Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Современные методы лечения ожогов кожи 9
1.1. Проблемы и цели научных исследований и методы лечения ожогов кожи 9
1.2. Современные представления об особенностях патогенеза ожоговой травмы 10
1.3. Лечение локальных ожогов с использованием высоко и низкоинтенсивных лазеров 22
Глава II. Материалы и методы исследования 28
2.1. Общая характеристика исследуемых материалов, экспериментальных животных и методов лечения 28
2.2. Общая характеристика исследуемых фотосенсибилизаторов 29
2.3. Экспериментальные исследования. Модели ожоговых ран 32
2.4. Характеристика используемых в работе методов исследования.. 36
Глава III. Ожоговая рана 40
3.1. Изучение in vivo проникающей способности фотосенсибилизаторов в различных лекарственных формах в формирующейся ткани ожоговой раны 40
3.2. Оценка результатов лечения экспериментальных ожоговых ран фотодинамической терапией с сенсибилизаторами в форм водного раствора и геля 46
3.3. Динамика степени микробной обсемененности ожоговых ран в эксперименте 66
Заключение 68
Выводы 81
Практические рекомендации 82
Указатель литературы 83
- Проблемы и цели научных исследований и методы лечения ожогов кожи
- Современные представления об особенностях патогенеза ожоговой травмы
- Общая характеристика исследуемых материалов, экспериментальных животных и методов лечения
- Изучение in vivo проникающей способности фотосенсибилизаторов в различных лекарственных формах в формирующейся ткани ожоговой раны
Введение к работе
Актуальность темы исследования. С древних веков с целью лечения ожоговых ран применяли бесчисленное количество самых разнообразных веществ, которых к настоящему времени насчитывается около трёх тысяч (Герасимова Л.И. и соавт., 1993, 1994, 1996). Древние египтяне использовали для лечения ран мед, масло и вино. Гиппократ для лечения ожогов рекомендовал смесь, состоящую из смолы и разваренных рубцов старых свиней. Абу-Али-ибн-Сина использовал повязки с различными лекарственными растениями. В средние века использовались экзотические рецептуры, включающие в себя жареных червей, волосы повешенного, снятого с виселицы в полнолуние и т.п. Во времена Амбруаза Паре все раны лечили путём прижигания раскалённым железом или заливали кипящим маслом. В XIX веке начали применять в лечении антисептики - «известковую воду», представляющую собой раствор негашеной извести, растворы борной и карболовой кислот. В 40-х годах прошлого века впервые появились мази с сульфаниламидами, а затем - с антисептиками и антибиотиками. Во второй половине XX века стали применять для лечения ожоговых ран многокомпонентные лекарственные формы, которые можно использовать в разные фазы раневого процесса (Толстых М.П., 2002).
Применяемые препараты могли иметь как однонаправленное, так и разностороннее комплексное действие на раневой процесс (Schmidt А., 1981).
Основными задачами местного лечения гнойных и ожоговых ран в первой стадии раневого процесса являются:
подавление раневой инфекции;
восстановление местного гомеостаза;
активация отторжения некротических тканей и адсорбция продуктов микробного и тканевого распада (Souhodolskaya T.N. et al., 2008). Среди них особое место занимает метод фотодинамической терапии
используемый для лечения ран и некоторых форм рака, а в последующие годы - ран различного генеза (Толстых П.И., 2008). Суть этого метода
4 заключается в использовании фотосенсибилизаторов, веществ, способных
генерировать синглентныи кислород, чрезвычайно сильный окислитель
(Странадко Е.Ф., 2009). Некоторые фотосенсибилизаторы, например, ди-N-
метилглюкаминовая соль хлорина еб (коммерческое название:
«Фотодитазин»), обладают способностью накапливаться в злокачественной
ткани. Облучение ткани, в которой аккумулирован фотосенсибилизатор,
светом с определённой длинной волны приводит к запуску каскада
окислительных процессов. Окислительные процессы в итоге приводят к
непосредственному «разрушению» злокачественной ткани. В тоже время,
несмотря на высокую эффективность и патогенетическую обоснованность
фото динамической терапии некоторых злокачественных заболеваний кожи и
других локализаций, а также ран различного генеза, в том числе и
хронических язв (Странадко Е.Ф., 2001; 2008 и др.; Толстых П.И. и соавт.,
2002, 2008), она (фотодинамическая терапия) имеет целый ряд недостатков,
связанных в первую очередь с высокими дозами лекарства, которые
приводят к ряду побочных эффектов и высокой себестоимости лечения
(патент РФ №2314806, 2008). В работах (Solovieva А.В. et al., 2008;
Souhodolskaya T.N. et al., 2008) обнаружено, что некоторые низкотоксичные
амфифильные полимеры значительно увеличивают способность ряда
порфириновых фотосенсибилизаторов, в том числе фотодитазина,
катализировать процессы окисления с участием синглентного кислорода
(патент РФ №2314806, 2008). Такой подход, возможно, может являться
решением обозначенной проблемы, так как позволяет снижать
лекарственную дозу на порядок, сохраняя лечебный эффект на прежнем
уровне (Solovieva А.В. et al., 2008).
