Введение к работе
Актуальность темы исследования
Вирусные гепатиты, и энтеральный гепатит А (ГА) в частности, остаются одной из серьезных проблем здравоохранения. Российская Федерация считается территорией, неблагополучной в отношении ГА. Интенсивная циркуляция вируса сочетается с достаточно крупной прослойкой восприимчивого населения. Периодические спады уровня заболеваемости ГА на отдельных территориях, по всей видимости, лишь отражают волнообразный характер эпидемического процесса, и нередко сменяются крупными вспышками или подъемом заболеваемости. Дополнительным фактором, отягощающим эпидемическую обстановку по ГА, является нарастание в стране числа чрезвычайных ситуаций как природного, так и техногенного характера.
В конце XX и начале XXI века проблеме гепатита А уделялось меньше внимания, чем другим вирусным гепатитам. Во многом это было связано с многолетним снижением заболеваемости ГА, которое отмечалось с середины 90-х годов двадцатого столетия. К сожалению, наблюдаемое снижение заболеваемости не привело к сопоставимому уменьшению значимости ГА для практического здравоохранения. В последние годы стал отмечаться сдвиг уровня заболеваемости ГА в старшие возрастные группы, сопровождающийся повышением вероятности развития тяжелых форм ГА. Смещение заболеваемости ГА на старшие возрастные группы объясняется сокращением в них доли лиц с наличием антител к вирусу ГА (ВГА) в крови и увеличением числа лиц, восприимчивых к этому вирусу [С.Н. Соринсон, 1998 г., М.С. Балаян, 1999 г., Т.Н. Быстрова, 2004 г.]. Явное смещение пика заболеваемости ГА в последние годы от детей 3-6 и 7-10 лет к более взрослым категориям населения (прежде всего, в возрастных группах 15-19 и 20-29 лет) привело к тому, что заболевание стало чаще протекать в клинически более выраженных формах и с большей частотой осложнений [М.И. Михайлов, 2002 г.].
Гепатит А передается фекаяьно-оральным механизмом, который реализуется водным, пищевым и контактно-бытовым путями. Анализ информации, полученной с разных территорий Российской Федерации, свидетельствует об участившихся случаях возникновения водных и пищевых вспышек [И.В. Шахгильдян, М.И. Михайлов, О.Н. Ершова, 2006 г.]. Так, очень крупная пищевая вспышка бьша зафиксирована в Тверской
области в 2005 г. (г. Ржев, заболело 669 человек). Наиболее масштабная вспышка, имевшая водный путь передачи инфекции, зафиксирована в Нижнем Новгороде в мае 2005 г., когда заболело около 3000 человек. [М.И. Михайлов, 2002 г.].
Рост заболеваемости гепатитом А вызывает особенную тревогу в связи с тем, что в России имеется около 5 млн. больных хроническим гепатитом Ви 1,5 млн. больных хроническим гепатитом С. У этих лиц инфицирование вирусом ГА активизирует патологический процесс в печени и заметно утяжеляет прогноз.
Высокие показатели заболеваемости среди работоспособного населения, возрастающая частота регистрации затяжных и рецидивирующих форм обусловливают увеличение экономического ущерба, причиняемого ГА-инфекцией. В США, по данным F. Andreetal (2002 г.), эти затраты составляют 480 млн. долларов в год. В России в 2000 году они составили порядка 1,2 миллиарда рублей. Выполненные И.Л. Шаханиной экономические оценки свидетельствуют о существенном вкладе ГА в суммарные потери от инфекционных болезней (32,4 тыс. руб. - экономический ущерб на 1 случай, число заболевших в 1997 г. - 43367, экономическая значимость - 1,4 млрд. рублей).
Высокая заболеваемость гепатитом А и его социальная значимость вынуждают разрабатывать надежные способы защиты от этой инфекции. Основными задачами по профилактике ГА в настоящее время являются проведение активного надзора за данной инфекцией и улучшение санитарно-коммунального благоустройства населенных мест. Другим важным путем решения проблемы является создание достаточно большой иммунной прослойки среди групп риска населения с помощью вакцинопрофилактики. Ограниченная доступность вакцины ГА, в частности, из-за ее высокой стоимости, диктует необходимость тщательного подбора контингентов, подлежащих вакцинации. Отсутствие вакцинации против гепатита А в Российском календаре профилактических прививок и высокая цена препарата не позволяют полностью контролировать эту инфекцию, снизив риск возникновения случаев гепатита А. Поэтому вакцинация не может являться единственно эффективным методом профилактики ГА.
Значительная роль в профилактике гепатита А, наряду с вакцинопрофилактикой, отведена «комплексу санитарно-гигиенических и дезинфекционных мероприятий, целью которых является разрыв механизмов путей передачи инфекции» [ Л.С. Федорова, 2002 г.]. Важное значение имеет своевременное проведение текущей и заключительной дезинфекции, направленной на инактивацию вируса гепатита А. Место дезинфекции в профилактике гепатита А определено в Санитарно-эпидемиологических правилах 3.1.958-
00 «Профилактика вирусных гепатитов» от 01.02.2000 г.
