Содержание к диссертации
Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7-51
1.1. Распространение и экономический ущерб от инфекционного эпидидимита баранов 7-Ю
1.2. Характеристика возбудителя 11-16
1.3. Диагностика инфекционного эпидидимита баранов
1.3.1 Клинический метод диагностики 16-20
1.3.2 Патоморфологический метод диагностики 20-23
1.3.3 Аллергический метод диагностики 24-27
1.3.4 Серологический метод диагностики 27-31
1.3.5 Бактериологический метод диагностики 31-34
1.4. Специфическая профилактика инфекционного эпидидимита баранов
1.4.1 Теоретические основы иммунной профилактики 34-40
1.4.2 Реактогенность и иммуногенность вакцин из штаммов Br.melitensis Рев-1, "Невский" и К-24 40-43
1.5. Методы оздоровления 43-49
1.6. Заключение по литературному обзору 49-51
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЗДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы 52-57
2.2. Характеристика эпизоотической ситуации по инфекционному эпидидимиту в Красноярском крае .
2.2.1 Основные источники, пути и степень распространения заболевания 57-78
2.2.2 Характеристика свойств возбудителя 78-87
Сравнительная оценка методов и средств диагностики инфекционного эпидидимита баранов
1 Испытание специфичности и активности новых антигенов для РДСК 87-97
2 Изучение диагностической эффективности бруцелло-овина и бруцеллина ВиЭВ 97-104
3 Клинические и патологоанатотлические методы .104-114
Реактогенность и иммуногенность вакцин из штаммов Br.melitensis при инфекционном эпиди-
димите баранов
1 Изучение свойств вакцин из штаммов Рев-1 и К-24 в эксперименте
2 Испытание вакцин из штаммов Рев-1, К-24 и "Невский-12" в производственных условиях
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
Введение к работе
Актуальность темы. Бруцеллез сельскохозяйственных животных, в том числе и болезнь овец, вызываемая Br.ovis-инфекционный эпидидимит баранов,все еще имеет значительное распространение в нашей стране, являясь серьезным тормозом в развитии этой отрасли. Экономические убытки от инфекционного эпидиди-мита баранов слагаются из преждевременной выбраковки и сдачи на убой высокоценных племенных животных, недополучения молодняка вследствие поражения органов производителей (орхито-эпи-дидимиты), яловости овцематок, абортов, рождения нежизнеспособного молодняка, ветеринарно-санитарных ограничений в племенной работе и расходов, связанных с проведением оздоровительных мероприятий.
Актуальность темы определяется народно-хозяйственным значением проблемы искоренения бруцеллеза сельскохозяйственных животных в нашей стране, а также задачами, стоящими перед ветеринарной наукой, сформулированными Постановлением Щ КПСС и Совета Министров СССР В 889 от 10 сентября 1981 года.
Исходя из этого постановления и последующих директивных документов (постановление Совета Министров РСФСР В 578, приказ МСХ РСФСР JS 947 и др.) перед научно-исследовательскими ветеринарными учреждениями страны ставится задача - разработать систему наиболее эффективных мероприятий по профилактике и ликвидации бруцеллеза сельскохозяйственных животных.
Применительно к инфекционному эпидидимиту баранов в си-
стеме оздоровительных мероприятий особое место занимает специфическая профилактика. К началу наших исследований (1976 г.) сведения об испытании вакцин при этом заболевании были ограничены отдельными сообщениями (П.А. Триленко с соавт., 1968; М. Далгат, 1957 и др.) без оценки их эпизоотической эффективности, не было также данных о сравнительном испытании новых овисных диагностикумов, предложенных рядом исследователей (Л.В. Дегтяренко, 1976; Н.П. Иванов, Т.Н. Солнцева, 1973 и др.). Следует отметить, что в специальной литературе эти вопросы и до настоящего времени не нашли должного освещения. Положительное решение этих вопросов будет способствовать более успешной реализации оздоровительных мероприятий.
