Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Фокин Александр Александрович

Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей
<
Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей
>

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Фокин Александр Александрович. Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей : Дис. ... канд. вет. наук : 03.00.07, 16.00.03 Казань, 2005 203 с. РГБ ОД, 61:05-16/215

Содержание к диссертации

Введение

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12

2.1. Этиологическая структура и эпизоотологические особенности проявления инфекционных болезней поросят-отъемышей в свиноводческих комплексах 12

2.2. Гемофилезный полисерозит 19

2.3. Отечная болезнь поросят-отъемышей 28

2.4. Эшерихиоз поросят 35

2.5. Роль ассоциации возбудителей гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза в формировании заболевании поросят-отъемышей смешанной этиологии 42

2.6. Современное состояние и перспективы иммунной профилактики инфекционных болезней поросят поел еотьем ного возраста в свиноводческих комплексах 47

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 54

3.1. Материалы и методы 54

3.1.1. Оборудования и используемые материалы 54

3.1.2. Технология изготовления и контроль ассоциированной вакцины 57

3.1.3. Методы испытания ассоциированной вакцины 62

3.2. Статистическая обработка результатов исследований 69

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 70

4.1. Этиологическая структура и клинико-эпизоотологические аспекты инфекционных болезней поросят послеотъемного возраста в ряде свиноводческих комплексах регионов Среднего

Поволжья и Предуралья 70

4.2. Степень распространения возбудителей гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей 74

4.3. Выделение, изучение биологических свойств и идентификация полученных культур возбудителей 78

4.3.1.Сравнительное изучение полевых культур и штаммов бактерий Haemophilus parasui 78

4.3.2.Отбор производственных гемолитических штаммов возбудителей отечной болезни поросят-отъемышей 81

4.3.3.Отбор перспективных энтеротоксигенных штаммов возбудителей эшерихиоза поросят 85

4.4. Разработка технологии изготовления ассоциированной инактивированнои вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей 90

4.4.1. Получение бактериальной массы производственных вакцинных штаммов 90

4.4.2. Определение иммунизирующей дозы по каждому из составляющих компонентов ассоциированной вакцины 93

4.4.3. Сравнительное изучение антигенной активности моно- и ассоциированной вакцин 95

4.4.4. Изготовление ассоциированной вакцины 97

4.4.5. Определение физических показателей ассоциированной вакцины 99

4.4.6. Определение стерильности ассоциированной вакцины 100

4.4.7. Оценка реактогенности ассоциированной вакцины с использованием лабораторных животных 100

4.4.8. Проверка безвредности ассоциированной вакцины 101

4.4.9. Определение прививной дозы ассоциированной вакцины на поросятах отъемного возраста 102

4.5. Оценка антигенной и иммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных 104

4.5.1. Изучение антигенной активности ассоциированной вакцины на кроликах 104

4.5.2. Показатели уровня клеточного иммунитета кроликов, иммунизированных ассоциированной вакциной 109

4.6. Изучение антигенной активности ассоциированной вакцины на поросятах-отъемышах 113

4.7. Оценка эффективности ассоциированной вакцины в экспериментальных условиях 118

4.8. Изучение эффективности применения ассоциированной вакцины в производственных условиях 124

4.9. Экономическая эффективность профилактического действия ассоциированной вакцины 131

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ 134

6. ВЫВОДЫ 146

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 149

Введение к работе

Актуальность темы. Обеспечение благополучия свиноводства в отношении инфекционных болезней является одной из наиболее ответственных задач ветеринарной службы страны. Инфекционные заболевания свиней сдерживают развитие свиноводства и наносят отрасли значительный экономический ущерб, который складывается из потерь нарождающего молодняка, снижения привесов, значительных затрат на лечебные и профилактические мероприятия. Наиболее часто у поросят различных возрастных групп наблюдаются желудочно-кишечные и респираторные заболевания, причина которых обусловлена снижением иммунитета в этот период их жизни и воздействием неблагоприятных факторов (Серегин И. с соавт., 1982; Коромыслов Г. Ф. с соавт., 1988; Волков Г. К. с соавт., 1997; Субботин В. В. с соавт., 2001; Молоканов Д. П. с соавт., 2002; Гаффаров X. 3. с соавт., 2003; Школьников Е. Э. с соавт., 2003).