В ФГУ «Государственный научный центр лазерной медицины»
Федерального медико-биологического агентства и НИИИ МО РФ
исследовали эффективность такого подхода при лечении огнестрельных ран
на крысах (Шин Ф.Е. и соавт., 2008; Толстых П.И. и соавт., 2009). Оказалось,
что гель, содержащий один из исследованных амфифильных полимеров и
5 фотодитазин (0,1 мг на 1мл геля), вызывает ускорение заживления гнойных
ран в 1,5 раза по сравнению с традиционным лечением антисептиком
хлоргекседином ив 1,2 раза по сравнению с терапией коммерчески
доступным препаратом «Фотодитазин-гель» (1,0мг на 1 мл геля) (Толстых
П.И. и соавт., 2008).
Одновременно также было проведено исследование геля,
содержащего активный амфифильный полимер и фотодитазин (ОД мг на 1
мл геля), при лечении гнойных и хронических ран у группы пациентов,
давших согласие на исследование. Оказалось, что гель, содержащий один из
исследованных амфифильных полимеров и фотодитазин (0,1 мг на 1 мл
геля), вызывает ускорение появлений грануляций и в 3,0 раза быстрее по
сравнению с традиционной терапией антисептиками и в 1,5 раза быстрее по
сравнению с терапией коммерчески доступным гелем «Фотодитазин» (1,0і
мг на 1 мл геля) (Толстых М.П. и соавт., 2008).
В медицине, в частности в онкологии, используются так же
фотосенсибилизаторы - холосенс и фотосенс. Работ по их использованию для
лечения ожоговых ран в доступной литературе и в данных патентной
информации мы не нашли. В связи с этим сформулировали цель
исследования: улучшить результаты лечения экспериментальных ожоговых
ран кожи путём фотодинамической терапии с использованием холосенса,
фотосенса и фотодитазина, иммобилизованного на наноразмерных
амфифильных полимерах.
Задачи исследования:
Изучить проникновение и распределение в тканях, формирующих ожоговую рану, фотосенсибилизаторов: фотосенса, хлосенса и фотодитазина иммобилизованного методом комплексирования на амфифильных полимерах.
Провести сравнительные исследования отечественных фотосенсибилизаторов: фотосенса, холосенса и фотодитазина, полученного методом комплексирования лекарственного средства на амфифильных полимерах.
Изучить в эксперименте по данным клинических, морфологических, бактериологических и планиметрических методов исследований влияние на течение раневого процесса фотодинамической терапии с различными фотосенсибилизаторами (фотодитазином, иммобилизованным методом комплексирования на амфифильных полимерах, фотосенсом и холосенсом).
На основании проведённых экспериментальных исследований разработать новый эффективный и патогенетически обоснованный метод лечения ожоговых ран кожи у экспериментальных животных.
Научная новизна
Впервые с помощью локальной спектроскопии изучено распределение
флюоресценции фотосенсибилизаторов: фотосенса, холосенса и
фотодитазина, иммобилизованного методом комплексирования
лекарственного средства на наноразмерных амфифильных полимерах, в тканях, формирующих ожоговую рану. Впервые было установлено, что диффузия в глубину ожогового струпа при обеих лекарственных формах фотодитазина (раствор, гель), достаточная; в случае применения холосенса интенсивность флюоресценции с наружной стороны ожогового струпа в 25 раз выше, чем с внутренней стороны, что указывает на низкую диффузию холосенса в ожоговый струп.
