последующую инъекцию подкошу в области шеи.Цикл повторили через 14 дней,кровь брали на 18 день.
Иммунизацию коз проводили внутривенно,введением вируса 3 дня подряд в дозах115^а 5 мл.Курс повторяла через 14 дяэй, я'ровь брали через 18 дней.
Серологические исследования» Реакцию гемагглютинации. ставили на предметных стеклах в плексигласовых пластинках с использованием эритроцитов петуха 1,5$ и 1%.
Реакцию непрямой гемагглюгянации РИГА,ставили шкро и мак-рометодом с использованием эритроцитарного диагностикука для выявления специфических антител б сыворотке крови больной и переболевшей птицы,ишунизироЕаанкх. животных.Использовали также эритроцитарннй препарат для обнаружения и идентификации авирео-вирусов в ЇА оболочках куриных эмбрионов и в органах больных птиц.
Реакцию диффузионной преципитации (РДП) ставили в агаровом геле в чашках Петри и на предметных стеклах по методу oucthter Lony (1948).Использоеоли 1% раствор агара Дифяо и 9% агара УЖЭБ приготовленные на:
а/ 8/й-ном растворе хлористого натрия РЯ-7,2,* б/ фосфатно-буферном растворе,содержащем 0,85 хлористого натрия РН-7,2; . в/ забуференном растворе содерзящем дистиллированную воду; I, 25,155 г/л Ха^Щ 2,9,073 г/л дисг.юдн КН4Р04 3»8,5 г йаОІ на 726 мл пзрого р.отора+ 2.1$ мя. второго
раствора. Дааусїр луной 5-8 им расстояние между лунками 3-6 мм.
Изготовление зри тгоци тарного анти тельного препарата.
При разработке средств и гйт-сйзф серологической диагностики авлреоьирусногс заболевания Ътя выполнены всоледсаакая ко изготовлению антительного препарата и хзйгхвіхтт? его использования в РИГА.
В основу ИЕГОтоаяййие была положена методика воуцеп s.v. (IS5I) в шде|Д58Яй:* «азурлноіЗ М.ГДІ97І). и УНЖВ (1580).
Т&ШіХвгйя изготовления препарата Еклшала следущае этапы:
I.Получение специфической ямкунной сыворотки к авиреови-руоу.
2.Приготовление консервированных эритроцитов барана (фор-малинизацая-таяизация эритроцитов).
3.Сенсибилизация, приготовленных эритроцитов иммунной сывороткой.
4.РссуспензяроЕание сенсибилизированных эритроцитов в 0,5^ глицерина знроваїшо-м физрастворе (РН-7,2-7,4) в 10^ концентрації!
' 5.Ислытаяие специфичности я дктявностя препарата. 6.Хранение и лиофилизацяя препарата.