Наиболее остро стоит проблема сохранения поросят послеотъемного возраста, особенно в условиях крупных свиноводческих комплексов промышленного типа (Цымбол Г. Л. с соавт., 1986; Павлов Е. Г., 1989; Карева Э. П. с соавт., 2002; Спиридонов Г. Н. С соавт., 2002). У поросят-отъемышей, одним из основных предрасполагающих факторов является отъем от матерей в раннем возрасте, у которых к этому времени снижается напряженность колострального иммунитета (Шесточенко М. А. с соавт., 1983; Сидоров М. А., 1987; Орлянкин Б. Г. с соавт., 2001; Тельнов С. Н., 2002).

На сегодняшний день установлено важное значение в этиологии инфекционных заболеваний поросят-отъемышей вируса трансмиссивного гастроэнтерита, возбудителей гемофилезного полисерозита, гемофилезной плевропневмонии, пастереллеза, сальмонеллеза, стрептококкоза, а также 3-гемолитических и энтеротоксигенных серотипов Е. соН, способных потенциально обуславливать отечную болезнь и эшерихиоз. Следует отметить, что за последние 5 лет средняя летальность поросят этого периода жизни в России составляет более 28,5% (Прунтова О. В. с соавт., 1995; Карева Э. П. с соавт., 2002; Рахманов А. М. с соавт., 2002; Спиридонов Г. Н. с соавт., 2002; Тельнов С. Н., 2002; Шахов А. Г., 2002; Школьников Е. Э. с соавт., 2003; Коломыцев А. А. с соавт., 2005). Очень часто в промышленном свиноводстве эти болезни протекают в виде смешанной инфекции, что в значительной мере затрудняет их диагностику, специфическую профилактику, осложняет течение болезни и чаще всего инфекционный процесс завершается летальным исходом (Гараев И. М., 1996; Ковалев М. М., 2002; Терехов В. И., 2002; Гаффаров X. 3., Романов Е. А., 2004).В этой связи вакцинация поросят-отъемышей является самой важной профилактической мерой, поскольку она способствует образованию активного иммунитета на фоне исчезновения пассивного (Сидоров М. А., 1987; Орлянкин Б. Г. с соавт., 2001).

Следует отметить, что в настоящее время вопрос о специфической профилактики инфекционных заболеваний поросят-отъемышей смешанной этиологии имеет первостепенное значение для свиноводства, требует глубокого изучения и изыскания новых, более эффективных поливалентных биологических препаратов (Михайлюк А. П. с соавт., 1982; Коромыслов Г. Ф. с соавт., 1988; Равилов А. 3., 1996; Русалев В. С. с соавт., 2001).

Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлось осуществление клинико-эпизоотологического мониторинга инфекционных заболеваний поросят в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, определение этиологической структуры их и на основе этого разработка средства и метода их специфической профилактики.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

-изучить клинико-эпизоотологические особенности проявления наиболее часто регистрируемых инфекционных заболеваний поросят в ряде свиноводческих комплексов регионов Среднего Поволжья и Предуралья;

-выделить возбудителей этих заболеваний и отобрать наиболее перспективные штаммы бактерий, отличающиеся высокой иммуногенной активностью и пригодные для изготовления вакцины;

-установить оптимальное соотношение инактивированных бактериальных клеток каждого штамма в составе вакцины;

-определить оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированной вакцины, исключающую ее реактогенность;

-изучить влияние некоторых адъювантов на иммуногенную активность ассоциированной вакцины;

-изучить эффективность применения ассоциированной вакцины в лабораторных и производственных условиях;

-подготовить нормативно-техническую документацию,

регламентирующую изготовление, контроль и применение ассоциированной вакцины.

Научная новизна. Впервые на основе результатов клинико-эпизоотологичского мониторинга инфекционных заболеваний поросят в ряде свиноводческих комплексов регионов Среднего Поволжья и Предуралья показаны преимущественное распространение и циркуляция среди поголовья свиней возбудителя гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза, проявляющиеся чаще всего в ассоциации.

Получены и изучены биологические свойства штаммов бактерий Н. parasuis, Р-гемолитических и энтеротоксигенных серогрупп Е. coli, обладающие выраженными антигенными свойствами и признаны пригодными для изготовления ассоциированной вакцины.