Цели и задачи исследования. Целью наших исследований являлось изучение противоэпизоотической эффективности разных средств и методом специфической диагностики и профилактики инфекционного эшщидимита баранов. В связи с этим были поставлены ел едущие задачи:
Изучить степень распространения инфекционного эпидидими-та баранов в хозяйствах Красноярского края.
Дать сравнительную оценку новым овисным диагностикумам (бруцеллоовин ВТЕКИ - КазНИВИ - ИЭВСДВ, овисный антиген РДСК ИЭВСДВ и патологические изменения спермы).
Изучить реактогенность, иммуногенность и противоэпизо-отическую эффективность вакцины из штаммов Br. melitensis Рев-І, К-24 и "Невский-12" при инфекционном эпидидимите баранов.
Научная новизна. Впервые изучена эпизоотическая ситуация по ИЭБ в хозяйствах Красноярского края, в т.ч. в Хакасской
автономной области. В сравнительном аспекте показана диагностическая ценность новых овисных препаратов и методов диагностики (бруцеллоовин, овисный антиген РДСК ИЭВСДВ, патологические изменения спермы).
Изучены в сравнении реактогенность и иммуногенность вакцин ИЗ штаглмов Br.mellitensie Рев-І, К-24 И "Невский-12" при искусственном заражении баранов вируяіигаой культурой Br.ovis и контролируемых эпизоотических опытах. Определена эпизоото-логическая эффективность вакцины из штамма Рев-І в зависимости от схемы применения вакцины и эпизоотического фона.
Теоретическое значение. При использовании вакцины из штаммов бруцелл с различной антигенной структурой и степенью изменчивости выяснена их способность формировать иммунитет при заражении привитых животных культурами вида Br. ovis,являвшегося стабильным генетически закрепленным диссоциантом.Крсме того, проведенными исследованиями дан конкретный ответ на теоретический вопрос о возможности использования в качестве вакцины при инфекционном эпидидимите баранов штаммов бруцелл гетерогенного вида, притом в s-форме (Br. meliitensis Рев-І).
Практическая ценность. Получены положительные результаты по оздоровлению овцеводческих хозяйств от инфекционного эпи-дидимита баранов путем использования в общем комплексе оздоровительных мероприятий вакцины из штамма Рев-1. Разработана схема применения вакцины, которая позволяет достигать оздоров-V/ ления в 4-6 раз быстрее и сокращает заболеваемость в 5,5 раза.
Патоморфологический метод диагностики
Изучении патоморфологических изменений у естественно больных ИЭ баранов G.Simmons, W.Hall (1953), M.Buddie, В. Boyes (1953), S. Miller, L.Moule (1954), J.Jebson et al. (1955), E.Biberstein et al. (1964) описали наиболее характер - 21 ные изменения, развивающиеся главным образом в придатках семенников. Более детально этот прием описан П.А.Триленко с со-авт. (1968), А.СЩербаковым (1969), К.Махамбетовым с соавт. (1972), Н.С.Вождаевым, Ю.И.Шергиным (1972), П.Д.Устархановым с соавт. (1973), К.Бакърджиевым с соавт. (1964), K.Clapp et al. (1962), W.Lawhence et al. (1964), А.Димитровым (1974) и др.
J.Jebson et al. (1955) у естественно больных ИЭБ, а P.Kennedy et al. (1956) при экспериментальном интратестику-лярном заражении животных установили, что первичные поражения ограничивались хвостом придатка. Гистологические исследования показали, что латентный период может продолжаться несколько месяцев.
В.П.Воинова, В.А.Барышникова (1965), Л.И. Комиссарова (1975), Л.В.Рыжкова (1978), А. Димитров (1966), в. Swift, P. Weyerts (1970), L, Stoff, G.Voung (1971) и др. гистологическими исследованиями органов у баранов при ИЭ подтвердили, что изменения главным образом происходят в половых сферах животного.