Необходимым компонентом противоэпидемической работы является применение современных методов дезинфекции. Одной из наиболее важных и актуальных задач дезинфектологии являются поиск и создание новых высокоактивных дезинфекционных субстанций, разработка на их основе высокоэффективных дезинфицирующих препаратов, а также научное сопровождение их производства и применения. Для доказательства вирулицидной активности дезинфицирующих средств (ДС) они должны подвергаться вирусологическому исследованию с измерением остаточной ипфекционности вируса в обработанных объектах [М.Г. Шандала, 1998г.]. Общепринятым подходом к оценке активности дезинфектантов является использование «вирусов-моделей», которые в соответствии с современным уровнем знаний считаются репрезентативными для возможно большего спектра патогенных для человека видов вирусов, резистентных к физическим и химическим факторам [М.Г. Шандала, 1998 г.]. В соответствии с Европейским стандартом EN 14476 для оценки вирулицидной активности ДС обязательным является испытание на модели полиовируса 1-го типа (вакцинный штамм Sabin LSc-2ab). Полиовирус и ВГА являются РНК-содержащими вирусами и относятся к семейству Picornaviridae. Было принято считать, что полиовирус является адекватной моделью для таких исследований, так как он высокорезистентеп к действию многих дезинфектантов и близок по основпым физико-химическим свойствам к ВГА [P. Gowland, S. Fontana, С. Niedechause, В.М. Taleghani, 2004 г.]. В связи с имеющимися сведениями о том, что по устойчивости к физическим и химическим факторам ВГА превосходит полиовирус возникла необходимость проведения сравнительных исследований по оценке вирулицидной активности ДС в отношении ВГА, в частности, новой в этом отношении группы ДС па основе четвертичных аммониевых соединений (ЧАС). Интерес к этой группе средств обусловлен наличием у них не только высокой вирулицидной, но и широкого спектра антимикробной активности, в частности спороцидной, а также их невысокой токсичности и химической агрессивности. Кроме того, эти ДС не обладают летучестью, они не опасны при ингаляционном воздействии и могут применяться в присутствии пациентов.
Изучение вирулицидной активности ДС в отношении ВГА и полиовируса было проведено согласно «Методическим рекомендациям по определению вирулицидной активности препаратов» № 1119-73, утвержденным МЗ СССР (06.09.1973 г.) и «Методам испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности», утвержденным МЗРФ(1998г.)
Цель работы
Целью работы является разработка комплексного подхода к изучению и оценке вирулицидной активности современных ДС на основе ЧАС в отношении вируса гепатита А. Исходя из поставленной цели были определены следующие задачи:
1. Изучение влияния ДС на антигенную активность нативпого ВГА из фекалий больных
ГА людей, и культуральиого ВГА, адаптированного к культуре клеток почки зеленой
мартышки (линия 4647).
2. Изучение модельных систем для исследования шгфекциоЕтой активности ДС в
отношении ВГА:
2.1.Изучение влияния ДС прямым методом па инфекционную активпость культуральиого
ВГА в исследованиях in vitro в культуре клеток, адаптированной к ВГА.
2.2.Изучение влияния ДС прямым методом на инфекциошгую активность нативпого ВГА,
выделенного от больного ГА, в исследованиях in vivo с чувствительными лабораторными
животными (обезьяны-мармозеты) вида Callithrix jacchus, семейства игрупковых -
Callitrichidae.
3. Сравнительный анализ вирулицидной активности ДС на основе ЧАС с различным
композиционным составом с использованием 2-х вирусов in vitro:
а) ВГА (штамм HAS-15) в перевиваемой культуре клеток почки зеленой мартышки 4647.
б) вирус полиомиелита I типа (вакцинный штамм Sabin LSc-2ab) (полиовирус) в
перевиваемой культуре клеток НЕр - 2 (Cincinnati).
Научная новизна
-
Впервые в России разработан комплексный подход к изучению вирулицидпой активности ДС в отношении ВГА путем определения его антигенной активности в иммунологических реакциях и инфекционной активности в культуре клеток и на чувствительной биологической модели - обезьянах-мармозетах.
-
Получены данные о вирулицидной активности ДС на основе ЧАС отечественного производства при обеззараживания различных объектов, контаминировашгых ВГА.
-
На основании результатов сравнительного изучения вирулицидной активности ДС на основе ЧАС с различным композиционным составом и хлорамина Б показано, что вирус гепатита А более устойчив к действию дезинфицирующих средств, чем полиовирус.
-
Обоснована необходимость включения ВГА (штамм HAS-15) в перечень тест-вирусов с целью определения вирулицидной активности ДС широкого спектра действия.
Практическая значимость
Согласно результатам выполненной работы:
-
Рекомендовано использование вируса гепатита А (штамм HAS-15) в качестве модельного вируса для определения вирулицидной активности ДС.
-
Рекомсндоваїго применеиие в испытательных лабораториях при определении вирулицидной активности ДС в отношении ВГА комплексного подхода с определением антигенной активности ВГА в иммунологических реакциях и инфекционной активности ВГА в культуре клеток. Эти рекомендации включены в «Методические указания по изучению и оценке вирулицидной активности дезинфицирующих средств» МУ 3.5.2431-08.