На лабораторных и естественно восприимчивых животных установлены оптимальные концентрации и соотношение инактивированных антигенов бактериальных клеток каждого штамма в вакцинном препарате, определена зависимость между прививными дозами, титрами антител и защитным эффектом биопрепарата.

Получены экспериментальные данные указывающие на высокую антигенную и иммуногенную активность ассоциированной вакцины.

Подтверждена иммуногенная активность ассоциированной вакцины при испытании в лабораторно-производственных условиях.

Практическая значимость. На основе проведенных исследований нами предложена для внедрения в ветеринарную практику «Ассоциированная вакцина против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированная гидроокисьалюминиевая».

Разработаны нормативно-технические документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данного биопрепарата, в частности:

-«Временная инструкция по изготовлению и контролю ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой» (утверждена директором ВНИВИ 19.07.04 г);

-«Технические условия на ассоциированную вакцину против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированную гидроокисьалюминиевую» (утверждены директором ВНИВИ 30.06.04 г, согласованы с ГУВ КМ Республики Татарстан 5.07.04 г);

-«Временное наставление по применению ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей, инактивированной гидроокисьалюминиевой (в порядке производственного опыта)» (согласовано с директором ВНИВИ 23.01.04 г, утверждено ГУВ КМ Республики Татарстан 26.01.04 г).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

Международной научно-практической конференции (Воронеж, 2002);

Международной научно-производственной конференции, посвященной 130-летию КГАВМ (Казань, 2003);

Международной научной конференции молодых ученых (Владимир, 2004);

Всероссийской научно-практической конференции (Казань, 2004). Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, кроме того, одна работа находится в печати.

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые для защиты:

-этиологическая структура инфекционных заболеваний поросят послеотъемного возраста в регионах Среднего Поволжья и Предуралья;

-биологические свойства выделенных возбудителей инфекционных болезней поросят, полученных от биоматериала больных животных и критерии отбора штаммов микроорганизмов, пригодных для изготовления ассоциированной вакцины;

-лабораторный регламент технологии изготовления

ассоциированной вакцины;

-установление иммуногенной активности ассоциированной вакцины на лабораторных животных и поросятах-отъемышах;

-показатели профилактической эффективности ассоциированной вакцины в лабораторных и производственных условиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список использованной литературы, состоящий из 281 источников, в том числе 54 иностранных. Диссертация иллюстрирована 24 таблицами и 5 рисунками.

Прилагаются разработанные нормативно-технические и другие документы, подтверждающие результаты исследований и их научно-практическую ценность.

Этиологическая структура и эпизоотологические особенности проявления инфекционных болезней поросят-отъемышей в свиноводческих комплексах

В инфекционной патологии сельскохозяйственных животных наибольшая заболеваемость отмечается в свиноводстве - более 50%, обусловленная в свою очередь сальмонеллами - 45,96%, эшерихиями -44,41%, пастереллами - 4,85% и другими патогенными микроорганизмами (Раевский А. А. с соавт., 2000; Малахов Ю. А. с соавт., 2001).

В настоящее время на свинокомплексах страны широкое распространение получили массовые заболевания респираторной системы и желудочно-кишечного тракта поросят-отъемышей, которые во многом препятствуют успешному воспроизводству поголовья свиней и наносят значительный экономический ущерб. Имеющиеся в литературе данные последних лет и накопленные нами знания свидетельствуют о том, что основная роль в патологии этого периода жизни поросят принадлежит сальмонеллам, пастереллам, вирусу трансмиссивного гастроэнтерита, гемофкльным бактериям (гемофилезный полисерозит, гемофилезная плевропневмония), гемолитическим и энтеротоксигенным Е. coli (отечная болезнь, эшерихиоз поросят), спирохетам (дизентерия), стрептококкам и пневмококкам (Цымбол Г. Л. с соавт., 1986; Шапошникова Е. К., 1991; Бушуева Н. Б. с соавт., 2000; Зверьков Д. А., 2000; Рахманов А. М. с соавт., 2002; Тельнов С. Н., 2002).