В острый период болезни патологические изменения локализуются в основном в хвосте придатка, паренхиме и протоке предстательной железы. Сосуды тестикул расширены, ткань хвоста придатка отечна, с наличием желтоватых очажков. Предстательная железа увеличена, паренхима отечна, стенки притоков утолщены, отечны с точечными кровоизлияниями (Х.Рашев,И.Ге-лев, Г.Попов, 1966).
При хроническом течении болезни фибринозная ткань разрастается и охватывает весь семенник, происходит сращение при - 22 датка с семенником и общей влагалищной оболочки. Пораженный придаток увеличен в объеме, ткани его уплотнены с характерной бугристостью. В некоторых случаях семенник, вследствие фибринозного воспаления общей влагалищной и белочной оболочек, срастается с мошонкой, паренхима приобретает склеротический вид. На разрезе единичные или множественные секвестры различной величины, заполненные желтовато-белой, зеленовато-сметано-образной или сухой крошкообразной массой, окруженной толстым слоем разросшей соединительной тканью.
Нередко семенники уменьшены в объеме, уплотнены, иногда на разрезе обнаруживали небольшие единичные очаги с плотным , творожестым содержимым желтовато-серого цвета.
p. Kennedy et al. (1956) отмечали поражения хвоста придатка в 90% случаев, причем это увеличение достигает 4-5 кратных размеров.
Некоторые исследователи (S.Miller, G.Moule, 1954; J.Jeb-son et al., 1955; P.Kennedy et al., 1963; C.Tudoriu et al., 1959; M.Boddle, 1959; W.Lawrence, 1961) отметили патоморфоло-гические изменения только в половых органах. Однако T.Gdovin et al. (1961), E.Biberstein et al. (1964) находили изменения вне половой сферы, которые были отмечены во всех висцеральных органах, в том числе и в органах ретикулоэндотелиаль-ной системы.
Патизменения у овцематок и их плодов как при естественном заражении, так и экспериментальном, были описаны Л.И.Комиссаровой (1975), W.Hartley (1961), T.Molello et al. (1963), B.Osbum, P.Kennedy (1966), А .Димитрова 1966), P. Ciprian et al. (1967). По их данным, изменения у овцематок проявлялись наличием желтовато-липкой гноеподобной массы на поверхности околоплодной оболочки и хориоаллонтоиса. В более тяжелых случаях в местах выраженного некротического процесса хориоаллон-тоисная оболочка сливается с амнионом, утолщается до 2-3 см, некроитизируется иногда с захватал кровеносных сосудов, кате-ледонов. Отечный послед имеет студенистую консистенцию.
После заражения баранов Br.ovisf P.Cameron et al. Д976) через 1-6 недель появляются первые признаки патологических изменений в сперме, через 6-8 недель изменения придатков семенников. P.Gamcik (1961) в специальных опытах обнаружил, что при острой форме эпидидимита выраженное патологическое изменение спермы появляется на 10-20 день после заражения, а К.Бакърджиев (1972,1976) отмечает, что больные ЙЭ бараны продуцируют сперму в 2 раза меньше здоровых и при этом выделяют до 29-30% патологических сперматозоидов. В некоторых случаях при острой форме заболевания выделение возбудителя инфекции может быть даже на третий день, в то время как при хроническом течении ЙЭ изменение спермы зависит от степени патологического процесса, приводящее к нарушению морфологии сперматозоидов.
Результат оплодотворения овец зависит от степени повреждения спермы (T.Gdovin, I960;P.Camcik, I960 И др.). Б.Н. Афанасьев (1974) при исследовании спермы от баранов, подозреваемых в заболевании, вызываемом Br.ovis, обнаружил устойчивую некроспермию.
Таким образом,данные показывают, что возбудитель ИЭ избирательно поражает половые органы баранов и овцематок.Болезнь у баранов протекает в виде эпидидимита с нарушением сперма-гене за.