Впервые в эксперименте, на основании клинических, морфологических, бактериологических и планиметрических исследований дана сравнительная оценка влияния фотодитазина, иммобилизованного методом комплексирования лекарственных средств на амфифильных полимерах, фотосенса и холосенса на течение раневого процесса экспериментальных ожоговых ран кожи и при этом установлено, что при использовании лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином сокращаются сроки отторжения вторичного струпа в 2,6 раза по сравнению с традиционным лечением в контрольной группе животных и на 6 суток при проведении фотодинамической терапии с фотодитазином и холосенсом в других лекарственных формах. Сроки заживления ожоговых ран
7 сокращаются на 3,5 - 5,8 суток соответственно.
Впервые по данным клинических, планиметрических и бактериологических исследований доказано, что фотодитазин, иммобилизованный методом комплексирования лекарственных средств на наноразмерных амфифильных полимерах, более эффективен в регуляции воспаления и регенерации в ожоговых ранах экспериментальных животных, (крыс) чем фотосенс и холосенс.
Доказано, что метод лечения ожоговых ран с использованием фотодитазина, иммобилизованного на амфифильных полимерах, прост, эффективен и патогенетически обоснован.
Практическая значимость работы
Разработан новый метод лечения экспериментальных ожоговых ран фотодитазином, иммобилизованным методом комплексирования на амфифильных полимерах. Применение разработанного метода лечения экспериментальных ожоговых ран в эксперименте высокоэффективно и патогенетически обосновано и может быть рекомендован в клиническую практику.
Основные положения, выносимые на защиту
Лазерная фотодинамическая терапия с фотодитазином, иммобилизованным методом комплексирования лекарственных средств на основе амфифильных полимеров, по сравнению с другими формами фотосенсибилизаторов (растворами холосенса и фотодитазина, а также гелем холосенса), способствует нормализации микроциркуляции, активации пролиферации клеточных элементов макрофагального и фибробластического ряда, ангио- и коллагеногенеза и ускорению созревания грануляционной ткани.
Лазерная фотодйнамическая терапия экспериментальных ожоговых ран с фотодитазином, иммобилизованным на амфифильных полимерах, более эффективно снижает бактериальную обсемененность тканей,
8 формирующих рану, чем фотосенсибилизаторы других лекарственных
форм (холосенс и фотодитазин в растворе).
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на объединенной научной конференции ФГУ ГНЦ Лазерной медицины Федерального медико-биологического агентства.
Публикации по материалам диссертации. Опубликовано 5 научных работ по материалам представленной к защите диссертации, из них 2 публикации в ведущих рецензируемых научных журналах из перечня ВАК РФ.
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 98 страницах компьютерного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, имеет 6 таблиц, 24 рисунка. Указатель литературы содержит ссылки на 101 отечественных и 53 зарубежных авторов.
Проблемы и цели научных исследований и методы лечения ожогов кожи
Проблемы лечения ожоговых поражений кожи привели к созданию в 1960 и 1965 г.г. Международного ожогового общества, задачами которого являются: 1. Распространение информации о состоянии научных исследований в области лечения и профилактики ожогов; 2. Организация и содействие научным, терапевтическим и социологическим исследованиям в области ожоговых поражений: 3. Разработка более эффективных методов лечения ожогов; 4. Подготовка квалифицированных кадров по лечению ожогов всех степеней, включая первую помощь; 5. Организация сотрудничества хирургов и сестер всех стран по проблемам лечения ожогов [80].
Существование Международного ожогового общества и интерес врачей иных специальностей (пластических хирургов, ортопедов, терапевтов, педиатров, психиатров, бактериологов, социологов и диетологов) ожоговых центров в значительной степени способствовали расширению наших знаний в этой области [80]. В то же время, несмотря на большой интерес врачей всего мира к данной проблеме, практический результат лечения обожженных больных остается по-прежнему довольно скромным. Прогресс в хирургии, в том числе в комбусциологии, за последние 20-25 лет достигнут, главным образом, за счет развития анестезиологии, практической реализации интраоперационной патофизиологии, более углубленного изучения патогенеза ожоговой травмы [59; 28].