По данным официальных отчетов ветеринарных служб субъектов Российской Федерации за последние пять лет на долю инфекционных болезней поросят приходится 72,5% неблагополучных пунктов, 88,7% заболевших и 85,1% павших животных. Заслуживает внимание тот факт, что средняя летальность при инфекционных болезнях свиней, по данным за последние пять лет, была равна примерно 28,5%. В тоже время процент по большинству болезней поросят значительно выше. Так при гемофилезном полисерозите он составил 76,4%, при ТГС - 59,9%, при пастереллезе — 32,7%, при сальмонеллезе - 31,7%, при эшерихиозе - 29,9% и только при дизентерии - 9,1% (Рахманов А. М., Яременко Н. А., 2002).

Респираторные заболевания являются одной из наиболее распространенных проблем в свиноводческих хозяйствах РФ. Они поражают главным образом поросят группы отъема. Заболеваемость может достигать 80%, больные поросята часто подвергаются вынужденному убою. Проведенные диагностические исследования позволили установить, что практически во всех обследованных свиноводческих хозяйствах страны респираторные заболевания поросят-отъемышей имеют форму смешанной инфекции. Как правило, в каждом хозяйстве в легких больных поросят обнаруживаются от одного до пяти видов патогенных бактерий (Щербаков А. В. с соавт., 2003).

Инфекционными агентами бактериальной природы, выявляемыми при респираторных заболеваниях поросят, были, в основном, пастереллы, гемофилы, сальмонеллы, стрептококки, стафилококки, хламидии и микоплазмы (Шахов А. Г., 2002). Этиологическая структура респираторных болезней свиней в хозяйствах России во многом соответствует таковой в других странах, где наиболее часто выделяли два вида микоплазм и три вида бактерий семейства Pasteurellaceae. Mycoplasma hyopneumoniae и Mycoplasma hyorhinis были обнаружены, соответственно, в 44,6% и 54,2% случаев, а Pasteurella multocida, Actinobacillus pleuropneumoniae и Haemophilus parasuis выявлялись с приблизительно равной частотой — в 60-65% случаев (Nielsen J. М. et ah, 1989; Turk J. et al., 1989).

В крупных свиноводческих хозяйствах промышленного типа гемофилезный полисерозит поражает от 20 до 50% восприимчивого поголовья, а смертность достигает 10-50% от числа заболевших животных (Игнатьев С, В., 1994). Заболевают в основном поросята через 8-15 дней после отъема (Сидоров М. А. с соавт., 1987). При патологоанатомическом исследовании трупов поросят, чаще обнаруживается крупозная или катаральная пневмония у павших — 69,5% и вынужденно убитых животных — 64,1. Диагностируются фибринозные плевриты, в том числе слипчивые - 52,9 и 36,7% соответственно; эпикардиты - 17,1 и 16,6%; перикардиты - 47,7 и 41,1%; фибринозные перитониты, в том числе слипчивые - 53,4 и 36,6%; фибринозные перигепатиты - 53,1 и 35,3%; перисплениты - 26,8 и 17,8%; нефриты — 13,3 и 9,1%; артриты - 10,6 и 4,1%; негнойные менингоэнцефалиты - 7,7 и 3,4% соответственно (Андрышин Ю. Т. с соавт., 1979; Прусак-Глотов В. Э., 1992).. В неблагополучных по этому заболеванию хозяйствах носителями возбудителя являются приблизительно 40%, а в благополучных — 20% клинически здоровых животных (Тарасенок Н. И., 1982).

Гемофилезная плевропневмония свиней, как было выше описано, наносит свиноводческим хозяйствам большой экономический ущерб, но величина ущерба зависит главным образом от времени года, численности инфицированных стад и условий содержания животных. Болезнь чаще регистрируют среди поросят двух-шести месячного возраста. Заболеваемость колеблется от 25 до 80%, смертность животных может достигать до 100% (Лаврентьев Н. И., 1986; Сидоров М. А. с соавт., 1978). Болезнь носит стационарный характер, и избавится от нее крупному свиноводческому хозяйству сложно, практически не возможно (Рубинский И. А., 1995).

Технология изготовления и контроль ассоциированной вакцины

Культивирование возбудителя гемофилезного полисерозита (штаммы «ДВ-30» и «ДВ-28») проводили в полужидкой среде. Среду разливали в матровые колбы с таким расчетом, чтобы толщина слоя питательной среды при горизонтальном расположении сосуда на превышала 1,5-2 см. Матровые колбы со средой выдерживали 18-24 часа при температуре 37С — контроль стерильности.

