Введение к работе
Актуальность проблемы
Повреждение печени при ее обширной резекции, токсическом или вирусном поражении связано с риском развития острой печеночной недостаточности (ОПН). ОПН является серьезным ограничивающим фактором в хирургии печени, может осложнять течение ряда внепеченочных заболеваний и сопровождается высокой летальностью [Э.И.Гальперин, 2005; С.В.Журавель, 2004; С.М.Чудных, 2000]. Эффективность современных способов лечения ОПН является достаточно низкой и, хотя большие надежды возлагаются на трансплантацию печени, в экстренных ситуациях такая операция трудно осуществима [С.В.Журавель, 2004; H.Bismuth, 1996].
В ряде экспериментальных работ было показано, что супернатанты (надосадочный слой, получаемый при центрифугировании гомогената печени) из регенерирующей и неонатальной печени способны усиливать регенерацию и улучшать функциональное состояние печени после ее повреждения [J. Terblanche и др., 1980; Н.Л.Сванадзе, 1984; D.R. LaBrecque и др., 1991; A.Francavilla и др., 1994; A.P.Margeli и др., 2003; K.N.Tzirogiannis и др., 2005]. Однако в данных работах имелись значительные различия в подходах к получению супернатантов, оценке их действия на печень и их очистке от балластных веществ.
Источниками супернатантов служили: печень неонатальных животных, печень животных после ее резекции, а также печень животных после ее токсического повреждения. Однако ни в одной из работ не производили сравнения супернатантов, полученных из разных источников.
Изучение действия супернатантов на печень проводили на моделях с интактной печенью, частичной деваскуляризацией печени, резекцией печени различного объема, а также с химическим повреждением печени
гепатотоксинами [T.E.Starzl и др., 1979; Н.Л.Сванадзе, 1984; A.Francavilla и др., 1987; М.Н. Mei и др., 1993; A.P.Margeli и др., 2003]. Эти модели часто были сложными и дорогими с позиций их пригодности для оценки действия супернатантов на печень.
Методы оценки действия супернатантов включали оценку синтеза ДНК по включению меченного тритием тимидина, подсчет числа митозов в печени, определение активности АЛТ и ACT в сыворотке крови, а также определение содержания холестерина и желчных кислот в желчи [НЛ.Сванадзе, 1984; D.R. LaBrecque и др., 1987; A.Francavilla и др., 1994; S.E.Theocharis и др., 1998; K.N.Tzirogiannis и др., 2005]. Как правило, исследователи использовали сочетание нескольких тестов, и ни в одной из работ не производили сравнения оценочных методов с целью выбора наиболее простого и информативного теста.
Исследования по изучению восстановления печени показали, что исключение из процесса одного из факторов регенерации в большинстве случаев приводит к нарушению всего процесса регенерации [А. Blindenbacher и др., 2003; М.М. Markiewski и др., 2004; A. Natarajan и др., 2007; Y. Yamada и др., 1998; A. Wullaert и др., 2007]. В связи с этим, мы предположили, что для восстановления печени после повреждения необходима сбалансированная совокупность присутствующих в регенерирующей или неонатальной печени активных ингредиентов. Получение такой совокупности в составе супернатанта для дальнейшей его очистки требует выявления оптимального источника получения достаточно большого количества супернатантов, разработки простой и дешевой модели повреждения печени, а также выбора быстрого и информативного метода оценки действия супернатантов на печень.
Цель работы:
улучшить состояние печени после ее обширной резекции или
токсического повреждения под действием супернатантов, полученных
из регенерирующей или неонатальной печени в эксперименте.
Задачи исследования:
разработать простую и дешевую модель повреждения печени, удобную для изучения действия супернатантов;
определить быстрый и информативный метод оценки действия супернатантов на поврежденную печень;
оценить действие супернатантов, полученных из печени крысы после ее 70% резекции, из печени крысы после ее токсического повреждения, а также из печени неонатального поросенка;
установить оптимальный источник получения супернатантов для их последующей очистки от балластных веществ.
Научная новизна работы
Супернатанты, полученные из печени крысы после ее 70% резекции или токсического повреждения, а также супернатант, полученный из печени неонатального поросенка, позволяют улучшить состояние пораженной печени и ускорить ее восстановление.
Супернатант из печени неонатального поросенка обладает той же восстановительной способностью, что и супернатант, полученный из регенерирующей печени крысы.
Максимальное действие супернатантов, полученных из печени крысы после ее резекции или токсического повреждения, начинает проявляться спустя 24 - 36 ч, тогда как действие супернатанта из печени неонатального поросенка - через 48 ч. К этому времени эффекты всех трех супернатантов практически одинаковы.
Практическое значение работы
Разработана модель токсического повреждения печени мышей, которая позволяет получать результаты, сходные с таковыми на двух других крысиных моделях, являясь при этом наиболее простой и дешевой.
Установлена более высокая информативность метода оценки состояния печени по активности ACT и АЛТ в крови по сравнению с методом оценки по остаточной концентрации ИЦЗ в крови.
Показано, что оптимальным источником получения супернатанта, пригодного для последующей очистки, является печень неонатального поросенка, использование которой позволяет получать супернатант в больших количествах.
Основные положения, выносимые на защиту
Модели 70% резекции печени у крыс, повреждения печени тиоацетамидом у крыс и мышей являются адекватными для изучения возможности восстановления поврежденной печени при действии супернатантов.
Наиболее простой и дешевой является модель повреждения печени тиоацетамидом у мышей.
Определение активности ACT и АЛТ в сыворотке крови животных является информативным методом оценки действия супернатантов при повреждении печени.
Введение супернатантов из печени крысы после 70% резекции и неонатальной печени поросенка животным после повреждения печени приводит к значимому уменьшению степени повреждения печени и позволяет ускорить ее восстановление.
Эффекты супернатантов, полученных из печени крысы после 70% резекции, печени крысы после токсического повреждения и печени неонатального поросенка, являются примерно одинаковыми.
6. Оптимальным источником получения супернатанта является печень неонатального поросенка, использование которой позволяет получать супернатант в больших количествах.
Апробация работы
По материалам диссертации опубликовано две работы.
Материалы диссертации доложены на Всероссийской научной конференции с международным участием «Успенские чтения» (Тверь, 2008).
Апробация работы проведена на совместном заседании курса хирургической гепатологии при кафедре хирургии ФППОВ ММА им. И.М. Сеченова и отдела хирургии печени НИЦ ММА им. И.М. Сеченова.
Структура и объем работы
Диссертация изложена на 157 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов с их обсуждением, заключения, выводов и списка литературы, содержащего 255 источников (12 отечественных и 243 зарубежных). Диссертация иллюстрирована 45 таблицами и 47 рисунками.