Говоря об ожоговой травме, необходимо разделить ее на термические ожоги, химические и электротравму. Термические ожоги в структуре ожогового травматизма занимают 80-90%, химические - 2,5-5,1%, электротравма- 1-2,5% [9; 15; 20; 47; 49; 74; 78; 83; 133; 143].
Химические ожоги и поражения электрическим током имеют свои патогенетические особенности. Глубина поражения мягких тканей, сроки очищения ран от девитализованных масс зависят от природы вещества (кислота, щелочь и т.д.), его концентрации, длительности экспозиции на мягких тканях и сроков завершения химической реакции в них.
Поражение электрическим током, так же как и химические ожоги имеет свои специфические особенности, оно, естественно, рассматривается отдельно от термических поражений [28]. Мы также не рассматриваем патогенез течения и лечения больных с химическими ожогами и пораженных электрическим током.
У больных с термическими поражениями, когда площадь ожога больше 200 см", развивается анемия, гипопротеанемия, наступает нарушение электролитного баланса, требуется проведение интенсивной терапии. [10; 39; 42; 62; 121]. Отмечено, чем больше площадь ожога, тем интенсивней должна быть терапия, ибо у пациента весом 70 кг при ожогах 10% поверхности кожи потеря жидкости в сутки составляет в среднем 2,5 литра, а затраты энергии на ее испарение составляют 1900 ккал/сут.
Наряду с нарушением электролитного баланса наступает интоксикация организма продуктами распада тканей и жизнедеятельности микроорганизмов, вегетазирующих на раневой поверхности и на нежизнеспособной ткани. Наряду с потерей электролитов наступает большая потеря иммунокомпетентных факторов [13; 27; 90; 98; 145].
Тяжелые изменения в организме обожженных, наступают уже при ожогах площадью более 15-20% , при ожогах 3 степени, занимающих 10% поверхности кожи, развивается ожоговая болезнь, степень тяжести которой в практической комбусциологии определяется по индексу Франка, согласно которому каждый процент поверхности ожога эквивалентен 1 условной единице, а глубокого - 3 единицам. Наряду с индексом Франка для более точной оценки степени тяжести поражения обожженного используется индекс тяжести поражения (ИТП). ИТП рассчитывается следующим образом: каждый процент ожога 1 степени считают за 0,5 у. е., Ша — за 2 у.е., Шб — за 3 у.е., IV степени - за 4 у.е.
При поражении органов дыхания, при термической травме значительно повышается сосудистая проницаемость и наблюдается более выраженная плазмопотеря. В связи с этим при комбинированном поражении кожи и дыхательных путей для оценки ИТП к расчетному ИТП кожного покрова добавляют условные единицы в соответствии с тяжестью и глубиной поражения дыхательных путей: - легкая степень тяжести - 3 у.е.; - средняя степень тяжести - 6 у.е.: - тяжелая степень - 9 у.е. При термоингаляционном поражении дыхательных путей: - легкая степень тяжести - 10 у.е.; - средняя степень тяжести — 20 у.е.: - тяжелая степень - 30 у.е. [7; 35; 103; 146].
При ожоговой болезни выделяют два патогенетических источника, приводящих к нарушению гемостаза организма: это разрушение обширных тканевых массивов, которые становятся источником и индуктором биологически активных веществ, проникающих в кровяное русло и активирующих в нем патофизиологические эффекты; другим источником биологически активных веществ являются органы и ткани, находящиеся в состоянии гипоксии. [43; 44; 97; 107]. Все эти процессы приводят к нарушению гемостаза, а именно: наступает нарушение транскодов электронов в уникальной цепи митохондрий; интенсифицируется синтез и окисление катехоламинов, активируется система ксантиноксидазы, наступает активация фагоцитов; появляются каталитически активные ионы металлов переменной валентности; образуются радикалы — инициаторы. [86; 88]. Все это обуславливает развитие генерализованного спазма сосудов кожи и надкостной жировой клетчатки, расширяет сосуды мышц и внутренних органов, повышает общее периферическое сосудистое сопротивление. В результате компенсаторной централизации и перераспределения объемного кровотока в жизненно важных органах развивается гипоксия периферической ткани [11; 44; 91; 104; 115].