Материалы и методы
Для изучения эпизоотической ситуации по инфекционному эпи-дидимиту в районах с развитым овцеводством Красноярского края, а также с целью изучения методов диагностики в производственных и лабораторных условиях было исследовано животных: серологически 43600 , сероаллергически 3125 , комплексно (клинически и сероаллергически) 2916 , бактериологически 206 (из них сделано посевов на 12560 пробирок с питательными ере - 53 дами), гистологически - материал от 59 барановйшо использовано в эксперименте по изучению реактогенно-сти и иммуногенности вакцин 147 баранов, в контролируемых производственных опытах 251 баран и 100 лабораторных животных для биопробы.
При изучении ареала инфекционного эпидидимита баранов были использованы отчетные данные краевых, областных и районных ветеринарных учреждений и собственные исследования, проведенные непосредственно в хозяйствах. Проведен анализ отчетных данных по распространению ИЭ и хозяйствах Хакасской автономной области, Минусинского, Краснотуранского, Курагинского, йдринского, Шушенского, Новоселовского, Ужурского, Шарыпов-ского и Ермаковского районов. Обследовали 82 овцеводческих хозяйств края. Исследовано 54320 животных, в том числе баранов-производителей ІІ600 голов, молодняка - 14700, овцематок - 3820. Исследование проводили методом клинического осмотра животных, серологическими реакциями (РА, РСК, РДСК) биофабричными бруцеллезным и овисным антигенами и испытуемыми овисными антигенами КазНИШ и ИЭБСиДВ, приготовленными авторами (Н.П.Иванов и А.В.Дегтяренко). Кроме того применяли аллергическую пробу с использованием официального диагности-кума - бруцеллина ШЭВ и нового препарата - бруцеллоовина ВЕНКИ - КазНИВИ - ИЭВСиДВ, который получали из КазНИВИ. Методы введения и читка реакций описаны в соответствующих разделах диссертации.
Исследование по изучению иммуногенности и реактогенно СТИ вакцин ИЗ штаммов Br.melitensis Рев-I, К-24 И "Нев-ский-12"при ИЭБ проводили в экспериментальных и производст - 54 венных условиях.
Для специфичности иммунизации против ИЭ и изучения состояния иммунитета у баранов нами были применены вакцины из штаммов Br.melitensis Рев-I, К-24 и "Невский-12".
Вакцину из штамма Рев-I биофабричного производства (Алма-Атинского биокрмбината) использовали согласно наставлению подкожно в дозе 2D млрд.м.т. в объеме 2 см3.
Вакцину из штамма Br. melitensis К-24 получали расфасованную по флаконам, приготовленную в проблемной лаборатории по изучению бруцеллеза Ленинградского ветеринарного института под руководством профессора П.А.Триленко (1977), а также в лаборатории по изучению бруцеллеза ИЭВСиДВ с участием сотрудников ЛенВИ, ВЕНКИ и ИЭВСиДВ (1979-81). Вакцину вводили подкожно в область внутренней поверхности бедра в дозе 60 млрд. м.т. в объеме 2 см3.
Вакцину из штамма Br.melitensis "Невский-12" применяли также, как и из штамма К-24 в жидком (нативном) виде, которую готовили в лаборатории по изучению бруцеллеза ИЭВСиДВ (1977-1979). Вакцину вводили подкожно за локтевым бугром с правой стороны-в дозе 30 млрд.м.к. в объеме 2 см3.
С целью изучения реактогенных свойств указанных вакцин было привито 420 баранов в возрасте 10-11 месяцев, по 140 голов каждой вакциной и 164 головы оставлены в контроле. Исследование проводили через 30-90-120 и 210 дней с использованием серологических тестов (РА, РСК) с бруцеллезными, РДСК с овисными антигенами и клинических методов исследования. Схемы опытов подробно излагаются в соответствующих разделах диссертации.
Для экспериментального заражения использовали вирулентные культуры штаммов Br.melitensis 6,81-79, 21-80, которые предварительно проверяли по основным биологическим свойствам: культуральные, морфологические, тинкториальные, антигенные (РА на стекле с s и R - сыворотками ВІНКИ - ИЭВСиДВ), проба с трипафлавином, термоагглютинация, окраска колоний по Уайт-Вилсону. В необходимых случаях на баранах определялась МИД. Все показатели вирулентных штаммов соответствовали референтному штамму Br.ovis 63/290.