Маточные капсульные культуры штаммов Н. parasuis хранили в лиофилизированном виде (наполнитель — обезжиренное молоко коровы). Для изготовления расплодки вакцинные штаммы засевали отдельно на шоколадный агар, культивировали при 37С в течение 24 часов. Культуру смывали 0,85%-ным стерильным раствором хлорида натрия, «чистоту» их проверяли микроскопией мазков, устанавливали концентрацию 50 млн микробных клеток (м. к.) в 1 см по бактерийному или оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича и засевали каждый штамм в полужидкою среду с ростовыми факторами, описанную выше. На каждые 100 см полужидкой среды вносили по 2 см расплодки, среду тщательно перемешивали, матровые колбы нумеровали, укладывали в горизонтальном положении и инкубировали 20-24 часа при температуре 37С.

После проверки однородности популяции бактерий штаммов Haemophilus parasuis, выращенных в колбах микроскопией мазков, окрашенных по Грамму, собирали бактериальную массу каждого штамма и определяли их концентрацию. Для этого из бактериальной суспензии готовили 10-кратные разведения от 10" до 10" в объеме 0,5 см , после чего последние два разведения культуры в объеме 0,1 см3 рассевали на шоколадный агар по две чашки Петри на разведение и инкубировали при 37 С в течение 24 часов. Далее проводили подсчет выросших колоний и расчитывали концентрацию бактериальной суспензии по методу Коха (Герхардт Ф., 1983). Для приготовления вакцины использовали бактериальную массу концентрацией 2 х 109 м. к. в 1 см3.

Инактивацию бактериальной взвеси проводили формалином. Для этого на 100 см3 суспензии добавляли 0,3 см3 40%-ого формалина, закрывали резиновыми пробкамИі перемешивали и оставляли в термостате при 37 С на 20-24 часа. Контроль полноты инактивации осуществляли путем посева инактивированных бактериальных взвесей на шоколадный и сывороточно-дрожжевоЙ мясо-пептонный агар (Сидоров М. А. с соавт., 1980).

Для получения бактериальной массы (ї-гемолитических штаммов Е. coll (сероварианты 0111 и 0149) и энтеротокси ген ного штамма Е. coli (серовариант 0119), синтезирующего адгезивный антиген 987Р использовали мясо-пептонный агар (МПА). Для энтеротоксигенного штамма Е. сої і (серовариант 020), синтезирующего адгезивный антиген К99 — среду Минка. Указанные штаммы выращивали в отдельности на соответствующих питательных средах при температуре 37С. Через 24 часа выросшие колонии энтеротоксигенных штаммов Е. coli и р-гемолитического штамма, синтезирующего адгезивный антиген К88 исследовали в РА на стекле со специфическими агглютинирующими колисыворотками для уточнения факторов адгезии.

Маточные культуры (З-гемолитических штаммов Е. coli и энтеротоксигенных штаммов Е. coli хранили на полужидком мясо-пептонном агаре под вазелиновым маслом при температуре 4-6С. Для получения биомассы культур Е. сої і, указанные среды разливали в матровые колбы по 200 см и стерилизовали при 0,5 атмосфер - 110 С в течение 30 минут. После застывания сред делали посевы указанных культур по 1 см3 1 млрд. суспензии и выдерживали в термостате при 37С. Через 24 часа выросшие колонии культур Е. coli смывали 0,85%-ным стерильным раствором хлорида натрия и готовили суспензии в концентрации 10 млрд. м. к. в 1 см по бактерийному или оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича. Каждую культуру проверяли на чистоту, морфологическую и серологическую типичность.

Инактивацию бактериальной взвеси, имеющую концентрацию 10 млрд. м. к. в 1 см осуществляли формалином. Для этого в микробную взвесь добавляли формалин с содержанием 40%-ого активного формальдегида, из расчета 0,5 см3 на 100 см3 суспензии. После перемешивания суспензию ставили в термостат на трое суток при 37С, Затем брали пробу для контроля на полноту инактивации, которую проводили путем посева инактивированных микробных взвесей на соответствующие питательные среды.