Современные представления об особенностях патогенеза ожоговой травмы
Активация симпато-адреналовой системы, которая проявляется в повышении в 6-8 раз катехоламинов, значительном нарушении реологических свойств крови (повышение вязкости крови, изменение ее физико-химических свойств), гемоконцентрации и гиперкоагуляции, прогрессировании нарушения микроциркуляторных нарушений, приводит к появлению вторичных некрозов в обожженных участках кожи и пораженных тканях, к тяжелым осложнениям, к развитию респираторного и метоболическому ацидозу [13; 35; 97; 101; 108]. Нередко на фоне тяжелых метаболических и микроциркуляторных нарушений появляются эрозии и язвы желудочно-кишечного тракта, развиваются печеночно-почечная и сердечно-легочная недостаточность [42; 77; 106; 111].
В настоящее время известно, что возникновение и развитие широкого круга воспалительных заболеваний сопровождается активацией свободнорадикальных реакций (СРР). Не составляют исключение и события, протекающие в процессе заживления ран вообще и ожоговых в частности. Процесс заживления ран находится под контролем разнообразных цитокинов. Активный выброс провоспалительных цитокинов и медиаторов воспалений вызывает во многих органах и тканях повреждение, разрушение структурно-функциональных единиц органов, приводящее к развитию у обожженных иммунной, органной и полиорганной недостаточности [86; 140].
У обожженных с обширным ожогом кожи уже в первые минуты после травмы происходит нарушение гемо- и лимфадинамики метаболизма, кислотно-основного состояния крови лимфы, функциональные нарушения печени и почек, что без интенсивных реанимационных мероприятий может привести к летальному исходу [9; 49; 103].
В крови повышается концентрация активированной формы кислорода (АФК), что вызывает увеличение перекисного окисления липидов (ПОЛ). АФК и продукты ПОЛ нарушают сократительную функцию миокарда, вызывают спазм сосудов головного мозга и паралич капилляров мышц, повреждают эндотелий микроциркуляторного русла, конструкцию капилляров легких, что ведет к прогрессированию гипоксии. ПОЛ снижают пластичность эритроцитов, что способствует прогрессированию анемии. Повышение уровня АФК и продуктов ПОЛ в сыворотке крови нарушают кровоток в микрососудах желудка, что приводит к образованию язв [97; 132; 134]. Повышение активности АФК способствует раннему возникновению сепсиса у обожженных больных [43; 117; 142]. Таким образом, увеличение в крови и тканях АФК и ПОЛ оказывает токсическое воздействие на все органы и системы, и назначение ингибиторов перекисного окисления липидов (мексидола, серотоина) патогенетически оправдано [6; 26; 29; 85].
Нарушение микроциркуляции на фоне интенсивного поступления в кровяное русло продуктов распада тканей, токсинов бактериальной и не бактериальной природы, приводит к поражению почек и печени, что проявляется в некрозе эпителия канальцев, нарастании отека во всех структурных компонентах почек, особенно в клубочках и межканальцевой интерстиции, и, как следствие, у обожженных больных на фоне тяжелой интоксикации наступает нарушение электролитного состава крови, усугубляется тяжесть эндогенной интоксикации [25; 133].
Наряду с почками при термической травме наступают тяжелые повреждения печени с возникновением внутрипеченочного холестаза. Блокада клеток Купфера продуктами распада приводит к нарушению антителообразования в системе комплемента, что в свою очередь ведет к угнетению иммунитета и провоцирует развитие экзо- и эндогенной инфекции, способствует углублению эндотоксикоза и полиорганной недостаточности уже в раннем периоде ожоговой травмы [47; 48; 103; 100; 141; 142; 162].
Обширная ожоговая травма, нарушая клеточные и гуморальные звенья иммунитета, вызывает системную воспалительную реакцию и способствует развитию ожоговой болезни, что сопровождается генерализованным клеточным поражением всех органов обожженного [46; 119; 135]. В обожженной коже и неповрежденных участках кожи образуются высокомолекулярные соединения [94; 117], которые затем вызывают диффузное повреждение эндотелия в зоне микроциркуляции, что приводит к выходу внутрисосудистой жидкости и плазменного белка в интерстиции -формируется пустое пространство [50; 83; 87; 132; 150].