Бактериологические исследования проводили по общепринятой методике. От каждого подопытного животного посевы делали из 18-22 объектов (семенников и их придатков, предстальной железы, печени, селезенки, подчелюстных, заглоточных, предлопа-точных, паховы, гипогастральных, пароартальных и тазовых лимфоузлов) на две пробирки плотного печеночно-глюкозо-глщери-нового агара (ПЕСЕТА) и одну - мясопептонно-печеночно-полужид-кий агар. В питательные среды добавляли 10-15 % стерильной сыворотки овец или аминопептида.
Дяя приготовления плотного печеночно-глюкозо-глицериново-го агара (ШЕЕТА) брали печеночный отвар и водопроводную воду в равных объемах, добавляли 0,5 % хлористого натрия, I % пептона, 1,5-2 % агара. После чего из расчета на I литр среды добавляли 15 мл 10 % двууглекислой соды. Полученную смесь варили паром при 0,5 атмосферы в течение 20-25 минут. После фильтрования (в горячем виде) через ватный фильтр устанавливали РЬ. - 7,0 - 7,2, добавляли I % - глюкозы и 2 % глицерина, разливали по колбам и пробиркам и снова стерилизовали в течение 20-25 минут при П0С. Колбы и пробирки со средой хранили в прохладном месте. Перед употреблением среду расплавляли, охлаздали до 55С, добавляли 15-20 % стерильной сыворотки барана или аминопептида.
Для приготовления полужидкого агара (ЇЇЖА.) брали по 25 % мясного настоя и печеночного отвара, 50 % водопроводной воды, I % пептона, добавляли 0,5 хлористого натрия и 0,15-0,20 % агара.
Устанавливали Ph 7,0-7,2, разливали по пробиркам и стерилизовали при П5С 20-25 минут. Перед употреблением добавляли в каждую пробирку 10-15 % стерильной сыворотки барана или аминопептид.
Пробирки с посевами парафинировали и выдерживали в термостате при температуре 37-38 в течение 30 дней, просматривая их через каждые 4-5 дней.
Морфологию выделенных культур изучали в мазках, приготовленных из 2-х суточных агаровых культур, окрашенных по Граму и Козловскому.
Состояние диссоциации культур изучали по общепринятым тестам: РА на стекле с s- и R - сыворотками, проба с трипа-флавином (1:500), реакция термоагглютинации, окраска колоний по Уайт-Вилсону.
.Гистологические исследования патматериала от подопытных баранов проведены в лаборатории по изучению лейкозов Красно- ярской НИВС кандидатом ветеринарных наук Е.А. Овчинниковой.
Материал от 60 убитых баранов фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и жидкости Корнуа с последующей заливкой парафином. Гистосрезы окрашивали гематоксилин-эозином и Суданом -3. Полевые опыты по изучению эффективности иммунизации против ИЭ, привитых вакциной ИЗ штамма Br.melitensis Рев-1, проводили в 46 хозяйствах, семи районах Хакасской автономной области,неблагополучных по ИЭ,на 7200 баранах.
К изучению эпизоотической ситуации по ИЭБ в хозяйствах Красноярского края мы приступили в 1975 г. До этого времени подобных данных не имелось. С 1972 г. хозяйства края свободны от бруцеллеза овец.
Характеристика свойств возбудителя
Для изучения свойств возбудителя ИЭБ нами были взяты культуры, выделенные в 1975-79 гг. от больных баранов в Курском, Минусинском, Краснотуранском, Курагинском, Усть-Абакан-ском, Аскизском районах и полученные из Хакасской областной, Ужурской, Краснотуранской ветеринарных лабораторий, а также культуры 21-80, 713, 82-79, полученные из бруцеллезной лаборатории ИЭВСиДВ для использования в опытах для заражения баранов.