-
Определен порядок обеззараживания различных эпидемиологически значимых объектов, контаминированпых ВГА, восемью новыми ДС на основе ЧАС. Отработанные режимы включены в инструкции по применению ДС для дезинфекции в лечебно-профилактических учреждениях, инфекционных очагах, на предприятиях общественного питания и коммунально-бытового обслуживания, в учреждениях образования, культуры, отдыха, спорта, социального обеспечения. Средства рекомендованы Роспотребнадзором для производства и применения в практике медицинской дезинфекции.
Внедрение результатов диссертационной работы в практику Результаты проведенных исследований нашли отражение при подготовке следующих нормативно-методических документов:
1. «Методические указания по изучению и оценке вирулицидной активности
дезинфицирующих средств» МУ 3.5.2431-08.
2. Инструкции по применению ДС:
-
Инструкция по применению ДС «Септодор» № 001-2/2005 от 12.07.2005, Гос регистрация: № 77.99.1.2.У.8605.7.05. от 26.07.2005. Производитель: ОАО «Хэппи Дэй», г. Москва, ТУ 9392-001-45004662-2002.
-
Инструкция по применению ДС «Неогеи-Супер» № 042-1/2007 от 12.09.2007. Гос регистрация: № 77.99.1.2.У.3078.4.08 от 18.04.2008. Производитель: ОАО НПО «Новодез», г. Москва, ТУ 9392-042-38965786-2007.
-
Инструкция по применению ДС «Эком» № 017-3/2007 от 07.09.2007. Гос. регистрация: № 77.99.36.2.У.2781.4.08 от 09.04.2008. Производитель: ОАО НПО «Новодез», г. Москва, ТУ 9392-017-38965786-2005.
-
Инструкция по применению ДС «Эком50» № 018-3/2007 от 07.09.2007. Гос. регистрация: № 77.99.1.2.У.2780.4.08 от 09.04.2008. Производитель: ОАО НПО «Новодез», г. Москва, ТУ 9392-018-38965786-2005.
-
Инструкция по применению ДС «Эком-50М» Ks 019-3/2007 от 07.09.2007. Гос. регистрация: № 77.99.36.2.У.2779.4.08 от 09.04.2008. Производитель: ОАО НПО «Новодез», г. Москва, ТУ 9392-019-38965786-2005.
-
Инструкция по применению ДС «Эком-25М» № 020-3/2007 от 07.09.2007. Гос. регистрация: № 77.99.1.2.У.2778.4.08 от 09.04.2008. Производитель: ОАО НПО «Новодез», г. Москва, ТУ 9392-020-38965786-2005.
-
Инструкция по примепешпо ДС «Экопав» № 008-2/2005 от 29.10.2005. Гос. регистрация: № 77.99Д.2.У.12445.10.05 от 27.10.2005. Производитель: ОАО НПО «Новодез», г. Москва, ТУ 9392-008-38965786-2003.
-
Инстркуция по применению ДС «Новодез Форте» № 005-4/2005 от .05.09.2005. Гос. регистрация: № 77.99.19.2.УЛ1536.10.05 от 11.10.2005. Производитель: ОАО НПО «Новодез», г. Москва, ТУ 9392-005-38965786-2002.
3. Результаты работы используются в учебном процессе на кафедре дезинфектологии МПФ ППО ММА им. И.М. Сеченова.
Апробация работы и публикации по теме диссертации
Материалы работы были доложены на VI Всероссийской научно-практической конференции - «Вирусные гепатиты - проблемы эпидемиологии, диапюстики, лечения н профилактики», Москва, 2005 г., XV съезде Национальной организации дезинфекционистов, Москва, 2006 г., VII Российской научно-практической конференции с международным участием - «Вирусные гепатиты - эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика», Москва, 2007 г., Всероссийской научно-практической конференции, Босвященой 75-летию Научно-исследовательского института дезинфектологии Роспотребпадзора - «Актуальные вопросы теории и практики дезинфектологии», Москва, 2008 г.
Публикации По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ. Положения, выносимые на защиту.
1. Использование комплексного подхода к исследованию вирулицидпой активности ДС в отношении ВГА с применением методов ИФА и ПНР. Применение модельных систем для исследования вирулицидной активности ДС в отношении ВГА при определении
антигенной активности ВГЛ в иммунологических реакциях, инфекционной активности ВГА в культуре клеток и на биологической модели - обезьянах-мармозетах.
2. Различия в устойчивости ВГА и полиовируса к ДС с различным композициошшм
составом.
-
Избирательное вирулицидное действие двух ЧАС - алкиддиметилбензиламмоний хлорида (АДБАХ) и алкилдимстил(эгил)бензиламмоний хлорида (АДЭБАХ) в отношении ВГА и полиовируса.
-
Вирулицидное действие новых композиций на основе ЧАС и глутарового альдегида, высокоэффективных в отношении ВГА при низкой концентрации действующего вещества (ДВ). Зависимость вирулицидного действия ДС на основе ЧАС от их композиционного состава в отношении ВГА и полиовируса.
Структура и объем диссертации