Таким образом, в патогенезе ожоговой болезни отмечается нарушение всех систем гемостаза человека - иммунологической и гормональной, в обменных процессах, которые обуславливают специфическое течение воспалительного процесса, приводящего к развитию полиорганной недостаточности, являющейся основной причиной летальности у обожженных больных [102; 114].
Учитывая особенности патогенеза ожоговой болезни и исходя из них перед лечащим врачом стоят сложные и трудные задачи:
провести адекватное общее лечение, способствующее нормализации показателей гемостаза;
быстро, насколько это возможно, закрыть всю площадь ожоговой раны, добиться, по возможности, ее скорейшего заживления [132].
Для местного лечения ожоговых поражений кожи, которые многие исследователи называют ожоговыми ранами, так как они после отторжения ожогового струпа, действительно приобретают свойства раны, в зависимости от стадии раневого процесса, врачи решают одни и те же задачи: борьба с инфекцией и стимуляция заживления ожоговых ран. К сожалению наши сегодняшние знания различных проблем, возникающих при термических поражениях и при стимуляции ран другого генеза, пока ещё ограничены [80]. Четверть столетия назад В. Рудовский и соавторы [80] писал: «Мы должны признать, что решение вопроса о том, где эмпиризм уже заменен хорошо документированными клиническими и экспериментальными фактами, является чрезвычайно трудным». Вот почему ни одну проблему при термических поражениях нельзя считать полностью разрешенной [80].
Мы должны указать на существующий недостаток знаний по многим аспектам патофизиологических изменений при тяжелых ожогах и в определении точных критериев эффективного лечения так называемой ожоговой болезни. Современное лечение ожогов ограничивается симптоматической и замещающей терапией наиболее выраженных нарушений. Менее заметные изменения уровня некоторых органических и неорганических веществ в организме во время тяжелой ожоговой болезни все еще не определяются при рутинных лабораторных исследованиях [80].
Проведенные в последние годы экспериментальные и клинические исследования послеоперационных ран [65] показали, что локальное воздействие NO-СГП на поверхность ран вызвало активацию продукции фагоцитами периферической крови АФК и оксида азота, что, по-видимому, приводит к увеличению продукции цитокинов и факторов роста, снижению асимметрии температуры в области раны и улучшению микроциркуляции крови. В конечном итоге это обуславливает ускорению заживления ран в клинике [34].
Общая характеристика исследуемых материалов, экспериментальных животных и методов лечения
Для решения поставленных в диссертационной работе задач, выяснения эффективности применения методики ФДТ- при лечении ожоговых ран было проведено экспериментальное исследование на моделях ожоговых ран у крыс. Экспериментальные исследования выполнены в соответствии с приказом № 755 МЗ СССР от 12.08.77 г. на 170 нелинейных крысах массой 250±20 г. Все животные содержались в одинаковых условиях виварного режима, прошли карантинный отбор и были в зависимости от цели исследования разделены на две серии опытов. В первой серии опытов изучали эффективность результатов местного использования метода ФДТ с фотодитазином и холосенсом в форме раствора и геля при лечении ожоговых ран у крыс. Распределение животных первой серии в зависимости от метода лечения по группам представлено в таблице 2. Как следует из табл. 2, крысы первой серии опытов, с учетом применяемого метода лечения, были в свою очередь разделены на четыре группы - одну контрольную и три опытные.
Фотосенсибилизатор Фотодитазии. Препарат Фотодитазин относится к препаратам нового поколения. Он создан на основе производных хлорофилла «А» и обладает сильным поглощением как в полосе Соре (400 нм), так и в красной области спектра с максимумом на 662 нм. Максимум флуоресценции фотосенсибилизатора Фотодитазин находится в области 660-680 нм. При внутривенном введении максимальный флуоресцентный контраст между опухолью и окружающими здоровыми тканями достигается в течение первых 1.5-2 часов, при этом полное выведение фотодитазина из организма происходит в течение 28 часов. Фотодитазин также является препаратом анионного типа.