Для первичного выделения культур Br.ovis и дальнейшего культивирования мы использовали питательные среды ШПТА и ПЖА, изготовленные по прописи П.А. Триленко (1968).
Для бактериального исследования отбирали измененные семенники с придатками, предстательную железу, при забае положительно реагирующих баранов брали печень, селезенку, лимфатические узлы: подчелюстные, заглоточные, предлопаточные,паховые, гипогастральные, тазовые. От овцематок отбирали матку, абортированные плоды. Всего бактериологически исследовали патматериал от НО баранов, II овцематок и 6 плодов.
Посевы производили одновременно с добавлением сыворотки барана на ШИТА на 3-4 пробирки и ІША на 2 пробирки. Засеянные из каждого объекта 2-3 пробирки заливали парафином, а по одной пробирке (ППГГА и ПЖА.) оставляли не залитой. Ставили все пробирки в термостат при температуре 37-38С, выдерживали в течение 30 дней, проверяя рост каждые 4-5 дней.
При росте на скошенной поверхности плотной среды (ШШГА+ 20$ овечьей сыворотки) отмечали мелкие и средние 1-2 мм в диаметре, выпуклые округлой формы прозрачные с янтарным оттенком в проходящем свете, в отраженном свете серовато-желтые колонии, легко смывающиеся с агара. На полужидком агаре в первые 10-15 суток рост Br.ovis чистой культуры отмечался в верхней части столбика среды в виде помутнения без резких границ с образованием кольца с неровными нижними краями шириной 1-1,5 мл. В дальнейшем рост отмечался в виде отдельных полосок по всему столбику среды. Всего было выделено 36 культур Br.ovis из объектов животных, указанных в таблице 2.2.2.1. Как видно из приведенных данных, рост культур в основном отмечался из материала баранов, положительно реагирующих в РДСК в сочетании с клиническими проявлениями болезни. От животных, имещих только клинические признаки возбудителя ЙЭБ выделить ни в одном случае не удалось. Выделены культуры преимущественно из придатков семенника. Культуры, типичные для Br.ovis, получили при выращивании под парафином на 5-7 день в 18,3 % тучввъ, на 8-12 день - в 41,6$ и на 13 и более дней - 41,2$ (табл.2.2.2.2). Морфологически они представляли собой мелкие, овальные коккобактерии, по величине не отличающие от бруцелл других видов.Некоторые микробные клетки были увеличены, встречались и парные формы. Более обстоятельно биологические свойства были изучены у 19 культур Br.ovis, выделенных от баранов.
Клетки всех изучаемых нами культур Br.ovis были грамот-рицательные, неподвижные, спор и капсул не имели. Культуры находились в R - форме, давали положительную реакцию термо-агглютинации и положительную пробу с трипафлавином (1:500). Культуры Br.ovis не агглютинировались бруцеллезной s -сывороткой и не вызывали образование s-агглютининов в организме подопытных животных (кроликов), давали агглютинацию с позитивной овисной сывороткой",.
Изучаемые культуры Br.ovis росли на обогащенных сывороткой плотных средах в присутствии тионина в концентрации 1:50 и 1:100 тыс., а культуры 479, 08-94, 2477, 26-77, 21-01 проявляли слабый рост на средах в присутствии тионина в концентрации 1:25 тыс. и основного фуксина - 1:50 и 1:100 тыс.
Результаты исследования биологических свойств культур Br.ovis показали, что для их роста требовалось повышенное содержание С0р.
У первично полученных культур антигенную характеристику определяли путем заражения кроликов. Из полученных двух-трехсуточных культур, сходных по морфологии с Br.ovis, готовили суспензию на изотоническом растворе хлорида натрия, содержащую 5-6 млрд микробных клеток в I мл раствора, суспензию каждой культуры вводили внутривенно двум кроликам в дозе 2 мл.
Похожие диссертации на Противоэпизоотическая эффективность разных средств и методов специфической диагностики и профилактики инфекционного эпидидимита баранов