Анатоксин [3-гемолитических штаммов Е. coli и энтеротоксигенных штаммов Е. coli получали путем посева суточных бульонных культур на среду Хоттингера. Для этого штаммы по отдельности засевали в двухлитровые колбы со средой Хоттингера (рН 7,8) и выращивали 5-7 суток при температуре 37С. После чего, к штаммам Е. coli добавляли 40%-ный формалин из расчета 0,5 см на 100 см суспензии, перемешивали и выдерживали в термостате при 37С 10-12 суток. Полученный анатоксин осаждали 10%-ным стерильным раствором алюмокалиевых квасцов из расчета до 1% на весь объем. После осаждения анатоксина в течение 2-3 суток отбирали надосадочную жидкость и 0,85%-ным стерильным раствором хлорида натрия готовили суспензии в концентрации 10 млрд. м. к. в 1 см по бактерийному или оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича.

Степень распространения возбудителей гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей

Клинико-эпизоотологические данные и лабораторные исследования патологического материала 22-х свиноводческих комплексов, расположенных в регионах Среднего Поволжья и Предуралья, позволили установить, что в 17 из них регистрировали заболевания поросят послеотъемного периода, вызываемые возбудителями гемофнлезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиозной диареи. Более детальное изучение указанных форм патологий позволило раскрыть особенности возникновения, развития и проявления инфекционного процесса, а также степень их распространения. С этой целью бактериологическому исследованию подвергались 332 пробы клинического и патологоанатомического материала, взятые от больных, павших и вынужденно убитых поросят. Объектами исследований служили паренхиматозные органы, экссудат перитонеальной, плевральной, перикард иальной полостей, пораженные серозные оболочки, отрезок тонкого отдела кишечника, брыжеечные лимфоузлы павших животных, пробы фекалий, носовые истечения и сыворотки крови больных поросят 8-12 недельного возраста. Выделяемость возбудителей отечной болезни и эшерихиоза поросят была выше в острый период заболевания. При этом каждое исследование сопровождалось выделением одного или нескольких культур В-гемолитических и энтеротоксигенных Е. coli. В силу особенностей иммунобиологических свойств Н. parasuis процент обнаружения и выделения этого агента был значительно ниже. В результате бактериологических исследований были получены 119 культур микроорганизмов, из них 84 идентифицированы как Е. coli, среди которых 56 6-гемолитических и 7 — как бактерии Н. parasuis. От 22-х павших поросят выделены энтеротоксигенные серотипы Е. coli, от 34-х - В-гемолитические серотипы Е. coli и от 12-и культуры бактерий Н. parasuis. Так, в 12 хозяйствах был выявлен возбудитель отечной болезни, в 14 - эшерихиозной диареи поросят, в 7 - гемофилезного полисерозита. Причем в 9 хозяйствах были выделены одновременно В гемолитические и энтеротоксигенные серотипы Е. coli: в свинокомплексе «Пугачевский» Бугульминского района, в свинокомплексе «Сосновоборский» Тукаевского района, в совхозе «Шинник» Нижнекамского района, в ООО «Нефтехимагропром» Нижнекамского района, в ООО «Новая жизнь» Кукморского района, в КП «Авангард» Арского района, в учебном хозяйстве КГАВМ Высокогорского района РТ, в свинокомплексе «Рощинский» Стерлитамакского района РБ, в колхозе им. К. Маркса Звениговского района РМ. В 2-х хозяйствах наряду с энтеротоксигенными Е. coli были изолированы культуры бактерий Н. parasuis: в ООО «Газовик» Пестречинского района РТ, в совхозе «Агидель» Ишимбаевского района РБ. Смешанные формы заболеваний поросят-отъемы шей, обусловленные В-гемолитическими, энтеротоксигенными Е. coli и культурами бактерий Н. parasuis, были установлены в 5 хозяйствах: в свинокомплексе «Пугачевский» Бугульминского района, в ООО «Нефтехимагропром» Нижнекамского района, в КП «Авангард» Арского района РТ, в свинокомплексе «Рощинский» Стерлитамакского района РБ, в колхозе им. К. Маркса Звениговского района РМ.

Похожие диссертации на Разработка технологии изготовления и оценка эффективности ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, отечной болезни и эшерихиоза поросят-отъемышей