В настоящее время в клинической практике для проведения фотодинамической терапии используются гели на основе комплексов фотодитазин - полимер.
По данньм литературы такими водорастворимыми биосовместимыми полимерами, способными к образованию гелей, являются: поливиниловый спирт (ЛВС), поливинилпирролидон (ПВП), поливинилацетат (ГЮА), поливинилкапролактам (ПВК), натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), содержащая анионогенные группы, полидиметилдиаллиламмоний хлорид (ПДМА), содержащий боковые катионные группировки, сополимеры этилен- и пропилен-оксида - плюроники, и хитозан. В этом ряду особо следует отметить природные полисахариды хитозаны (представляющие собой частично или полностью деацетилированные хитиновые полимеры). Хитозаны, благодаря наличию у них целого ряда уникальных свойств (бактерицидность, биосовместимость, отсутствие токсичности, биодеградируемость, высокая сорбционная способность), а также практически неисчерпаемым природным запасам, могут оказаться наиболее удобным полимерным носителем для иммобилизации ПВС с целью использования в ФДТ.
В отсутствие ПВС поливинилпирролидон и поливинилкапролактам не способны к образованию пленок..
Таким образом, все полимеры, кроме полидиметилдиаллиламмоний хлорида (ПДМА), оказались нетоксичными и могут быть использованы в качестве носителей для иммобилизации фотодиазина. Дальнейший план работы с комплексами ФД-амфифильный полимер при ФДТ: 1. Сравнительный анализ эффективности комплексов фотодитазин-полимер для всех протестированных полимеров при ФДТ инфицированных ран. 2. Исследование эффективности лечения в зависимости от содержания фотодитазина в комплексе полимер-фотодитазин. 3. Исследование влияния комплексов на факторы роста, иммунную активность организма при лечении инфицированных ран методом ФДТ. 4..Исследование возможности использования комплексов в хирургии при лечении методом ФДТ помимо ожоговых ран, ран другого генеза, как это было проведено на примере огнестрельной раны. Фотосенсибилизатор Холосенс. Поиск фотосенсибилизаторов с улучшенными характеристиками в последнее время привел к созданию нескольких интересных соединений. В частности, например, катионные фталоцианины оказались весьма перспективны с точки зрения скорости выведения их из тканей организма, а один из представителей этого семейства (Chol8PcZn) показал неплохие результаты по фотодинамической активности. Это соединение получило название Холосенс. Препарат Холосенс является одним из немногих препаратов катионного типа и первоначально разрабатывался в ГНЦ РФ "НИОПИК" как препарат для антибактериального воздействия различного назначения.
Фотосенсибилизатор Фотосенс. Представляет собой сульфированный фталоцианин алюминия, разработанный в ГНЦ "НИОПИК". Разрешен к мецинскому применению у больных в качестве фотосенсибилизатора при фотодинамической терапии рака кожи, слизистой оболочки полости рта и языка в дозировке 125-500 мкг/мл. Показания и противопоказания к его применению для лечения гнойно-воспалительных заболеваний гнойных ран изложены в монографии Коробаева У.М., Толстых М.П., Гейниц А.В. «Фотохимическая терапия гнойных ран и трофических язв» [ 57 ]. Содержание активного начала фотодитазина в водном растворе и геле было 10 мг/мл, а холосенса 0,05 мг/мл. Гель фотодитазина получена методом комплексообразования лекарственного средства с амфифильными полемерами (Институт химической физики РАН), а холосенса специалистами Института общей физики им. А.М.Прохорова РАН.
Изучение in vivo проникающей способности фотосенсибилизаторов в различных лекарственных формах в формирующейся ткани ожоговой раны
Дизайн эксперимента. В работе были исследованы следующие фотосенсибилиазторы: 1. Фотодитазин (раствор); 2. Фотодитазин (гель); 3. Холосенс (раствор); 4. Холосенс (гель); 5. Фотосенс (раствор). В работе была использована методика измерений нормированных спектров флуоресценции, разработанная для непигментированных мягких тканей при терапевтических концентрациях экзогенного флуоресцентного маркера. Это позволяет проводить неинвазивные и воспроизводимые измерения накопления фотосенсибилизатора в биотканях. В работе были исследованы следующие фотосенсибилиазторы: 6. Фотодитазин (раствор); 7. Фотодитазин (в форме геля); 8. Холосенс (раствор); 9. Холосенс (микрокапсулы); 10. Фотосенс (раствор). Препараты наносили местно на область ожоговой травмы. Через 20, 40, 60 минут после местного нанесения препаратов проводили измерения в области ожоговой травмы.
