Введение к работе
Актуальность проблемы. В основу метода адресованной модификации нуклеиновых кислот (НК) положена внутрикомплексная реакция полинуклеотида и комплементарного определенному его участку реакционноспособного производного адресующего олиго-нуклеотида. Применение данного подхода открывает широкие возможности для направленного мутагенеза, химического фраг-ментирования НК, а также избирательного воздействия на их функциональную активность в живых клетках. Успешное решение данных задач возможно лишь на базе высокоэффективных и селективных олигонуклеотидных реагентов. Трудоемкость синтеза препаративных количеств протяженных олигонуклеотидов, сложности, связанные с выделением и очисткой их реакционноспо-собных производных, с одной стороны, а также высокая частота встречаемости сайтов узнавания коротких олигонуклеотидов и низкая стабильность их комплексов с НК-мишенью с другой, делают весьма актуальной разработку методов повышения эффективности и селективности действия реагентов с коротким оли-гонуклеотидным адресом. Примером может служить предложенный нами ранее подход, основанный на использовании эффекторов реакции модификации - н-(2-оксиэтил)феназиниевых (Phn) производных олигонуклеотидов, образующих прочный комплекс с НК-мишенью в непосредственной близости от участка связывания реагента.
Цель работы. Цель настоящей работы заключалась в изучении особенностей и преимуществ эффекторного варианта комплементарно адресованной модификации, а также в попытке создания на его базе универсального метода направленного химического фрагментирования однонитевых НК.
Научная новизна. В настоящей работе впервые проведена выоокоселективная модификация одкоцепочечного фрагмента ДНК алкилирущими производными три-, тетрануклеотидов в присутствии Phn-производных олигонуклеотидов в качестве эффекторов. Предлагаемый в работе подход, основанный на использовании пары з,5'-ди-РЬп-производных тетрануклеотидов, фланкирующих тетрануклеотидный реагент при образовании комплекса с мишенью, позволяет осуществлять направленную химическую "рестрикцию" достаточно протяженных однонитевых ДНК практически по любому заранее выбранному остатку гуанозина с выхо-
дом до 39».
Практическая ценность. Предложенный и экспериментально апробированный вариант метода комплементарно адресованной модификации НК может быть успешноиспользован для повышения эффективности и селективности действия реакционноспособных производных олигонуклеотидов с коротким адресом (вплоть до три-, тетрануклеотидов). Он оказался продуктивным не только при модификации фрагмента ДНК с маловыраженной вторичной структурой, но и в случае высокомолекулярных РНК, таких как 16s рРНК Б. cat*., обладающих слоеной пространственной организацией (Зенкова М.А. и др., 1991).
Продемонстрированный в работе факт достаточно эффективной сайт-специфической модификации фрагмента ДНК при помощи реагента и эффекторов на основе тетрануклеотидов открывает реальную возможность создания универсального метода направленного химического фрагментировашя однонитевых нуклеиновых кислот.
Апробация работы. Результаты работы докладывались на международном симпозиуме "Перспективы терапевтического и диагностического применения олигонуклеотидных производных" (Новосибирск, 1988), iv Всесоюзном совещании "Органическая химия ДНК-дуплексов" (Киев, 1989), vii Симпозиуме по химии компонентов нуклеиновых кислот (Чехословакия, 1990),
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы.
Объем работы. Диссертационная работа изложена на 106 страницах машинописного текста, состоит из 3 глав, введения, выводов, примечаний, списка цитируемой литературы из 135 наименований и содержит 5 таблиц и 6 рисунков.