Спектрально-флуоресцентные измерения показали, что при местном нанесении фотосенсибилизаторов в зоне ожоговой травмы распределение их флуоресценции носит очаговый характер, что свидетельствует о крайне неоднородном распределение по наружной поверхности струпа при местном нанесении. Распределение интенсивности флуоресценции фотосенсибилизаторов по внутренней поверхности струпа было более однородно, спектры были более однородны и воспроизводимы по форме и по интенсивности. При местном нанесении Фотодитазина его флуоресценция достоверно детектировалась на внешней и внутренней поверхности струпа во все сроки наблюдений (рис.1) Полученные данные свидетельствуют о диффузии препарата в глубину струпа при обеих лекарственных формах (раствор, гель).
После местного нанесения раствора Холосенса на внутренней поверхности струпа во все сроки наблюдений на наружной поверхности струпа регистрировались спектры гораздо более высокой интенсивности (рис. 2). Необходимо отметить, однако, что достоверная интерпретация результатов спектрально-флуоресцентных измерений в данном случае затруднительна из-за значительной неоднородности формы регистрируемых спектров. В спектрах регистрировались три полосы флуоресценции с максимумами на 675, 705, 742 нм, при этом наблюдалось перераспределение их интенсивностей. Для правильной интерпретации результатов необходимо провести измерения флуоресценции контрольных растворов Холосенса в различных концентрациях, в том числе в форме геля.
Представленные результаты демонстрируют выраженную разницу в распределении фотосенсибилизатора: интегральная интенсивность экзогенной флуоресценции с внешней стороны струпа в 7-20 раз выше, чем с внутренней.
При нанесении геля Холосенса регистрируемые спектры имели форму, отличную от формы спектров, регистрируемых при нанесении раствора Холосенса (рис. 3). В частности, наблюдалось уширение спектров экзогенной флуоресценции, которое может быть связано с изменение фотофизических свойств фотосенсибилизатора в процессе выработки геля Интегральная интенсивность флуоресценции, регистрируемой с внутренней стороны струпа, в среднем была в 25 ниже, чем с внешней поверхности, что свидетельствовало о низкой диффузии микрокапсул Холосенс вглубь ткани. распределении фиіисснсииилизсиира а ижи Гинои рамс, сіи флуоресценция регистрируется только с внешней стороны струпа, в то время как с внутренней стороны струпа интегральная интенсивность экзогенной флуоресценции в 25 раз меньше.
Таким образом, при обеих форма введения (раствор, гель) фотосенсибилизатор Холосенс показал слабое проникновение в ткани ожоговой травмы.
В случае Фотосенса, типичные спектры флуоресценции этого препарата достоверно детектировались как с внутренней, так и с внешней поверхности струпа, при этом распределение интенсивности флуоресценции Фотосенса было более однородно (рис. 4), чем в случае Холосенса. Интегральная интенсивность флуоресценции на внутренней поверхности
струпа была в среднем в 7 раз меньше таковой, измеряемой с внешней поверхности струпа. Полученные данные свидетельствуют о диффузии препарата в глубину струпа в указанные сроки наблюдения.
![Вакуум-терапия в комплексном лечении хронических ран [Электронный ресурс]](/i/i/4334/205578.png "Вакуум-терапия в комплексном лечении хронических ран [Электронный ресурс] Антонюк Андрей Васильевич")
![Применение региональной гидропрессивно-сорбционной терапии в комплексе лечения больных с гнойными ранами [Электронный ресурс]](/i/i/4490/206405.png "Применение региональной гидропрессивно-сорбционной терапии в комплексе лечения больных с гнойными ранами [Электронный ресурс] Абакумов Валерий Иванович")
